全 文 ：能力的作用。
2.3 脑血康对樟柳碱致小鼠记忆获得障碍的作用(避暗
法) 在避暗仪内经过初步筛选取合格小鼠 60只 , ♀♂各
半 , 体重 18 ～ 22 g,随机分为 5组 , 分别为空白组 、樟柳碱模
型组 、吡垃西坦 0.8 g/kg组 、脑血康 0.25 g/kg和 0.5 g/kg
组。各组 ig给药 , 每天 1次 , 共 10 d, 空白组和模型组 ig同
体积蒸馏水 , 第 10天药后 2 h除空白组外各组 ip樟柳碱水
溶液 5mg/kg, 10min后将小鼠头部背向洞口放入明室 , 同时
开始计时 , 保持通电 5 min,进行电击记忆训练 。 24 h后重新
测试 , 记录 5min内的电击次数。结果见表 3。
表 3 对樟柳碱致小鼠记忆获得障碍的作用
(避暗法)( x±s)
组别 剂量 /g/kg 动物数 /只 电击次数 /次
空白组 - 12 8.58±3.80
模型组 - 11 17.91±6.66＊＊
吡拉西坦 0.80 12 13.28±6.94
脑血康 0.25 10 9.00±7.21■■
脑血康 0.50 11 9.37±5.64■■
与空白组比较 , ＊＊P<0.01;与模型组比较 , ■■P<0.01。
结果表明:脑血康 0.25 g/kg和 0.50 g/kg组能明显改
善樟柳碱造成的小鼠脑记忆获得性障碍 ,表现为错误次数明
显减少 , 和模型组比具有学习记忆灵敏的倾向 , 提示该药具
有明显的增强学习 、记忆能力的作用。
3 小结
学习记忆是脑的重要功能之一 , 是构成智能的要素。乙
醇为中枢抑制剂 ,测试前给药 ,较低浓度下即可明显破坏记
忆过程 ,造成学习记忆再现障碍 , 脑血康能明显改善由乙醇
导致的小鼠学习记忆再现障碍;研究发现 , 脑内乙酰胆碱递
质系统参与学习与记忆过程 ,胆碱能拮抗剂樟柳碱是常用的
制造胆碱功能性记忆缺失模型的工具药 [ 4] ,脑血康能明显改
善小鼠由樟柳碱导致的记忆获得性障碍 , 提示该药可能通过
增加脑内乙酰胆碱的含量来增强学习记忆能力的。
以上实验结果提示脑血康具有明显的促智 、增强学习记
忆功能的作用 ,但其作用机理仍需进一步研究和探讨。
参考文献:
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版社 , 1982, 343.
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获得性障碍的促智作用 [ J].中药材 , 2000, 23(4):214-216.
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Med, 1983, 4:220.
正交试验法优选东紫苏中总三萜提取工艺的研究
胡浩斌 1 , 刘建新 2 , 郑旭东1
(1.陇东学院化学系 ,甘肃 庆阳 745000;2.陇东学院生命科学系 ,甘肃 庆阳 745000)
收稿日期:2006-01-18
基金项目:甘肃省教育厅研究生导师科研项目(0610-05)
作者简介:胡浩斌(1969～ ),男 ,副教授 ,硕士 ,主要研究中药成分及活性 ,电话:0934-8631942, E-mail:hhb-88@ 126.com。
关键词:正交试验;方差分析;提取工艺;微波辅助流动萃取;东紫苏;总三萜
中图分类号:R284.2 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2007)04-0579-02
东紫苏(ElsholtziabodinieriVaniot), 又名 “凤尾茶”, 为唇
形科植物 , 多年生矮小草本 ,生于山坡 、路旁草丛中或灌木林
下。主要分布在甘 、黔 、蜀和滇等西部地区 [ 1] 。 性平 、味辛。
其全草可入药 , 具有发散解表 、理气和胃等功效 ,主治外感风
寒 、头身痛 、咽喉痛 、消化不良和肝炎等症 [ 2] , 是民间常用的
一种中草药 , 主要含挥发油 、黄酮 、三萜及多糖等有效成
分 [ 3～ 5] 。为正确评价该药材的质量 , 提高药材的利用率 , 我
们采用微波辅助流动萃取 、薄层色谱分离及分光光度法测定
甘肃东紫苏中的总三萜含量 ,确定了提取的适宜条件 ,取得
了令人满意的效果。
1 仪器与试药
WR-C型微波制样系统 , FI-2100型流动注射分析系统 ,
756型紫外-可见分光光度计 , 活化的 0.5 羧甲基纤维素钠-
硅胶 G薄层板;所用试剂均为分析纯;齐墩果酸标准品由中
国药品生物制品检定所提供;东紫苏采自甘肃子午岭地区。
2 方法 、结果与分析
2.1 标准曲线的绘制 准确称取在 105℃干燥至恒重的齐
墩果酸标准品 111 mg, 用甲醇配成 1.11 mg/mL的标准溶
液。然后分别准确吸取此溶液 0、 4、8、12、16、 20和 24 mL,在
25 mL量瓶中用甲醇稀释 、定容成一系列标准溶液 , 再分别
吸取上述系列标准溶液 125 μL在薄层板上点样 , 同时在旁
边点上相同的溶液作为对照样 , 以氯仿-丙酮-甲醇 =6∶3∶1
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(V/V)作为展开剂层析展开 、挥干溶剂 , 在对照样的部分喷
10 硫酸-乙醇 , 105℃显色 10 min, 然后刮取与红紫色部分
相对应的样品带 , 以甲醇为溶剂微波提取 、洗脱 3次(每次
10 min), 洗脱液在水浴上蒸干 , 加 50 香草醛-冰醋酸溶液
0.3 mL和高氯酸 1 mL,摇匀 , 60℃反应 15 min,冰水冷却 , 加
5 mL冰醋酸 , 进行全波长扫描 , 在 541 nm处有最大吸收。
用第一种溶液作空白 ,测定吸光度并绘制标准曲线。由最小
二乘法得回归方程:A=0.004 8X-0.0075, r=0.999 6。
2.2 总三萜含量的测定
2.2.1 实验方案设计 采用正交试验 L16(44)来安排实验 ,
设计见表 1。
2.2.2 供试品溶液的制备 将东紫苏去杂质 、洗净 、晾干 、
研细 、过 60目筛后备用 。准确称取根 、茎 、叶干粉样品各
0.250g, 分别置于萃取管中 , 将萃取管装入微波炉中 , 将甲
醇泵入到萃取管中 , 选择适当的功率和时间进行萃取。 收集
萃取液 , 等萃取完成后 ,关闭微波炉 , 继续泵入 4 ～ 5 mL甲醇
淋洗样品 , 并把淋洗液并入到萃取液中 , 真空浓缩 ,浓缩液在
25 mL量瓶中用甲醇定容 ,作为供试品溶液。
2.2.3 含量测定 按 “标准曲线的绘制”项下的方法对各
供试品溶液进行测定 ,并计算总三萜的含量 ,结果见表 1。
由表 1可知:萃取溶剂 C的极差 R很大 , 即萃取溶剂是
影响萃取率和萃取选择性的主要因素 , 因为它不仅影响微波
的吸收 ,而且也影响目标物的溶解 , 且 K3 >K2 >K4 >K1 , 故
选择第三水平较好 ,即萃取溶剂为甲醇。 D因素的影响虽不
显著 ,但根据 K值 ,选择萃取管内径为 10mm。同理 ,我们选
择溶剂流速为 6 mL/min及微波功率为 600W。
对实验结果进行方差分析(结果见表 2),发现 FC大于
F临界值 , 而 FD远小于 F临界值 ,说明萃取溶剂对测定影响较大 ,
而萃取管内径影响不大 , 这与极差分析的结果基本相符。
2.3 稳定性试验 在 30min内每隔 5min,分别测定供试品
和标准对照品溶液的吸光度 , 吸光度值均未发生改变 , 说明
显色反应较稳定。
2.4 测定结果及回收率 按所选最佳实验条件 , 对样品中
总三萜的含量进行测定 , 并采用标准品(齐墩果酸)加入法
进行回收率实验(结果见表 3)。 RSD<1.30 , 回收率 >
98 ,表明该方法重复性好 、准确率高 ,实验所确定的工艺是
合理的。
表 1 正交实验设计及结果(n=3)
实验
次数
影响因素
微波功率 /w
A
溶剂流速 /mL/min
B
萃取溶剂
C
萃取管内径 /mm
D
东紫苏根中
总三萜含量 / RSD/
1 1(400) 1(2) 1(无水乙醇) 1(8) 1.68 1.21
2 1(400) 2(4) 2(95 乙醇) 2(10) 1.86 0.68
3 1(400) 3(6) 3(甲醇) 3(18) 1.94 0.72
4 1(400) 4(8) 4(95 甲醇) 4(22) 1.74 1.18
5 2(500) 1(2) 2(95 乙醇) 3(18) 1.78 0.97
6 2(500) 2(4) 1(无水乙醇) 4(22) 1.72 0.78
7 2(500) 3(6) 4(95 甲醇) 1(8) 1.87 0.95
8 2(500) 4(8) 3(甲醇) 2(10) 1.82 1.12
9 3(600) 1(2) 3(甲醇) 4(22) 1.95 0.96
10 3(600) 2(4) 4(95 甲醇) 3(18) 1.87 0.91
11 3(600) 3(6) 1(无水乙醇) 2(10) 1.84 0.85
12 3(600) 4(8) 2(95 乙醇) 1(8) 1.89 0.92
13 4(700) 1(2) 4(95 甲醇) 2(10) 1.81 1.29
14 4(700) 2(4) 3(甲醇) 1(8) 1.90 1.10
15 4(700) 3(6) 2(95 乙醇) 4(22) 1.87 1.23
16 4(700) 4(8) 1(无水乙醇) 3(18) 1.71 1.01
∑K1 7.22 7.22 6.95 7.34
∑K2 7.19 7.35 7.40 7.33
∑K3 7.55 7.52 7.61 7.30 G=29.25
∑K4 7.29 7.16 7.29 7.28 CT=G2 /N=53.4727
R 0.090 0.090 0.165 0.015
表 2 方差分析
方差来源 Q f S F F临界值
微波功率 /w A 0.020 1 3 0.006 7 4.79 F0.05 , 3.3 =9.28
溶剂流速 /mL/min B 0.019 1 3 0.006 4 4.57 F0.1, 3.3 =5.39
萃取溶剂 C 0.057 0 3 0.019 0 13.57 F0.2, 3.3 =2.92
萃取管内径 /mm D 0.000 6 3 0.000 2 0.143
误差效应 0.004 1 3 0.001 4
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表 3 总三萜含量及回收率实验结果(n=5)
部位 平均含量 /mg/g RSD/ 加入量 /mg 测得值 /mg 平均回收率 /
根 1.89 0.98 10.00, 12.00, 15.00 10.02, 11.71, 14.82 98.79
茎 1.42 1.21 10.00, 12.00, 15.00 10.04, 12.11, 14.82 100.16
叶 0.21 1.04 10.00, 12.00, 15.00 9.81, 11.82, 14.67 98.11
3 结论
(1)东紫苏中含有大量的三萜类化合物 ,主要集中在根
部(1.89 mg/g), 茎次之(1.42 mg/g), 叶中较低(0.21 mg/
g),所以根和茎部分是提取三萜类化合物的最好资源;(2)
通过实验优选出的最佳提取工艺为 A3B3C3D2 ,即微波功率
为 600W、溶剂流速为 6 mL/min、甲醇为萃取溶剂 、萃取管内
径为 10mm;(3)微波技术能使植物细胞破壁 、有效地提高
萃取量 [ 6] , 同时微波辅助流动萃取法具有速度快 、操作安全 、
萃取量高 、萃取后不需要过滤等优点 , 在中草药生产中具有
很好的应用前景。
参考文献:
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正交试验优化当归多糖铁的合成条件研究
张 玉 1 , 戴立泉 2 , 王凯平2＊
(1.华中科技大学同济医学院附属协和医院药剂科 ,湖北 武汉 430022;2.华中科技大学同济医学院药学
院 ,湖北武汉 430030)
收稿日期:2006-01-14
基金项目:湖北省科技厅攻关项目(2005AA301C04)
作者简介:张 玉(1968～ ),男 ,副教授 ,硕士导师,研究方向:从事新药开发研究 ,电话:027-85726302。
＊通讯作者:王凯平(1969～ ),女 ,副教授 ,研究方向:药物新剂型研究 ,电话:027-83657549, E-mail:wkpzcq@ 163.com。
关键词:当归多糖;当归多糖铁;合成;正交试验
中图分类号:R284.3 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2007)04-0581-02
伞形科(Umblliferae)当归属植物当归 [ Angelicasinensis
(Oliv.)Diels] ,是一味常用的传统中药 , 功能补血活血 、调
经止痛。研究表明 , 当归补血活血的作用主要是当归中的多
糖成分刺激红细胞生成 、促进造血祖细胞和多能造血干细胞
的增殖和分化 、从而提高造血水平的结果;换言之 ,当归多糖
是当归补血活血的主要活性成分 [ 1 ～ 7] 。铁是构成机体内血
红蛋白 、肌红蛋白 、细胞色素和多种氧化酶的重要成分 , 对于
维持机体的正常生理作用不可或缺 [ 8] 。
研究表明 [ 9 ～11] ,多糖与高价铁配合生成的多糖铁复合
物 , 用于缺铁性贫血的治疗 ,不仅具有较理想的稳定性 、水溶
性和吸收率等 , 而且可克服临床上治疗缺铁性贫血长期以来
所应用的各种亚铁盐制剂所固有存在的缺点(如游离的亚
铁离子刺激胃肠道 , 造成恶心 、呕吐 、腹泻 、便秘等消化道不
良反应;二价铁在体内产生内源性自由基 , 导致细胞膜脂质
过氧化而造成细胞损伤)。目前临床上已有多种多糖铁复合
物作为补铁剂应用于治疗缺铁性贫血 , 如右旋糖苷铁注射
液 、多糖铁胶囊等。
因此 ,若以当归多糖与高价铁配合生成当归多糖铁复合
物 ,有可能开发出一种新型的 、具有协同补血作用的补铁剂:
既可发挥高价铁补铁 、治疗缺铁性贫血的作用 , 又可发挥当
归多糖补血活血的活性。有鉴于此 , 在当归多糖铁复合物的
合成及理化性质的初步研究基础之上 , 本实验进一步对该复
合物的合成进行正交试验研究 ,考察影响其产量和铁含量的
因素 ,以优化其最佳合成条件 ,为对其潜在的双重补血作用
和机理的深入研究打下必要的基础。
1 仪器与试药
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