全 文 ：第 21卷　第 4期 　　　　　　　　　　　　　　云南农业大学学报　　　　　　　 Vol.21　No.4
2006年　8月 　　　　　　　　　　JournalofYunnanAgriculturalUniversity　　　　　 Aug.2006
　收稿日期:2005-12-26　
　作者简介:赵红艳(1977-), 女 ,陕西咸阳人 , 在读硕士研究生 ,主要从事植物源农药的开发与研究。
坡柳种子提取物对 4种植物病原真菌的抑菌作用
赵红艳 ,杨美林
(云南农业大学植物保护学院 ,云南 昆明 650201)
摘要:采用菌落直径法进行抑菌试验 , 研究了坡柳种子提取物对几种植物病原真菌菌落生长的影响 , 研究结果
表明:乙醇提取物抑菌效果最好。 EC50的测定表明 , 乙醇提取物对燕麦镰刀菌的抑制中浓度(EC50)最低为
0.43g/L。坡柳种子乙醇提取物可为开发新的杀菌剂提供有价值的参考。
关键词:坡柳;提取物;抑菌作用;植物病原菌
中图分类号:S476.8　　文献标识码:A　　文章编号:1004-390X(2006)04-0467-04
TheInhibitoryEfectofExtractFromDodonaea
viscosaSeedonFourKindsPlantPathogens
ZHAOHong-yan, YANGMei-lin
(ColegeofPlantProtection, YunnanAgriculturalUniversity, Kunming650201, China)
Abstract:TheefectofextractfromDodonaeaviscosa(L.)Jacqseedsonseveralpathogenicfungusof
plantwasstudiedwithmethodofcoloniesdiametermeasuring.Theresultexperimentshowsthatanti-
fungalcomponentofDodonaeaviscosaseedswasmainlyfromethanolextraction.AfterEC50 werecar-
riedon, theresultindicatedthatEc50 ofethanolextractionagainstFusariumavenaceumislowestthatis
0.43g/L.Theresultofersreferenceforexploitinganewfungicide.
Keywords:Dodonaeaviscosa;plantextracts;antifungalactivity;plantpathogen
　　植物体中杀虫杀菌作用的活性成分 , 是新
农药研究开发的重要研究领域 , 它们不仅可以
作为仿生农药的模板 ,有的甚至可以直接作为
天然产物农药加以开发利用 [ 1 ～ 4] 。从丰富的植
物资源中寻找高效 、低毒的杀菌 、抑菌成分 , 并
开发无公害的植物源杀菌剂 ,已成为该研究领
域的热点 。在这方面 , 广泛应用的药用植物首
先成为被关注的研究对象 。
坡柳 [ Dodonaeaviscosa(Linn.)Jacq]又名车桑
子 、明油子 、明子柴 、透骨草等 ,属于无患子科的灌
木或小乔木 ,主要分布于全世界的热带和亚热带地
区 ,我国主要分布于西南部和南部 ,一般生长在干
旱的山坡 ,沙地和小树丛间 ,比较耐旱。是我国一
种重要的中药材 ,有清热解毒 、消炎镇咳 ,消肿解毒
等功效 [ 5 ～ 6] 。坡柳种子提取物对昆虫的拒食作用
已经有报道 [ 7] ,为了更全面地了解坡柳种子提取
物的多方面活性 ,本试验对其进行了抑菌活性的研
究和评价 ,希望从中寻找出有效的抑菌活性成份 ,
促进坡柳资源的开发利用 。
1　材料和方法
1.1　供试菌种来源
燕麦镰刀菌(FusariumavenaceumSacc.),梨黑
星病菌(VenturianashicolaTanakaetYamamoto),
烟草赤星病菌(AlternariaalternateFries),番茄早疫
病菌 [ Alternariasolani(El.etMart)Joneset
Grou] ,由云南农业大学植物保护学院农药系提供 ,
用 PDA扩大培养 。
1.2　供试植物材料
坡柳种子从云南生态有限公司购买 。
DOI :10.16211/j.issn.1004-390x(n).2006.04.015
1.3　提取用有机试剂
石油醚 、氯仿 、乙酸乙酯 、乙醇(化学纯),丙酮
(分析纯)。
1.4　提取物的制备
将坡柳种子在 45℃恒温干燥箱中烘干 ,再粉
碎过 40目筛 。用石油醚浸泡 24h,再经超声波提
取 30min。然后用滤纸过滤 ,滤液用旋转蒸发仪减
压浓缩除去溶剂 ,蒸干。滤渣再依次用氯仿 、乙酸
乙酯 、乙醇按上述方法浸泡 、超声波提取和浓缩。
即得到石油醚 、氯仿 、乙酸乙酯和乙醇提取物 ,冰箱
中密闭冷藏备用 。
1.5　提取物对几种植物病原真菌的抑菌率测定
采用生长速率测定法在室内测定各提取物的
抑菌活性 [ 8] ,称取坡柳种子石油醚提取物 10g用
20mL的丙酮溶解 ,然后定溶于 50mL的容量瓶 ,
即得到 0.2g/mL的溶液 。取其 25 mL于 50 mL
的容量瓶 ,用丙酮定溶为 0.1 g/mL,以下依次加
倍稀释 , 分别配 制成 0.2, 0.1 , 0.05 , 0.025,
0.012 5g/mL6个浓度 。无菌条件下 ,将供试菌
种用 8mm孔径的打孔器沿菌落边缘打出一定数
量的菌饼备用 。待培养基灭菌后 ,吸取上述配制
好的溶液各 5mL加入到冷却至 45℃左右的 95
mL的培养基内摇匀后 ,倒入 9 cm培养皿中制成
薄厚均匀的平板 ,分别制成 10.0 , 5.0 , 2.5, 1.25,
0.625g/L的带毒培养基 ,以 5mL丙酮代替 5mL
药液作对照。用接种针小心将菌饼放置在制备
好的培养基上 ,菌丝一面向下 。每皿接一块 ,然
后加盖并标记 ,置于(27 ±1)℃温箱中培养 。待
对照皿菌落生长接近培养皿边缘时 ,测量各处理
各重复的菌落直径 ,每个菌落按十字交叉法测量
2次 ,以其平均值代表菌落的大小计算抑菌率:抑
菌率 =[ (对照菌落直径 -菌饼直径)-(处理菌
落直径 -菌饼直径)/(对照菌落直径 -菌饼直
径)×100%
氯仿 、乙酸乙酯 、乙醇提取物的带毒培养基也
按石油醚的方法制作 。将提取物浓度对数作为变
量 x,抑菌率几率值作变量 y,用回归统计法求毒力
曲线方程 y=a+bx和相关系数 R,换算求 EC50
和 EC80。
2　结果与分析
2.1　坡柳种子不同提取物对 4种植物病原真菌菌
落生长的抑制效果
表 1　坡柳种子 4种提取物对 4种植物病原真菌菌落生长的抑制效果
Tab.1　TheinhibitoryefectofextractfromDodonaeaviscosaseedsonfourkindsplantpathogens
提取物
extract
浓度 /
(g· L-1)
constrction
菌落生长抑制率 inhibitioneffect
燕麦镰刀菌
　F.avenaceum　
番茄早疫病菌
　　A.solani　　
梨黑星病菌
　　V.nashicola　　
烟草赤星病菌
　　A.alternata　　
A/mm B/% A/mm B/% A/mm B/% A/mm B/%
石油醚
petroleum
ether
10.0 71.9±0.6d 14.34 62.6±0.3e 13.20 53.4±0.9d 10.28 76.2±0.7c 9.97
5.0 77.0±0.6c 7.51 68.7±0.4d 3.50 58.7±0.5c -0.20 87.6±0.1a -1.03
2.5 83.0±0.4b -0.53 74.1±0.3b -5.09 62.1±0.3b -6.92 83.2±0.2b -9.53
1.25 84.5±0.8a -2.55 75.9±0.8b -7.95 63.4±0.6b -9.49 82.7±0.7b -10.2
0.625 86.9±0.7a -5.76 77.6±0.3a -10.65 67.8±0.4a -18.18 76.9±0.5c -16.7
CK 82.6±0.6b - 70.9±0.7c - 58.6±0.5d - 69.4±0.5d -
氯仿
chlorform
10.0 54.5±0.5e 37.59 54.7±0.4e 29.88 39.0±0.5f 33.05 60.1±0.3e 21.65
5.0 60.3±0.4d 29.80 62.4±0.7d 18.32 44.1±0.4e 22.24 67.7±0.5d 10.23
2.5 68.0±0.3c 19.46 70.6±0.8c 6.01 49.1±0.5d 11.23 73.1±0.4c 2.11
1.25 79.6±0.5b 3.89 72.3±0.4b 3.45 52.7±0.3c 3.46 75.6±0.5a -1.65
0.625 80.2±0.4b 3.09 73.1±0.5ab 2.25 53.2±0.3b 2.38 76.2±0.3a -2.56
CK 82.5±0.6a - 74.6±0.3a - 54.3±0.4a - 74.5±0.4c -
468 云南农业大学学报 　　　　　　　　　　　　　　第 21卷
　　(续表 1)
提取物
extract
浓度 /
(g· L-1)
constrction
菌落生长抑制率 Inhibitioneffect
燕麦镰刀菌
　F.avenaceum　
番茄早疫病菌
　　A.solani　　
梨黑星病菌
　　V.nashicola　　
烟草赤星病菌
　　A.alternata　　
A/mm B/% A/mm B% A/mm B/% A/mm B/%
乙酸乙酯
ethylacetate
10.0 24.1±0.5f 79.77 29.3±0.5f 68.30 27.5±0.5f 60.45 47.0±0.4f 44.76
5.0 43.4±0.2e 55.21 42.8±0.5e 48.21 39.4±0.3e 36.31 60.9±0.8e 25.07
2.5 58.4±0.9d 36.13 54.8±0.3d 30.35 43.7±0.3d 27.59 63.4±0.3d 21.53
1.25 71.0±0.1c 20.10 63.5±0.8c 17.41 49.0±0.2c 16.84 69.3±0.3c 13.17
0.625 79.5±0.4b 9.28 69.5±0.4b 8.48 53.2±0.4b 8.32 75.6±0.7b 4.25
CK 86.8±0.1a - 75.2±0.2a - 57.3±0.3a - 78.6±0.1a -
乙醇
alcohol
10.0 14.9±0.3f 91.23 18.9±0.5f 82.47 21.8±0.3e 69.47 48.2±0.5f 41.91
5.0 22.1±0.2e 82.15 26.2±0.3e 70.73 27.1±0.6e 57.75 53.7±0.4e 33.96
2.5 29.1±0.5d 73.22 32.4±0.3d 60.77 33.2±0.4d 44.25 69.9±0.5d 10.55
1.25 35.6±0.5c 65.07 36.4±0.3c 54.34 39.3±0.7c 30.75 73.0±0.6c 6.07
0.625 40.0±0.5b 59.25 44.5±0.5b 41.31 42.6±0.3b 23.45 75.4±0.8b 2.60
Ck 86.9±0.3a - 70.2±0.7a - 53.2±0.9a - 77.2±0.8a -
　　注:(1)A代表 3个重复的平均菌落直径 , B代表抑菌率。
(2)表中同列数据后的字母相同表示经 DMRT法检测差异不显著(5%水平)。
表 2　坡柳种子的提取物对植物病原真菌的 EC50和 EC80
Tab.2　Ec50 andEC80 ofDodonaeaviscosaseedsonplantpathogens
提取物
extract
植物病原菌
plantpathogens
回归方程
regressionequation
相关系数(R2)
correlation
coeficient
　EC50 /(g·L-1)
efective
concentration
EC80 /(g·L-1)
efective
concentration
乙醇提取物
alcohol
燕麦镰刀菌 F.avenaceum y=0.920 4x+5.337 4 0.964 3 0.43 3.55
番茄早疫病菌 A.solani y=0.958 6x+4.761 4 0.834 4 1.77 13.44
梨黑星病菌 V.nashicola y=1.056 8x+4.447 9 0.995 3 3.12 20.93
烟草赤星病菌 A.alternata y=0.627 3x-2.067 3 0.963 0 - -
乙酸乙酯提取物
ethylacetate
燕麦镰刀菌 F.avenaceum y=1.750 7x+3.988 4 0.994 1 3.78 11.47
番茄早疫病菌 A.solani y=1.479 3x+3.936 9 0.995 2 5.23 19.45
3　讨论
(1)试验结果表明 ,坡柳种子的石油醚 、氯仿 、
乙酸乙酯 、乙醇 4种提取物对 4种供试植物病原菌
在 10g/L是都表现有抑菌活性 ,尤其乙醇提取物
的抑菌活性比其他 3种提取物都要好 ,这与已经报
到的乙醇提取物对小菜粉蝶幼虫有较强的拒食活
性也一致 ,提示抑菌活性物质可能为极性化合物。
(2)石油醚和氯仿提取物在低浓度下对 4种
病原菌都有不同程度的刺激生长作用 ,由于本试验
重点研究抑制生长作用 ,没有对刺激生长做深入研
究 ,笔者认为石油醚和氯仿对病原菌的刺激生长作
用很有价值 ,有必要做进一步的深入研究 。
(3)坡柳种子的提取物是一种混合物 ,对乙醇提
取物 ,有必要作深入的分离分析和筛选测定 ,确定其
活性成分 ,进行结构鉴定。从仿生学的角度人工模拟
合成高效 、低毒 、对环境无压力的新型杀菌剂。
(4)坡柳是一种灌木或小乔木 ,生长在草原上
被认为是一种杂草 ,由于他生长耐旱 ,萌发力强 ,所
以近年来将其作为固沙保土的树种 [ 10] 。在云南坡
柳是重要的造林树种 ,在金沙江河谷及景东 、南涧 、
巍山等地区被大量种植 [ 11] ,植物资源较为丰富 ,结
合其活性成分的深入研究 ,有望成为具有重要开发
价值的资源植物 。
(5)试验方法存在的缺点:①乙醇自身有较明
显的抑菌作用 ,影响了试验结果的准确性;②提取
液浓缩时 ,采用 50℃水浴锅加热 ,某些具杀菌作用
的挥发性成分或有效成分可能会损失或分子结构
469第 4期　　　　　　　赵红艳 ,等:坡柳种子提取物对 4种植物病原真菌的抑菌作用
因加热而变化;③有些物质在离体条件下 ,没有抑
菌活性 ,但可能会在活体上表现活性 [ 12] 。
[参考文献 ]
[ 1] 　马慕英.灵芝抑菌作用的实验研究 [ J] .食品科学 ,
1993, 14(5):58-59.
[ 2] 　张伟 , 檀建民.竹叶对食品致病菌的抑菌作用 [ J] .食
品科学 , 1998, 19(4):41-46.
[ 3] 　马小军 , 赵玲 ,杜程芳 , 等.滇白珠提取物抗细菌活性
的筛选 [ J] .中国中药杂志 , 2001, 26(4):223-226.
[ 4] 　翟梅枝 , 李晓明 ,林奇英 ,等.核桃叶抑菌成分的提取
及其抑菌活性 [ J] .西北林学院学报 , 2003, 18(4):
89-91.
[ 5] 　李时珍.本草纲目精译 [ M] .北京:科学技术文献出
版社 , 1992.
[ 6] 　江苏新医学院.中药大辞典上册 [ M] .上海:上海人
民出版社 , 1977.
[ 7] 　杨美林 , 周天雄 ,顾芳.瑞香狼毒和坡柳提取物对小
菜粉蝶幼虫拒食活性的测定 [ J] .云南农业大学学
报 , 2003, 18(4):354-357.
[ 8] 　陈年春.农药生物测定技术 [ M] .北京:北京农业大
学出版社 , 1990.
[ 9] 　刘晓妹 ,蒲金基.飞机草不同溶剂提取液抑菌活性的
测定 [ J] .广西热带农业 , 2004, 95(6):1-3.
[ 10] 　中国科学院昆明植物所.云南种子植物名录上册
[ M] .昆明:云南人民出版社 , 1984.
[ 11] 　云南省植物研究所.云南植物志·第二卷:种子植
物 [ M] .北京:科学出版社 , 1979.
[ 12] 　林孔勋.杀菌剂毒理学 [ M] .北京:中国农业出版
社 , 1995.
(上接第 448页)
　　表 1结果显示 ,供试 16种农药中 , 10种杀菌
剂对蜡蚧轮枝菌 KM9803菌株的抑制能力的排序
为:施保功 >三唑铜 >根腐灵 >多菌灵 >甲基托布
津 >扑海因 >代森锰锌 >绿乳铜 >百菌清。除好
普外 ,其余 9种杀菌剂在田间用量下都会对该菌的
应用效果有不同程度的影响。尤其是前 4种杀菌
剂 。 6种杀虫剂中 ,除甲胺磷以外 ,其它几种杀虫
剂也都会在一定程度上影响该菌的运用效果 ,以敌
敌畏的抑制效果最强 ,乐果 、氧化乐果和中西杀灭
菊酯其次。
3　讨论
蜡蚧轮枝菌(Verticiliumlecani)是一种丝孢纲
的昆虫病原真菌 ,农药中杀菌剂可能对其有抑制或
杀伤作用 ,在意料之中。根据本测定结果 ,在田间
该菌制剂不宜和除 “好普 ”以外的 9种供试杀菌剂
同时使用。 6种供试杀虫剂中 ,除甲胺磷以外 ,其
余几种也不宜和该菌制剂同时使用 ,尤其是敌敌
畏。否则可能会降低该菌制剂的防治效果。
[参考文献 ]
[ 1] 　谢明 ,吴畅 , 邱卫亮 ,等.若干杀虫剂 、除草剂对蜡蚧
轮枝菌孢子萌发的影响 [ J] .中国病毒学(杀虫微生
物专刊), 2000, 15:172-175.
[ 2] 　李振 ,叶琪明 , 包环玉 , 等.28种农药对蜡蚧轮枝菌
菌丝生长的影响 [ J] .浙江农业学报 , 1996, 8(5):
319-320.
[ 3] 　西东力.Verticiliumlecanii制剂によるワタアブラ
ムシの防除と农药の影响 [ J] .日本应用动物昆虫学
会志 , 1988, 32(3):224-227.
[ 4] 　OLMERTI, KENNETHRG.Sensitivityoftheento-
mopathogenicfungi, Beauveriabassiana, Verticiliumle-
caniandVerticilliumsp.Tofungicidesandinsecticides
[ J] .EnvirromentalEntomol, 1974, 33:33-38.
470 云南农业大学学报 　　　　　　　　　　　　　　第 21卷