全 文 :2009 年 2月第 6卷第 4期·药品鉴定·
中国医药导报 CHINA MEDICAL HERALD
茋类(stilbene)是具有二苯乙烯母核或其聚合物的一类
物质的总称,它具有广泛的生物活性,除早已知的抗菌作用,
近年来又被发现有降血脂、降血糖、保肝、扩张毛细血管、改
善微循环、扩张冠状血管及降压等作用[1]。藏边大黄中含有丰
富的茋类化合物,目前有文献[2-3]报道其具有较好的降血糖作
用,已成为研究的热点。 本课题从藏边大黄中分离出三个二
苯乙烯化合物, 其中 piceatannol-4-O-β-D-glucopyranoside
是其主成分,Piceatannol 是这三个化合物相同的二苯乙烯母
核,推测它可能是藏边大黄的有效成分之一,故本实验对其
进行了含量测定,为进一步开发藏边大黄资源打下基础。
1 仪器与试药
1.1 仪器
日本岛津 LC-10AT HPLC 仪;SPD-10A 紫外可见检测
器;Kromasil ODS 色谱柱 (150 mm×4.6 mm, 5 μm);美国奥泰
SS420X 色谱工作站;超声清洗器 KQ-2200(昆山市超声仪器
有限公司);乙腈(默克公司,色谱纯);水为超纯水;其余试剂
均为分析纯。
1.2 试药
Piceatannol 为自制对照品,经 mp、1H-NMR、13C-NMR 证
实,HPLC 峰面积归一化法测定其含量达 98%以上; 样品Ⅰ
和样品Ⅱ藏边大黄于 2006 年 7 月采于西藏拉萨拉曲新城藏
药种植基地 (海拔 3 600 米); 样品Ⅲ和Ⅳ藏边大黄分别为
2005 年 6 月和 2006 年 7 月西藏药检所提供,经笔者鉴定为
Rheum emodi Wall.。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Kromasil ODS 色谱柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm);流动相为
乙腈-水(25∶75,V/V),流速为 1.0 ml/min;检测波长为 325 nm;
柱温为 30℃;进样量为 10 μl。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取 Piceatannol 对照品适量,
用流动相溶液溶解并稀释配制成浓度为 23.64 μg/ml 的对照
品溶液。 按“2.1”色谱条件进行测定,结果见图 1。
2.2.2 供试品溶液的制备 取藏边大黄 (过 65 目 )约 0.6 g,
精密称定,置具塞锥形瓶中,加甲醇适量,超声处理 30 min,
放冷 ,摇匀 ,滤过 ,挥干 ,残渣加流动相溶解并转移至
50 ml 容量瓶中 ,用流动相稀释至刻度 ,摇匀 ,滤过 ,取续
滤液作为供试品溶液 。 按 “2.1”色谱条件进行测定 ,结
果见图2。
2.3 线性及线性范围
取 Piceatannol 对照品适量,精密称定,加流动相制成浓
度分别为 0.005 91、0.011 82、0.023 64、0.035 46、0.047 28、
0.059 10 mg/ml 的对照品溶液。 进样 10 μl ,按“2 .1 ”色谱
条件测定。 以进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制
标准曲线, 得回归方程为 Y=271.369 8×104X+1.115 9×104 (r=
0.999 8)。 结果表明,Piceatannol 在 0.059 1~0.591 0 μg 范围
内有良好的线性关系。
2.4 精密度实验
精密吸取 Piceatannol 对照品溶液(23.64 μg/ml)10 μl,重
复进样 6 次,测定峰面积,其峰面积的 RSD 为 0.84%。
2.5 重复性实验
取同一批药材(样品Ⅲ),6 份,按“2.2.2”项下方法制成
供试品溶液,测定。 其含量分别为 0.191%、0.195%、0.194%、
0.193%、0.196%、0.201%,平均含量为 0.195%(RSD=1.75%,n=6)。
藏边大黄中茋类化合物 Piceatannol的含量测定
刘 兵,谢韵琪
(广州中一药业有限公司,广东广州 510620)
[摘要] 目的: 建立藏边大黄中茋类化合物 Piceatannol 的含量测定方法。 方法: 采用 HPLC 法, 色谱柱为 Kromasil
ODS 色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-水(25∶75,V/V);流速为 1.0 ml/min;检测波长为 325 nm;柱温为
30℃。 结果:Piceatannol 在 0.059 1~0.591 0 μg 范围内线性关系良好 (r=0.999 8), 平均回收率为 98.01%,RSD 为
0.76%。 结论:该法简便、准确、重复性好,可作为藏边大黄药材品质评价的含量测定方法。
[关键词] 藏边大黄;HPLC;茋类化合物;Piceatannol
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] B [文章编号] 1673-7210(2009)02(a)-040-02
Determination of piceatannol in Rhubarb from Rheum emodi Wall.
LIU Bing, XIE Yun-qi
(Guangzhou Zhongyi Pharmaceutical Co.,Ltd., Guangzhou 510620, China)
[Abstract] Objective: To establish a method for the determination of Piceatannol in Rhubarb from Rheum emodi Wall..
Methods: HPLC was adopted.A Kromasil C18 column (150 mm×4.6 mm, 5 μm) was used with the mobile phase consisted
of acetonitrile-water (25∶75,V/V),the flow rate was 1.0 ml/min,the column temperature was maintained at 30℃,the detec-
tive wavelength was set at 325 nm. Results: This method had good linearity in the range of 0.059 1-0.591 0 μg(r= 0.999 8),
and the average recovery was 98.01% with a RSD of 0.76% for Piceatannol. Conclusion: This method is simple, accurate,
and suitable for the quality control of Rhubarb from Rheum emodi Wall..
[Key words] Rheum emodi Wall.; HPLC; Stilbene; Piceatannol
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2.6 稳定性实验
取 Piceatannol 对照品溶液(23.64 μg/ml),分别于 0、2、4、
6、12 h 进样 10 μl,测定。其峰面积 RSD 为 1.10% (n=5);取供
试品溶液(样品Ⅲ), 分别于 0、2、4、6、12 h 进样 10 μl,其峰
面积 RSD 为 1.13% (n=5)。 表明对照品溶液和供试品溶液在
12 h 内稳定。
2.7 加样回收率实验
取已知 Piceatannol 含量的样品Ⅲ,共 9 份,分为 3 组,分
别精密加入 Piceatannol 对照品溶液 (0.602 mg/ml) 0.8、1.0、
1.2 ml,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,进样测定,计算
加样回收率 。 其 Piceatannol 的回收率分别为 98.21% 、
98.96% 、97.63% 、98.67% 、97.51% 、99.21% 、97.04% 、97.23% 、
97.59%,平均回收率为 98.01%,RSD 为 0.76%。
2.8 样品测定
按“2.2.2”项下方法,分别将 3 批药材制成供试品溶液,
测定 Piceatannol 的含量,结果见表 1。
表 1 藏边大黄中 Piceatannol 含量
3 讨论
3.1 检测波长选择
取对照品,以 25%乙腈为溶剂,在 200~400 nm 波长范围
内做紫外扫描,结果 Piceatannol 在 325 nm 处有最大吸收,故
选择 325 nm 作为检测波长。
3.2 流动相的选择
参考文献 [4,5]中含量测定的方法,比较了不同比例的
乙腈-水流动相 , 结果发现在乙腈-水 (25 ∶75) 条件下 ,
Piceatannol 标准品峰与其他杂质峰完全分离, 保留时间适
宜。
[参考文献]
[1] 斯建勇 .天然茋类化合物及其生物活性 [J].国外医药 (植物药分册 ),
1991,6(4):155-156.
[2] 李军林 ,王志斌,李家实.藏边大黄降血糖作用的研究[J].中药材,1997,
20(5):249-250.
[3] 张杰,陈世伟 ,张焱 ,等.藏边大黄复合剂对糖尿病小鼠血糖的影响[J].
现代预防医学,2006,33(8):1344-1345.
[4] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2005.122-
123.
[5] 朱华,黄权芳,周燕华,等.HPLC 法测定广西不同产地何首乌中二苯乙
烯苷的含量[J].广西中医药,2006,29(6):52-54.
(收稿日期:2008-10-12)
峰面积
619 024
624 253
610 236
621 254
674 511
670 021
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
0.602 34
0.601 25
0.604 23
0.605 76
0.605 23
0.603 61
样号 取样(g) 含量(%)
0.181
0.183
0.178
0.180
0.196
0.195
平均含量(%)
0.182
0.179
0.196
图 2 藏边大黄供试品色谱图
图 1 Piceatannol 对照品色谱图
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究由韦克福雷斯特大学浸信会医疗中心专家主持。
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