全 文 ：［收稿日期］ 20150603(027)
［第一作者］ 马蓉，硕士，从事藏药现代化开发与研究，Tel:18394536861，E-mail:635930592@ qq． com
［通讯作者］ * 贾正平，博士，主任药师，博士生导师，从事藏药现代化开发与研究，Tel:0931-8994676，E-mail:limaox2005@ aliyun． com
螃蟹甲大孔吸附树脂 50%乙醇洗脱物
对大鼠 CCl4 肝损伤的保护作用
马蓉1，2，李茂星1，2，贾正平1，2* ，邱建国2，栾飞2，3，张锦2，3
(1. 兰州大学 药学院，兰州 730000;
2. 兰州军区兰州总医院 全军高原环境损伤防治重点实验室，兰州 730050;
3. 甘肃中医药大学，兰州 730000)
［摘要］ 目的:探讨螃蟹甲中大孔吸附树脂 50%乙醇洗脱物对四氢化碳(CCl4)致急性肝损伤的保护作用及其可能机制。
方法:60 只 Wistar大鼠随机分为正常组，模型组，联苯双酯组(联苯双酯滴丸 100 mg·kg －1)，螃蟹甲大孔吸附树脂 50%乙醇洗
脱物(EPY-50)高、中、低剂量组(400，200，50 mg·kg －1)，连续 ig 给药 4 d，正常组和模型组均 ig 给予纯化水，第 3 天给药 1 h
后，ip 15%CCl4 橄榄油，正常组 ip橄榄油，染毒 2，22 h后再次给药，末次给药 1 h后，眼眶静脉丛采血，测血清中丙氨酸转氨酶
(ALT)，天冬氨酸转氨酶(AST) ，丙二醛(MDA)，超氧化物歧化酶(SOD)的水平，处死大鼠剖取肝脏，测肝指数及肝组织中
MDA，SOD，谷胱甘肽还原酶(GSH)含量，并做肝脏组织病理学检查。结果:与正常组比较，模型组大鼠血清中 AST，ALT 水平
显著增加(P ＜ 0. 01)，肝组织匀浆液中的 MDA含量明显升高(P ＜ 0. 05)，SOD，GSH 含量均明显降低(P ＜ 0. 05) ，肝脏指数显
著增加(P ＜ 0. 01)，表明 CCl4 造模成功。与模型组比较，EPY-50 高、中剂量组能显著降低 CCl4 致急性肝损伤大鼠血清中
AST，ALT水平(P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01)，并显著减少肝组织中 MDA 含量，提高 SOD，GSH 的含量，降低肝指数(P ＜ 0. 05，P ＜
0. 01)，改善肝组织病理状态。结论:EPY-50 对大鼠 CCl4 致急性肝损伤有保护作用，其作用机制可能与其抗氧化活性有关。
［关键词］ 螃蟹甲;大孔吸附树脂;保肝作用
［中图分类号］ Ｒ285. 5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2016)04-0132-05
［doi］ 10. 13422 / j． cnki． syfjx． 2016040132
Hepatoprotective Effects of 50% Ethanol Elute of Phlomis younghunsbandii by
Macroporous Adsorptive Ｒesins on CCl4-induced Acute Liver Injury
MA Ｒong1，2，LI Mao-xing1，2，JIA Zheng-ping1，2* ，QIU Jian-guo2，LUAN Fei2，3，ZHANG Jin2，3
(1. College of Pharmacy，Lanzhou University，Lanzhou 730000，China;
2. Key Laboratory of the Prevention and Cure for the Plateau Environment Damage，PLA，Clinical Pharmacy
Key Discipline of State Administration of Traditional Chinese Medicine (TCM)，Lanzhou 730050，China;
3. Gansu University of TCM，Lanzhou 730000，China )
［Abstract］ Objective:To explore the hepatoprotective effects and the possible mechanism of 50%
ethanol elute of Phlomis younghunsbandii by macroporous adsorptive resins (EPY-50)on CCl4-induced acute liver
injury rats． Method:Sixty Wistar rats were randomly divided into normal group，model group，bifendate group
(bifendate dropping pill，100 mg·kg －1) and EPY-50 high-dose，medium-dose and low-dose (400，200，
50 mg·kg －1)groups，continuous for 4 days by gavage． The rats in normal group and model group were given with
distilled water． 1 hour after administration on day 3，rats were ip injected with 15% CCl4 olive oil;rats in normal
group were ip injected with with olive oil，After contamination for 2 h and 22 h，all groups were administered again
and blood was taken from orbital vein at 1 h after the last administration． The levels of serum aspartate
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aminotransferase (AST)，alanine aminotransferase (ALT) ，malondialdehyde (MDA) ，and superoxide dismutase
(SOD)were detected，then the rats were sacrificed for and livers were taken． The liver index and MDA，SOD，
and glutathione reductase (GSH)levels in the liver tissues;in addition，histopathological examination was also
done for the livers． Ｒesult:Compared with the normal group，serum AST and ALT levels were significantly
elevated in model group (P ＜ 0. 01) ，MDA levels were significantly increased (P ＜ 0. 05) ，SOD and GSH levels
were statistically reduced in the liver tissues (P ＜ 0. 05) ，the liver index was significantly increased (P ＜ 0. 01) ，
indicating that the model of CCl4 injection was successful． Compared with the model group，EPY-50 with high-
dose，and medium-dose (400，200 mg·kg －1)could significantly decrease the levels of AST，ALT (P ＜ 0. 01，
P ＜ 0. 01)，significantly decrease MDA level，increase the SOD and GSH levels，reduce liver index and improve
pathological state of the liver tissues． Conclusion:EPY-50 has hepatoprotective effects on CCl4-induced acute
liver injury，and the mechanism may be associated with its antioxidative activity．
［Key words］ Phlomis younghunsbandii;macroporous adsorptive resins;hepatoprotective effect
肝炎和肝硬化发病率、病死率逐年攀升，严重威
胁着人们的生命健康。过量饮酒，药物及外源性化
学物质中毒等均会造成肝脏损害，其长期存在有可
能会导致肝纤维化，甚至肝硬化［1］。脂质过氧化反
应是机体组织早期发生功能异常，刺激机体产生氧
化应激的共同途径，也是外源性物质或药物诱发机
体肝脏损伤及最终导致肝脏病变的重要因素。四氯
化碳(CCl4)诱导的大鼠肝损伤症状与临床急性肝
损伤相似，故常用于保肝药物的筛选和评价［2］。我
国传统中医药在防治肝损伤方面具有独特优势，甘
草酸二铵，联苯内酯，甲基阿魏酸及水飞蓟素等活性
成分，在治疗肝损伤方面取得了很好的疗效［3-4］，从
天然药物中开发挖掘具有良好保肝作用，安全性好
的有效药物仍然是当前的研究热点。
螃蟹甲为唇形科糙苏属多年生草本植物螃蟹甲
的干燥块根，传统中医药及民族医药理论认为螃蟹
甲具有祛风活络，强筋壮骨，清热消肿，止咳祛痰之
功效，临床应用广泛，但是目前对螃蟹甲的保肝作用
暂时还未见报道。苯乙醇苷类成分(phenylethanoid
glycosides，PhGs)是天然酚苷类化合物，药理研究表
明其具有较强的抗氧化、保护肝脏、抗肿瘤等独特的
生物活性和较强的清除自由基的能力［5］。本课题
组在前期的实验中已证明螃蟹甲富含苯乙醇苷类化
合物，并分别从不同来源产地的螃蟹甲药材和 1 个
螃蟹甲制剂中均检测出 3 个苯乙醇苷类成分，且其
含量差别较大，其中 acteoside［6］的含量最多是螃蟹
甲中主要的苯乙醇苷类化合物。最新研究发现
acteoside具有抗氧化作用，能够清除自由基［7］，具有
与超氧化物歧化酶(SOD)，谷胱甘肽还原酶(GSH)
相似的作用。目前有关天然苯乙醇苷类成分的保肝
活性及其机制研究未见报道，本研究以 CCl4 诱导大
鼠肝损伤模型评价螃蟹甲大孔吸附树脂 50%乙醇
洗脱物(主要含苯乙醇苷)的保肝活性及其作用
机制。
1 材料
1. 1 动物 健康雌性 SPF 级 Wistar 大鼠 60 只，体
重(180 ± 20)g，由甘肃中医学院实验动物中心提
供，合格证号 SCXK(甘)2011-0001。在兰州军区总
医院动物实验科饲养 1 周(温度在 18 ～ 25 ℃)。各
实验组均给予动物普通饲料饲养，自由摄食饮水。
1. 2 药品与试剂 螃蟹甲购自西藏(林芝)，由兰
州大学马志刚教授鉴定为唇形科糙苏属植物螃蟹甲
Phlomis younghusbandii 的 干 燥 块 根。对 照 品
acteoside为本实验室自制(从螃蟹甲药材中分离得
到，经光谱学和波普学分析鉴定其结构，并用 HPLC
面积归一化法计算，纯度在 98%以上)。联苯双酯
滴丸 (浙 江 万 邦 药 业 股 份 有 限 公 司，批 号
A02140604)。CCl4 及分离提取溶剂均为分析纯。
天冬氨酸转氨酶(AST)试剂盒及丙氨酸转氨酶
(ALT)试剂盒［希森美康生物科技(无锡)有限公
司，批号 Ｒ4003］。丙二醛(MDA)试剂盒，SOD 试剂
盒及 GSH 试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号
A003-1)。
1. 3 仪器 BP210S 型电子天平(赛多利斯有限公
司)，Multiscan MK3 型酶标仪(美国 Thermo Electron
公司)，LX20 型全自动生化检测仪(美国 Beck-man
公司)，TGL-16G型台式离心机(上海安亭仪器厂)，
UV-HP8453 型紫外-可见光分光光度计(美国惠普
公司)。
2 方法
2. 1 螃蟹甲大孔吸附树脂 50%乙醇洗脱物(EPY-
50)的制备［6，8］ 根据课题组前期对螃蟹甲化学成
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分研究基础，进一步优化 D101型大孔树脂从螃蟹甲
水提取物中分离富集各类成分。200 ～ 400 nm 波长
紫外扫描结果，表明 50%乙醇洗脱物与毛蕊花糖苷
具有相似紫外扫描图，均在 330 nm 处有较大的吸
收，且峰型特征基本相似。总苯乙醇苷含量由水提
取物中的 1. 6% 提高到 21. 6%，含量提高了
13. 5 倍。
2. 2 肝损伤动物模型制备 参照文献［9］的方法
并做方法改进(如改进给药次数，CCl4 浓度)，将 60
只 Wistar大鼠，随机分成正常组，模型组，联苯双酯
组(联苯双酯滴丸 100 mg·kg －1)，EPY-50 高、中、低
剂量组(400，200，50 mg·kg －1)，每组 10 只。相应药
物 ig给药(正常组和模型组给予纯化水)，连续 4 d，
第 3 d 早晨给药 1 h 后开始造模，正常组 ip 橄榄油
(1. 25 mL·kg －1)，其余组均 ip 15% CCl4 橄榄油
(1. 25 mL·kg －1)，染毒后禁食不禁水，染毒后 2，22
h再次 ig 给药，末次给药 2 h 后大鼠静脉丛眼眶取
血，静置 30 min，4 000 r·min －1离心 10 min，分离血
清，检测 ALT，AST，MDA，SOD 的水平，24 h 后再次
称重，剖取肝脏组织称重，并取肝右叶相同部位肝组
织，做肝脏组织病理学检查;并另取右叶相同部位，
精密称取 0. 1 g，制备肝组织匀浆液，测定肝脏组织
匀浆液中 MDA，SOD，GSH的含量。
2. 3 体重测定 实验第 1 天称量大鼠体重，计算灌
胃给药体积。同时，染毒 24 h 后再次称量大鼠体
重，记录数据观察造模前后大鼠体重的变化。
2. 4 肝脏指数测定及病理学检查 剖取完整肝脏
组织，称重，计算肝脏指数 =全部肝脏组织 /动物体
重 × 100%。取右叶肝脏以 10%中性甲醛固定，常
规脱水，石蜡包埋，切片，苏木素伊红(HE)染色供
常规光镜观察肝组织的病理变化［10-11］。
2. 5 血清 AST，ALT的测定 本实验从大鼠眼眶静
脉丛采血 1. 5 mL，室温条件 4 000 r·min －1离心
10 min，分离血清，分离后的血清分别用生理盐水稀
释 5 倍，使用全自动生化检测仪测定 AST，ALT 的
活性。
2. 6 血清 MDA，SOD的测定 分离血清后，参照试
剂盒说明书的方法使用酶标仪测定肝损伤大鼠血清
中 MDA，SOD含量。
2. 7 肝脏组织匀浆液 MDA，SOD，GSH 测定［12］ 取
肝右叶相同部位，精密称取 0. 1 g，放入盛有 0. 9 mL
0. 9%生理盐水的灭菌离心管中，剪碎组织，使用机
械匀浆机在冰水浴条件下匀浆，3 000 r·min －1离心
10 min，取上清，用 0. 9%氯化钠溶液稀释适宜倍数
后备用。MDA，SOD，GSH 测定严格按照试剂盒说
明书操作进行。
2. 8 统计学方法 使用 SPSS 16. 0 统计软件进行
统计学处理，各组实验数据以 珋x ± s 表示，组间差异
比较采用 t检验，P ＜ 0. 05 为差异有统计学意义。
3 结果
3. 1 大鼠一般情况观察 灌胃 4 d 及造模后，正常
组大鼠精神状态饱满，饮食良好，体重增长较快。模
型组的大鼠精神状态欠佳，注射 15% CCl4 后大鼠身
体移动缓慢，类似扭体反应，饮水增加，体重增加
较慢。
3. 2 对大鼠血清 AST，ALT，MDA，SOD水平的影响
与正常组比较，模型组大鼠血清中的 AST，ALT活
性显著升高(P ＜ 0. 01)，血清中 MDA 含量相对增
大，SOD活性降低(P ＜ 0. 05)。与模型组比较，EPY-
50 高、中剂量组大鼠血清中 AST，ALT 活性显著下
降(P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01)，结果呈现剂量依赖性;
EPY-50 低剂量组 AST，ALT 活性有降低趋势，EPY-
50 高、中、低剂量组大鼠血清中 MDA均有明显降低
(P ＜ 0. 05)，且呈现剂量依赖性，SOD 活性变化无统
计学意义。见表 1。
3. 3 对大鼠肝脏指数及肝脏匀浆液 MDA，GSH，
SOD活性的影响 与正常组相比，模型组肝组织匀
浆液中 MDA含量明显升高(P ＜ 0. 05)，SOD 活性，
GSH含量均明显降低(P ＜ 0. 05)，模型组大鼠的肝
脏指数显著增加(P ＜ 0. 01)，表明 CCl4 造模成功。
与模型组相比，EPY-50 高、中剂量组大鼠肝组织中
的 MDA均有明显降低(P ＜ 0. 05);EPY-50 高、中、
低剂量组大鼠肝组织中 SOD活性，GSH含量明显升
高(P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01)，但没有明显的剂量依赖性;
EPY-50 高、中剂量组的肝脏指数明显减小(P ＜
0. 05)。见表 2。
3. 4 对大鼠肝组织病理学改变的影响 正常组大
鼠肝小叶周围正常，肝索以中央静脉为中心呈放射
状排列有序，细胞结构清晰完整，无坏死。与正常组
比较，模型组大鼠肝索排列紊乱，肝小叶周围细胞点
状坏死严重，肝细胞明显肿胀呈圆形核碎裂，局部细
胞浆凝固性坏死，脂肪变性，肝小叶中央静脉周围炎
症细胞浸润。与模型组相比较，EPY-50 高剂量，中
剂量能明显减轻肝损伤大鼠肝小叶周围病变。见
图 1。
4 讨论
CCl4 是经典的化学性肝损伤动物模型的致毒
剂。此种模型可造成实验动物血清 AST，ALT 和肝
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表 1 螃蟹甲大孔吸附树脂 50%乙醇洗脱物(EPY-50)对 CCl4 致急性肝损伤大鼠血清中的 AST，ALT，SOD，MDA水平的影响 (珋x ± s，n = 10)
Table 1 Effects of EPY-50 on serum AST，ALT，SOD and MDA levels of rats with CCl4-induced acute liver injury (珋x ± s，n = 10)
组别
剂量
/mg·kg －1
AST
/U·L －1
ALT
/U·L －1
MDA
/μmol·L －1
SOD
/U·mL －1
正常 － 137 ± 21 25 ± 4 11. 7 ± 4. 8 134 ± 22
模型 － 6 498 ± 1 110 1) 2 494 ± 3821) 12. 1 ± 4. 3 110 ± 81)
联苯双酯 100 4 912 ± 1 094 1 455 ± 269 13. 3 ± 8. 51) 112 ± 15
EPY-50 400 2 040 ± 3643) 1 004 ± 203 2) 6. 4 ± 1. 92) 122 ± 16
200 2 900 ± 5312) 1 476 ± 225 6. 8 ± 1. 72) 116 ± 34
50 5 252 ± 936 1 803 ± 371 7. 6 ± 1. 42) 109 ± 34
注:与正常组比较1)P ＜ 0. 01;与模型组比较2)P ＜ 0. 05，3)P ＜ 0. 01(表 2 同)。
表 2 EPY-50 对 CCl4 致急性肝损伤大鼠肝脏指数及肝脏组织中MDA，SOD，GSH含量的影响 (珋x ± s，n = 10)
Table 2 Effects of EPY-50 on liver index and MDA，SOD，and GSH levels in liver homogenate of rats with CCl4-induced acute liver injury
(珋x ± s，n = 10)
组别
剂量
/mg·kg －1
MDA
/μmol·g － 1
SOD
/U·mg －1
GSH
/mg·g － 1
肝指数
/%
正常 － 33. 4 ± 16. 9 139 ± 83 627 ± 514 2. 46 ± 0. 17
模型 － 59. 9 ± 26. 7 1) 25 ± 21 1) 37 ± 8 1) 3. 32 ± 0. 28 1)
联苯双酯 100 40. 7 ± 30. 8 33 ± 21 55 ± 37 3. 16 ± 0. 26
EPY-50 400 30. 7 ± 18. 72) 101 ± 753) 242 ± 1693) 3. 06 ± 0. 362)
200 32. 8 ± 14. 82) 105 ± 862) 56 ± 22 3. 03 ± 0. 192)
50 81. 7 ± 67. 7 109 ± 34 449 ± 3343) 3. 25 ± 0. 21
A．正常组;B． 模型组;C． 联苯双酯 100 mg·kg －1组;D ～ F． EPY-50
400，200，50 mg·kg －1组
图 1 螃蟹甲大孔吸附树脂 50%乙醇洗脱物(EPY-50)对 CCl4 致急
性肝损伤大鼠肝脏组织病理改变的影响 (HE，× 200)
Fig． 1 Effects of EPY-50 on histopathological changes of liver
tissues in rats with CCl4-induced acute liver injury (HE，× 200)
脏组织匀浆液中 MDA升高，SOD，GSH含量降低，肝
脏组织结构产生病变，且重复性好，故本实验采用此
种肝损伤动物模型［13］。
转氨酶是非特异性细胞内功能酶，其中 ALT 主
要存在于细胞浆中，AST主要位于线粒体内，肝损伤
时，ALT，AST 溢出细胞，渗入血液，使得血清中
AST，ALT 水平升高，因此血清中 ALT，AST 水平高
低在一定范围内可反映肝细胞的损伤程度［14］。本
研究结果表明，模型组大鼠血清中 AST，ALT水平显
著升高，且其肝脏组织病理学检查出现肝索排列紊
乱，肝小叶周围细胞点状坏死严重等明显病变。由
此表明 15%CCl4 橄榄油可以成功复制肝损伤模型。
MDA是氧自由基攻击细胞膜中的多不饱和脂肪酸
发生脂质过氧化反应的中间产物，能与细胞膜上的
核酸或者蛋白质结合，损坏膜的结构和功能，其含
量可以反映脂质过氧化的程度［15］。SOD是肝细胞
内有效的抗氧化防御的酶反应体系之一，是清除
活性氧簇(ＲOS)的第一道防线［16］，其主要作用是
通过清除体内的超氧阴离子自由基(O －2·)抑制脂
质过氧化反应来保护肝细胞。GSH 是细胞内一种
重要的抗氧化酶，在谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-
Px)的催化下，接受大量电子后氧化成二硫化谷胱
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甘肽(GSSG)，其消耗电子的同时减少了氧自由
基，过氧化氢及脂质过氧化物的形成。为此，GSH
亦可作为评价氧自由基脂质过氧化损伤的较敏感
的指标［17］。
笔者通过检测肝组织和血清中的 MDA，GSH，
SOD含量变化来评价肝脏组织脂质过氧化损伤的
程度。实验结果表明，较之模型组，EPY-50 高、中、
低剂量组大鼠肝脏组织和血清中 MDA 水平显著降
低，SOD活性呈现增加趋势，肝脏组织中 GSH 的含
量亦显著增加。说明螃蟹甲中苯乙醇苷类成分可缓
解由 CCl4 引起的大鼠肝损伤，其机制可能与其抗氧
化作用和清除氧自由基的能力相关。
综上所述，以苯乙醇苷为主要成分的 EPY-50
对急性肝损伤具有保护作用，其机制可能与苯乙醇
苷的抗氧化作用及清除氧自由基，抑制脂质过氧化
产物 MDA 的生成，并相对恢复 SOD，GSH 水平，使
得过氧化与抗氧化体系恢复平衡状态，降低转氨酶
水平等相关。本研究结果为从螃蟹甲和其他含苯乙
醇苷类成分植物中开发具有肝脏保护活性的新药提
供研究基础和思路。
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［责任编辑 聂淑琴］
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第 22 卷第 4 期
2016 年 2 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 22，No． 4
Feb．，2016