全 文 ：［J］． 中国民族医药杂志，2015，4(1):34 － 37．
［10］呼和木仁，额尔敦朝鲁． 苦参解热的药理作用与机制
研究［J］． 北方药学 ，2015，12(4):127 － 127．
［11］纪月岭，额尔敦朝鲁，李立，加曼·沙俄． 大肠埃希菌
致家兔蒙医“粘”性腹刺痛未成熟热期、成熟热期动物
模型的研究［J］．内蒙古民族大学学报(自然科学版)，
2014，01:65 － 67．
［12］额尔敦朝鲁，杨玉秋，巴图德力根，等． 蒙医“粘”性脑
刺痛发热证期转化 与炎性因子的相关性实验研究
［J］． 辽宁中医杂志，2012，39(12):2507 － 2509．
［13］王格日乐吐，额尔敦朝鲁，呼和木仁． 干酵母致大鼠
蒙医未成熟热、成熟热期发热模型建立研究［J］． 亚太
传统医学，2015，11(11):18 － 19．
［14］唐晓峰，薛漫清，王晖．大鼠发热模型及发热机制的研
究进展［J］． 广东药学院学报，2009，03:327 － 331．
［15］左泽平，王志斌，郭玉东，等． 常用大鼠发热模型研究
［J］． 中国比较医学杂志 ，2012，22(2):52 － 57．
［16］程先宽，范吉平，韩振蕴，等． 不同折算剂量桂枝汤对
酵母致大鼠发热模型的影响［J］． 中医杂志，2009，50
(3):258 － 260．
［17］李灿东，王瑞国，杜建．固表解毒合剂对干酵母所致发
热大鼠体温影响的比较研究［J］． 中华中医药学刊，
2007，25(3):428 － 429．
［18］富杭育，周爱香，郭淑英，等． 桂枝汤对白细胞介 － 1、
干扰素、肿瘤坏死因子所致发热的作用［J］． 药药理与
临床，1994，3(1):1 － 3．
［19］吴冉冉，王欣．白虎汤、大承气汤对不同发热模型大鼠
退热作用实验研究［J］． 山东中医杂志，2012，7(31):
506 － 508．
［20］闫力，宫晓燕． 新宣白承气胶囊对干酵母所致老龄大
鼠发热的治疗作用［J］． 中国老年学杂志，2008，28
(11):2262 － 2263．
［21］汤毅珊，王宁生，张银卿，等． 雄黄对发热模型大鼠应
激蛋白、炎症介质和补体的影响［M］． 第四届全国中医
药免疫学术研讨会论文汇编:中国青年科学家论坛暨
第四届全国中医药免疫学术研讨会，2007． 242 － 249．
［22］周燕萍，高清华，李华锋，等． 3 种温病治法对温病湿热
证模型血浆 ETX 血清 TNF － IL － 1． 影响的对比研究
［J］．中医药学刊，2006，24(8):1567 － 1568．
［23］陈孟溪，宗琳，张红．清热散瘀解毒方对发热大鼠血清
TNF － 、IL － 1、COX － 2 含量的影响［J］． 中国中医急
症，2013，23(7):1108 － 1110．
［24］陈聪，马成，肖璐．柴胡葛根配伍对发热大鼠体温和血
清 I － 1β含量 MPO 活性的影响［J］． 中国实验方剂学
杂志，2011，17(5):207 － 209．
2016 年 1 月 20 日收稿
△基金项目:内蒙古自然基金项目(2014MS0830)，内蒙古民族大
学科研项目(NMDGP1506);
作者简介:包明兰(1979 －)女，副教授，博士，研究方向:方剂作用
机理研究，baominglan@ 126． com
蒙药肋柱花在 D － GlaN致急性肝损伤
大鼠血清中移行成分的 LC － MSDTrap分析△
包明兰 佟玉风 巴根那 白梅荣 叶日贵
(内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古 通辽 028000)
摘 要:目的:通过分析肋柱花在 D －氨基半乳糖(D － GIaN)致急性肝损伤大鼠血清中移行成分，探讨其肋柱花抗急性肝损
伤药效物质基础。方法:以 D － GIaN致急性肝损伤大鼠为研究对象、肋柱花水提物为示例药物，采用液相色谱 /离子阱质谱
(LC － MSDTrap)分析其肋柱花在 D － GIaN致急性肝损伤大鼠血清中移行成分。结果:在 D － GIaN致急性肝损伤大鼠血清
中共检测到 8 个移行成分，其中 1 个移行成分为肋柱花原型成分、即獐牙菜苦苷，7 个移行成分为代谢产物，通过二级质谱
特征信息推测其化合物 2、3、5、7、10 的结构。结论:分析到的 8 个血中移行成分可能是肋柱花化学成分的体内作用形式，也
最有可能成为肋柱花抗急性肝损伤的药效物质基础。
关键词:蒙药肋柱花;急性肝损伤;血清;移行成分分析;LC － MSDTrap
中图分类号:Ｒ291． 2 文献标识码:A 文章编号:1006 － 6810(2016)04 － 0067 － 04
蒙药肋柱花是龙胆科植物肋柱花 Lomatogonium carin-
thiacum(Wulf)Ｒeichb．的干燥全草。蒙医常用特色药材，蒙
古名为哈比日根 －地格达、特木尔 －地格达，来源于龙胆科
肋柱花属植物肋柱花的干燥全草。肋柱花具有平息希拉，
清热，健胃，愈伤功能;用于希拉热，温热，流感，伤寒，中暑
头痛，肝胆热，黄疸，胃希拉，伤热等病症［1］，是临床常用于
肝胆疾病的传统药材。但肋柱花治疗肝损伤作用的药效物
质基础及作用机制尚不明确。本文采用血清药物化学方法
从药物的临床应用为切入点，分析肋柱花在 D － GIaN致急
762016 年 4 月第 4 期 中国民族医药杂志
DOI:10.16041/j.cnki.cn15-1175.2016.04.041
性肝损伤大鼠血清中的移行成分，探讨其抗急性肝损伤的
药效物质基础。为后续肋柱花体内直接作用物质与药效相
关性研究及作用机制分析提供基础。
1 实验材料
1． 1 仪器:Agilent 1100 series LC － MSD 液质联用仪(Agi-
lent SL型多级离子阱质谱仪，低压四元梯度泵，二级管陈
列检测器(DAD)，chemistation 化学工作站);KQ － 200VDE
型双频数控超声波清洗器(昆山);NA － 5L 氮气空气一体
机;TD4 － I 型离心机(长沙);AUW120D 型分析天平(上
海);固相萃取小柱 － WAT094226 Waters OAsis HLB 3cc /
60mg，30um(上海)。
1． 2 药品与试剂:肋柱花采自扎鲁特旗自然保护区特金罕
山，经内蒙古民族大学蒙医药学院布和巴特尔教授鉴定，是
龙胆科植肋柱花 Lomatogonium carinthiacum(Wulf)Ｒeichb．
的干燥全草。D － GlaN(批号 58465)由美国，Sigma 公司提
供。色谱甲醇，甲酸。
1． 3 实验动物:取 Wistar 大鼠，SPF，雄性，许可证号码:
SCXK(吉)－ 2011 － 0004:长春市亿斯实验动物技术有限责
任公司提供。
2 分析条件
2． 1 色谱条件:色谱柱:Venusil MP C18(4． 6 × 300mm，
5μm);流动相 A为 0． 1%甲酸水溶液，流动相 B为甲醇，梯
度洗脱(0 ～ 10min，10% ～20%B;10 ～ 20min，20% ～40%B;
20 ～ 40min，40% ～ 60% B;40 ～ 60min，60% ～ 75% B;60 ～
80min，75% ～ 85% B;80 ～ 90min，85% ～ 10% B);流速:1．
0mL·min －1;检测波长:280nm;柱温:35℃;进样量:30μL。
2． 2 质谱条件:ESI电离源:电喷雾离子源;正离子模式检
测;扫描范围:m/z 50 ～ 800;干燥气温度:350℃;干燥气流
量:9． 0mL·min －1;雾化气压强:35． 0psi(1psi = 6． 895kpa);
毛细管电压:4kv。
3 实验方法
3． 1 含肋柱花血清样品的制备:取 30 只大鼠，体重 220 ±
10g，按体重随机分为空白组、模型组、模型加药物组，每组
10 只，模型组与药物组按 400mg·kg －1剂量腹腔注射 D －
GlaN生理盐水染毒造模，禁食不禁水 24h 后，药物组按 5．
4g·kg －1剂量(提取物)灌胃肋柱花水提物，空白组灌胃等
量生理盐水，给药 45min 后，腹主动脉取血，3000r·min －1
离心 10min，取上清液，备用［2 － 5］。
3． 2 含肋柱花血清样品的处理:分别精密吸取含肋柱花组
血清、空白组血清和模型组血清各 0． 5mL，用 20μL 85%的磷
酸酸化后加入活化(2mL甲醇、2mL水)的 HLB固相萃取柱，
分别以 2mL水、2mL 10%甲醇和 3mL 70%甲醇洗脱，弃去前
两段洗脱液，收集 70%的甲醇洗脱液，氮气发生仪上吹干样
品［6 －8］。用 200μL甲醇溶解，过 0． 22μm 微孔滤膜，制备相
应的含肋柱花血清、空白血清和模型血清样品，备用。
3． 3 肋柱花血清中移行成分分析:精密吸取含肋柱花组、
空白组和模型组血清样品溶液各 30μL，按上述分析条件进
行检测。结果含有肋柱花相关成分的血清中共检测到 10
个移行成分，其中 2 个移行成分为空白组和模型组血清固
有成分，故肋柱花的入血移行成分为 8 个［9 － 12］。见图 1。
图 1 含肋柱花组（A）、模型组（B）
及空白组（C）血清总离子流图
4 结果
应用 LC － MS分析含有肋柱花相关成分的血清，比较
了质谱检测方式，发现在正离子模式下，质谱响应更强，并
且峰容量更大，故选择 ESI正离子模式。
鉴定过程在“2·1”项条件下，共得到 10 个峰，除了空
白组和模型组血清固有移行成分以外，共检测到 8 个移行
成分(图 1)。对这些移行成分首先精确计算出 ESI － MS
上所得化合物的分子质量，初步鉴定肋柱花的化学成分。
然后，选择合适的分子离子峰进行裂解，通过二级质谱裂解
方式，获得与化合物结构相关的碎片离子，再对比其他碎片
信息，结合紫外吸收波长、分子质量、碎片离子峰、保留时间
等参数，进一步推断其结构，共鉴定出 5 个化合物(图 2)。
由于 3 个移行成分的二级质谱没有特征的碎片离子信息而
未能鉴定出结构。
以獐牙菜苦苷为例。首先，通过该峰的准分子离子峰
m/z 397． 5，可确定其目标分子量为 374． 1，根据 m/z 397． 5
的二级质谱裂解图进行分析，发现所得二级质谱图(图 3)
中有明显的 m/z 379． 3［M + Na － OH］+、217． 1［M + Na －
OH － C6H10O5］+、255． 1［M + Na － OH － C6H4O3］+、165．
1［M + Na － OH － C6H4O3 － C7H10O3］+等碎片离子信息，
从而推断出其裂解途径(图 4)。结合保留时间、紫外吸收
波长、碎片离子等参数，最终确定该峰为獐牙菜苦苷。采用
类似的方法，对其他化学成分也进行相应的鉴定。
86 中国民族医药杂志 2016 年 4 月第 4 期
表 1 肋柱花血清中移行成分的正离子扫描模式的质谱分析结果
峰号 ＲT/min
ESI －MS
［M +Na］ ［M +H］
分子
质量
分子式 碎片离子 化合物名称 结构
1 14．6 301．2 ——— 278．4 ——— ——— ——— ———
2 19．7 289．8 ——— 266．1 ——— C14H18O5 168［M +Na －C8H10O］+ 未知物 A
3 21．8 397．5 ——— 374．1 C16H22O10379．3［M +Na －OH］+ 獐牙菜苦苷 B
217．1［M +Na －OH －C6H10O5］+
255．1［M +Na －OH －C6H4O3］+
4 239．2 ——— 216．3 ——— ——— ———
5 32．3 ——— 441．4 440．2 C21H28O10383．1［M +H －COOCH3］+ 未知物 C
39．9 ——— 397．4 396．2 C24H28O5378．9［M +H －OH］+ 未知物 D
274．7［M +H －C7H5O2］+
10 46．3 495．5 ——— 472．3 ——— ——— ——— ———
51．5 425．5 ——— 402．1 C23H14O7180．9［M －C15h10O2］+ 未知数 E
图 2 化合物结构
A B
C
D E
图 3 獐牙菜苦苷二级质谱图
图 4 獐牙菜苦苷裂解途径
962016 年 4 月第 4 期 中国民族医药杂志
5 讨论
5． 1 提取溶剂的选择:因本实验主要针对临床用药，故选
择用水回流来提取肋柱花药材。
5． 2 蒙药口服给药后，多数所含成分不能被吸收，只有部
分成分被吸收进入体内，而进入体内的成分既可能以原型，
也可能以代谢物的形式发挥作用。真正起作用的是吸收入
血的成分，即血清中的移行成分。或者有些移行成分在肝
脏的Ⅰ相和Ⅱ相代谢酶的作用下生物转化为代谢产物后才
能具有较强的生理活性。因此，以上 8 个血中移行成分可
能是肋柱花化学成分的体内作用形式，也最有可能成为肋
柱花的抗急性肝损伤药效物质基础。但被吸收入血的成分
不一定都是有效成分，所以血中移行成分的活性与肋柱花
临床疗效的相关性，还有待进一步研究。
参考文献
［1］中华人民共和国卫生部药典委员会．中华人民共和国卫
生部药品标准·蒙药分册［S］． 1998． 91．
［2］曹思思，郑作文．够蚁草乙酸乙酯提取物对 CCl4 所致肝
纤维化小鼠的保护作用［J］． 中国实验方剂学杂志，
2015，21(24):119 － 122．
［3］佟玉风，巴根那，白梅荣，等．液质联用分析 D － GlaN 致
急性肝损伤模型大鼠尿液中肋柱花的化学成分［J］．中
国民族民间医药杂志，2015，5:12 ～ 13，16．
［4］包明兰，巴根那，白梅荣．在急性肝损伤状态下蒙药地格达
－4味汤、栀子加肋柱花药对及栀子单味药中栀子苷含量
的动态观察［J］．辽宁中医杂志，2015，42(2):379 －381．
［5］李莉，张喜德，张恩户．桑蒂复肝胶囊对 D －半乳糖胺致
小鼠急性肝损伤的保护作用［J］． 河北中医药学报，
2014，29(3):9 ～ 11．
［6］王喜军．中药血清药物化学［M］．科学出版社，2010．
［7］刘侗，张艳平，闫立成，等．通顶散抗过氧化损伤活性部
位成分液质联用分析研究［J］．中国新药杂志，2014，23
(10)．
［8］宁永成．有机化合物结构鉴定与有机波谱学［D］．科学
出版社，2000，224．
［9］Xue C，Guo J，Qian D，et al． Identification of the potential
active components of Abelmoschus manihot in rat blood and
kidney tissue by microdialysis combimed with ultraperfo-
mance liquid chromatogrqaphy /quadr upole time of fight
mass spectrometry［J］． J Chromatogr B，2011． 879(5 － 6):
317 ～ 325．
［10］毛艳，张瑞萍，贺金华，等．紫草中萘醌类化学成分的快
速高效液相色谱 －飞行时间质谱联用技术分析［J］．中
国药房，2014，25(43):4090 ～ 4092．
［11］何忠梅，王晓慧，李国峰，等．靶向亲和 －液质联用技术
对人参茎叶总皂苷中 α －葡萄糖苷酶抑制剂的快速筛
选［J］．分析化学研究报告，2013，41(11):1694 － 1698．
［12］王晓燕，张丽，王添琦，等． 栀子化学成分的 UHPL － Q
－ TOFMS分析［J］．中药材，2013，36(3):407 ～ 410．
2016 年 1 月 24 日收稿
Analysis of Lomatogonium carinthiacum the frame column on D － GIaN
to acute liver injury in rats serum transitional components by LC －MSDTrap
BAO Ming － lan TONGYu － feng Bagenna MAIMei － rong Yerigui
(College of Mongolian Medicine and Pharmacology，Inner Mongolin University for Nationalities，
Tongliao，Inner Mongolia 028000，China;)
［Abstract］AIM To analyze Lomatogonium carinthiacum the frame column on D － GIaN to acute liver injury in
rats serum transitional components，discuss the rib pillar against acute liver damage efficacy material base。
METHODS:D － GIaN induced acute liver injury in rats as the research object and Lomatogonium carinthiacum
water extract for example drugs，using LC － MSDTrap analysis of Lomatogonium carinthiacum in D － GIaN in-
duced acute liver injury in rats serum transitional components． ＲESULTS:In the D － GIaN to acute liver injury in
rats of serum was detected eight transitional elements，which is transitional component was prototype ingredients
of Lomatogonium carinthiacum，namely Swertiamain，7 transitional components in metabolites，through seconda-
ry mass spectrometry speculates that the compound 2，3，5，7，10 of the structurecharacteristic information of
the two stage mass spectrometry． CONCLUSION:The above 8 blood components may be the body function of the
chemical composition of the carinthiacum Lomatogonium，also most likely to be the effective material basis for the
anti acute liver injury of the carinthiacum Lomatogonium。
［Key words］Traditional Mongolian medicine Lomatogonium carinthiacum;acute liver injury;serum;transitional
composition analysis;LC － MSDTrap
07 中国民族医药杂志 2016 年 4 月第 4 期