全 文 ：螃蟹甲为唇形科(Labiatae)糙苏属(Phlomis)植物螃蟹甲(Phlomis younghusbandii Mukerjee.)的干燥块根，
藏语称“露木尔”，主要分布于西藏的高山、草甸、河边、阴泽之地[1]，为藏医习用药材，至今已有千余年沿用
历史。民族医药理论认为其具有祛风活络、强筋壮骨、清热消肿、止咳祛痰之功效[2-3]，具有一定的抗感染作
用，被广泛用于治疗感冒、咳嗽、疮疥肿毒、肺炎、支气管炎等疾病[4-5]，但对其抗菌药理作用研究很少。为了
更好地开发利用螃蟹甲这一传统习用藏药，我们对其水、乙醇、乙醚提取物进行了体外抗菌活性的初步研
究，报告如下：
1 材料及主要设备
1.1 实验材料
1.1.1 实验药材：唇形科糙苏属植物螃蟹甲的干燥块根，由西藏大学医学院药学系鉴定提供。
1.1.2 实验菌株：标准菌株ATCC27853（铜绿假单胞菌）、ATCC25923（金黄色葡萄球菌）、ATCC25922(大肠
埃希菌)购自卫生部临床检验中心临床微生物实验室。33株铜绿假单胞菌，分离自四川大学华西医学中心
华西医院，经VITEK-AMS系统(法国生物梅里埃公司)鉴定及药敏实验，耐药表型为亚胺培南耐药。
1.1.3 培养基：实验菌株活化及药敏实验用培养基均为自行配制。 方[6]如下：胰蛋白胨10g/L；牛肉浸膏
藏药螃蟹甲提取物体外抗菌作用研究
杜宝中 仁增 次旺卓玛 德吉央宗 王聚乐
（西藏大学医学院 西藏拉萨 850000）
摘要：目的：观察藏药螃蟹甲干燥块根水、乙醇、乙醚提取物体外抗耐亚胺培南铜绿假单胞菌的抗菌
活性。方法：以琼脂稀释法测定螃蟹甲干燥块根水、乙醇、乙醚提取物对33株耐亚胺培南铜绿假单胞菌及
标准菌株ATCC27853、2 922、 5923的MIC、 50及MIC90，并计算其累积抑菌率。结果：螃蟹甲干燥块
根水、乙醇提取物对标准菌株ATCC27853、2 922、 5923的MIC分别为26.04 mg/ml、52.08 mg/ml、13.02
mg/ml；62.5mg/ml、125mg/ml、62.5mg/ml；各浓度乙醚提取物平板上均有菌生。水、乙醇提取物对33株耐
亚胺培南铜绿假单胞菌的MIC50、及MIC90分别为52.08mg/ml、62.5mg/ml；104.17mg/ml、125mg/ml。结
论：藏药螃蟹甲干燥块根水、乙醇提取物对耐亚胺培南铜绿假单胞菌具有明显抗菌作用；乙醚提取物无明
显抗菌作用。
关键词：螃蟹甲；提取物；铜绿假单胞菌；体外抗菌试验
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5738（2010）01-027-04
收稿日期：2010- 03- 18
第一作者简介：杜宝中（1970-），男，汉族，河南新郑人，西藏大学医学院讲师，主要研究方向为病源生物耐药机制。
西藏大学学报(自然科学版）
JOURNAL OF TIBET UNIVERSITY
Vol.25 No.1
Jun. 2010
第25卷第1期
2010年6月
27- -
DOI:10.16249/j.cnki.54-1034/c.2010.01.015
5g/L；氯化钠5g/L；琼脂粉20g/L。以上各培养基组分均购自杭州天和微生物试剂公司，在有效期内使用。
1.1.4 菌量定量比浊液：自行配制。 方法[7]：1.175%氯化钡溶液（100ml蒸馏水加入1.175g二水氯化钡）
0.5ml加入1%浓硫酸99.5ml，混匀后以530nm波长比色调整其浊度，使其吸光值为0.1。该浊度为0.5麦
氏比浊标准（McFarlandstandard），菌量相当于5×(107~108)CFU/ml菌量。置暗处保存备用。
1.2 主要实验设备：恒温培养箱、水浴锅、恒温干燥箱、超净工作台、高压蒸汽灭菌器、723-可见光分光光
度计、OXOID菌量浊度计、微量加样器（eppendorf）、蜗旋振荡器。
2 方 法
2.1 螃蟹甲水、乙醇、乙醚提取物的制备
藏药螃蟹甲块根生药常规方法制备其水、乙醇、乙醚提取物，水提取物80℃干燥品粉碎至粉末状，备
用；乙醇及乙醚提取物干燥备用。
2.2 药物平板的制备
2.2.1 螃蟹甲水、乙醇、乙醚提取物药液的配制及稀释
取螃蟹甲水提取物8g溶于8ml生理盐水中作为原液，取原液4ml稀释2倍至1:16；乙醇提取物溶于
20ml生理盐水中作为原液，取原液4ml稀释2倍至1:4；乙醚提取物溶于16ml生理盐水吐温80（1：1）稀
释液中作为原液，取原液4ml以生理盐水吐温80（1：1）稀释液稀释2倍至1:4，然后将各提取物药物原液
及各稀释液灭菌后备用。每次稀释前各液均用涡旋振荡混匀。
2.2.2 螃蟹甲水、乙醇、乙醚提取物药物平板的制备
据1.1.3培养基配方配制固体培养基，分装于250ml三角烧瓶中，76ml/瓶，121.3℃15分钟高压蒸汽
灭菌后，置50℃水浴锅中冷却至50℃左右，无菌操作加入2.2.1中制备的各浓度药液，4ml/浓度药液/
瓶，蜗旋震荡器上混匀，培养基冷却前倾注90mm平板4只，20ml/只。制备完毕药液平板4℃存放备用。
2.3 抗菌实验[8]
2.3.1 实验菌液的准备
取标准菌株ATCC27853、25922、 5923及铜绿假单胞菌临床分离株斜面保存物划线接种于普通琼脂
平板，37℃培养18h~24h。无菌挑取4~8个单菌落或适量菌苔混悬于4ml无菌生理盐水中，蜗旋振荡器上
震荡15s，以0.5麦氏比浊标准液为参照，用浊度计比浊，通过在菌液中加入无菌生理盐水或菌落调整其
浊度为0.5麦氏比浊单位后备用，制备好的菌液15分钟内接种完毕。
2.3.2 铜绿假单胞菌抗菌实验
取2.2.2中制备之含不同稀释度药物平板，37℃孵箱预温30分钟后取出，在平板背面进行标记。将
2.3.1中制备之菌液2μl无菌操作接种于平板培养基表面，同时取2μl无菌操作接种不含药物平板一只
作为药物阴性对照。取不接种菌液的同批药物平板和不含药物平板各一只同时培养作为阳性对照。将接
种平板在超净工作台中室温放置10分钟后，保持37℃培养18h~24h，观察各平板标记点接种菌生长情
况。
3 结 果
接种之药物平板经37℃18h~24h培养后，观察各平板标记点接种菌生长情况。以无菌生长平板药物
浓度为被检测菌的MIC（最小抑菌浓度）。单一菌落生长忽略不计。螃蟹甲水、乙醇提取物对标准菌株
ATCC27853（铜绿假单胞菌）、ATCC25923（金黄色葡萄球菌）、ATCC25922(大肠埃希菌)以及33株耐亚胺
培南铜绿假单胞菌临床分离株的MIC、MIC50及MIC90结果见表1。螃蟹甲水、乙醇提取物对三株不同标准
菌株均有显著地抑制作用，对33株耐亚胺培南铜绿假单胞菌临床分离株亦有明显地抑制作用，结果见表
杜宝中，仁增，次旺卓玛，德吉央宗，王聚乐：藏药螃蟹甲提取物体外抗菌作用研究
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2、表3。水提取物较乙醇提取物抗菌活性显著。
螃蟹甲乙醚提取物各浓度平板上均有菌生长，提示螃蟹甲乙醚提取物对该3株标准菌株无明显抑菌
作用。螃蟹甲乙醚提取物各浓度对33株耐亚胺培南铜绿假单胞菌临床分离株的累积抑菌率结果见表4，
可见累积抑菌率均未超过50%，提示螃蟹甲乙醚提取物对33株耐亚胺培南铜绿假单胞菌临床分离株无
明显抑制作用。
4 讨 论
细菌性感染一直威胁着人类的健康。目前细菌感染性疾病仍主要以抗生素治疗为主。然而，细菌可通
过多种机制获得对抗生素的耐药性。近年来随着抗生素广泛大量的应用，细菌的耐药性问题日趋严重，细
菌耐药性的发生、发展己成为预防、控制细菌感染性疾病的主要障碍。
菌种 菌株数
MIC MIC50 MIC90
水提物 醇提物 水提物 醇提物 水提物 醇提物
ATCC259221 52.08 125— — — —
ATCC259231 13.02 62.5— — — —
ATCC278531 26.04 62.5— — — —
铜绿假单胞菌
临床分离株
33 13.02~208.3 62.5~250 52.08 62.5 104.17 125
注：表中“—”表示无数据。
表1 螃蟹甲水、乙醇提取物对标准菌株及耐亚胺培南铜绿假单胞菌临床分离株抑菌作用MIC(mg/ml)
MIC(mg/ml) 208.33 104.17 52.08 26.04 13.02
生长受抑制菌株数 33 31 17 6 6
抑菌率（%） 100 93.94 51.52 18.18 18.18
表2 螃蟹甲水提取物对耐亚胺培南铜绿假单胞菌临床分离株的累积抑菌率（%）
MIC(mg/ml) 250 125 62.5 31.25 15.63
生长受抑制菌株数 32 31 18 5 0
抑菌率（%） 96.97 93.94 51.55 15.15 0
表3 螃蟹甲乙醇提取物对耐亚胺培南铜绿假单胞菌临床分离株的累积抑菌率（%）
MIC(mg/ml) 312.5 156.25 78.13
生长受抑制菌株数 8 7 6
抑菌率（%） 24.24 21.21 18.18
表4 螃蟹甲乙醚提取物对耐亚胺培南铜绿假
单胞菌临床分离株的累积抑菌率（%）
杜宝中，仁增，次旺卓玛，德吉央宗，王聚乐：藏药螃蟹甲提取物体外抗菌作用研究
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长期以来广大医药工作者一直致力于寻找有效、安全的抗菌药物。藏药是祖国医学宝库中的珍贵财
富之一，传统习用藏药中有许多具有治疗细菌性感染性疾病的功效。传统藏医药理论及藏医实践证实藏
药螃蟹甲具有抗感冒、咳嗽、肺炎及支气管炎等功效，但藏药螃蟹甲抗菌作用药理研究报告极少。在该实
验中，我们采用传统方法制备螃蟹甲干燥块根的水、乙醇及乙醚提取物，经体外抗菌实验证实：螃蟹甲块
根水、乙醇提取物对三种不同类型细菌标准菌株以及铜绿假单胞菌临床分离耐药株均具有显著的抑菌作
用。中药材成分极其复杂，既含有各类生物碱、萜类、糖苷、黄酮、揉质等主要药理活性物质，还含有叶绿
素、纤维素、树脂、油脂以及氨基酸、蛋白质等物质，而经传统方法获得的提取物常常为多种成分的混合
物，其中真正的药理活性成分无法加以确认。乙醚是中药成分提取常用的良好有机溶剂，其提取物中主要
是中药材中的挥发油、脂肪酸、甾醇、内酯、叶绿素等脂溶性成分。我们的实验结果显示螃蟹甲块根乙醚提
取物对实验菌株无明显抑菌作用。高咏莉，边巴次仁等研究发现螃蟹甲化学成分非常复杂[9-11]，因此对于
藏药螃蟹甲块根中具体的抗菌成分尚有待于深入研究。
参考文献
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杜宝中，仁增，次旺卓玛，德吉央宗，王聚乐：藏药螃蟹甲提取物体外抗菌作用研究
Vitro Antibacterial Activity of Extractum Phlomis
younghunsbandii Mukerjee Against
Pseudomonas aeruginosa
Du Bao-zhong Renzeng Ciwang Zhuoma Deji Yangzong Wang Ju-le
(Medical College of Tibet University Lhasa，Tibet 850002)
Abstract: The antibacterial activity of extractum of Phlomis younghunsbandii against imipenem -resistant
Pseudomonas aeruginosa in vitro were investigated by using agar diffusion test and MIC、MIC50、MIC90 extrac－
tum of Phlomis.Y.M against type strains and 33 clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa were examined
and inhibition rate was calculated. The results showed that the MIC determined for water and ethanol extrac－
tum against ATCC27853, 25922 and 25923 was 26.04 mg/ml, 52.08 mg/ml, 13.02 mg/ml, 62.5 mg/ml, 125mg/
ml and 62.5 mg/ml respectively. The MIC50 and MIC90 of 33 strains Pseudomonas aeruginosa was 52.08 mg/ml,
62.5m g/ml, 104.17mg/ml and 125 mg/ml respectively. In conclusion, water and ethanol extracts from Phlomis.
Y.M can inhibit the growth of Pseudomonas aeruginosa in vitro.
Key words: Phlomis younghunsbandii; Extractum; Pseudomonas aeruginosa; Vitro antibacterial test
[责任编辑：格朗]
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