全 文 ：试验研究 现代园艺 2011年第2期
活血丹嫩茎无性系建立的研究
徐 娜 宁淑香 李 洁 李志东
（辽宁师范大学生命科学学院，辽宁大连 116029）
摘 要：为满足人们栽培活血丹对种苗的需求，以活血丹嫩茎为材料，进行了愈伤组织诱导、分化，试管苗的生根、扦插和移
植的研究，成功地建立起活血丹嫩茎的无性系。结果证明：MS+BA1mg·L-1+CH10mg·L-1+2,4-D2.0~2.5mg·L-1是嫩茎愈
伤组织诱导培养的理想培养基；MS+BA0.8mg·L-1+NAA0.1mg·L-1+ AgN030.2 mg·L-1是嫩茎愈伤组织分化培养的理想培
养基；1/2MS+BA 0.8 mg·L-1+NAA 0.1mg·L-1+ GA30.4mg·L-1是不定芽继代分化培养的理想培养基；MS+IBA 0.6mg·
L-1+NAA0.1mg·L-1是生根培养的理想培养基。通过不定芽继代分化培养年繁殖量可达4.19.1个。移植到山林下的试管苗保
持了野生活血丹的各种生物性状，且生长旺盛，当年开花结果。
关键词:活血丹；无性系；培养基
将无茎段菌切成长0.2~0.3cm、无生长点的嫩茎段，
接种于附加不同浓度 NAA、2,4-D 的 MS+BA 1mg·
L-1+CH 10mg·L-1的培养基上进行愈伤组织的诱导
培养。培养到50天时统计愈伤组织的诱导率和长
势。试验重复了3次，每种培养基接种100个材料。
1.3.2 不同基本培养基对愈伤组织分化培养的影响
试验。把以上由嫩茎诱导培养的愈伤组织切成直径
为0.15cm左右的块状后，接种到附加BA0.8mg·
L-1+NAA0.1mg·L-1+AgN030.2mg·L-1的MS、1/2MS、
1/3MS、1/4MS、B5和N6六种培养基上，进行愈伤组织
的分化培养。分化培养试验重复了4次，每种培养基
接种100个材料。
1.3.3 不定芽的继代分化培养试验。将以上分化培养
的不定芽从基部切下后，再切成具有2个生长点的
不定芽段，接种以 1/2MS+BA 0.8 mg·L-1+NAA 0.1
mg·L-1+GA30.4mg·L-1的培养基上，进行不定芽的
分化继代培养。不定芽的分化继代培养试验重复了
3次，每次重复继代培养6代，每种处理接种100个
材料。
1.3.4 不同培养基对生根培养的影响试验。将上述继
代分化培养的不定芽从基部切下后，接种到不同的
培养基中，进行生根培养。生根培养试验重复了3
次，每次重复试验接种培养200个材料。
1.3.5 不同移栽基质对移栽的影响试验。把在4号培
养基上培养的试管苗用镊子取出，用20℃左右的清
水洗去根部的培养基，移栽到上面分别铺着一层约
6cm厚的山皮土、园土、河沙和炉灰渣的温室苗床
上。移栽后前13天保持湿度95%左右、温度17~28
℃、没有直射光的环境条件。试管苗移栽进行了3次
试验，每次试验分别移栽或扦插500个材料。
2 结果与分析
活血丹（Glechomalongituta）又称佛耳草、金线
草、遍地香、地钱儿等，属于唇形科活血丹属多年生
草本植物。生长于林缘、林下、路旁、溪边和山坡等环
境中，在我国除了青海、西藏、新疆和甘肃等地区外，
其它地区均有分布[1-3]。活血丹的茎叶含有左旋松樟
酮、左旋薄荷酮、胡薄荷酮等成分，具有清热解毒、散
瘀消肿等功效，能治风湿性关节炎、跌打损伤、风寒
咳嗽、牙疼、蛇咬、疥疮等疾病[2,4]。由于活血丹具有多
种药用价值，多年来人们总在采集药用。近年来在辽
宁南部地区，人们将其采集晒干粉碎后，作为养猪、
养鸡的饲料添加剂，对预防疾病产生了明显效果。为
此，养殖人大的采集活血丹作为野生饲料添加剂，从
而导致野生的活血丹迅速减少而难以采到。为满足
人们的需要，近年来有人试图对活血丹进行人工种
植。但是，由于人们的大量采集不仅使其难以形成种
子，而且可采挖的野生植株也极为有限，从而极大地
限制了活血丹的人工栽培。为了满足人们栽培活血
丹对种苗的需求，我们对其进行了嫩茎无性系建立
的研究。虽然目前已有活血丹组织培养研究的报道
[5-6]，但迄今未见活血丹嫩茎无性系建立研究的报道。
1 试材与方法
1.1 材料来源及灭菌方法
上一年的秋天，将大连旅顺英歌石山坡上的生
长非常旺盛的活血丹做好标记，当年的5月上旬，植
株高10cm左右时，将地上部分采回实验室后，剪成
长4cm的嫩茎段，放入250mL的磨口广口瓶中进行
灭菌。灭菌方法参见王宇等关于虎杖的研究[7]。
1.2 培养条件
培养条件参见王宇等对虎杖的研究[7]。
1.3 试验方法
1.3.1 不同生长素对嫩茎愈伤组织诱导的影响试验。
④
DOI:10.14051/j.cnki.xdyy.2011.02.006
2.5 不同移栽基质对移栽的影响
在上面铺着炉灰渣的苗床上，移栽的试管苗平
均移栽成活率为97.2%。移栽后12天可见成活的试
2.3 不定芽的继代分化培养
观察统计表明，不定芽经过40d的培养，1个不
定芽段平均可分化形成叶片嫩绿且较伸展、由4.1
个高1以上不定芽组成丛生不定芽。这个结果不仅
证明不定芽的分化继代培养1年的繁殖系数达到了
4.19.1个，而且也证明1/2MS+BA0.8mg·L-1+NAA0.1
mg·L-1+GA30.4mg·L-1培养基是活血丹不定芽继代
分化培养的理想培养基。
2.4 不同培养基对生根培养的影响
接种后25天观察统计，结果见表3。在4号培
养基上，生根率、每株生根数以及长势都是最好的。
观察也表明，接种4号培养基上不定芽接种后6天
可见形成根原基，随后，伴随着根数的增加和根系的
生长，试管苗迅速生长。培养到25天时，就会培养成
为1株生长非常旺盛的试管苗，并且重复试验的结
果基本一致。这说明 MS+IBA 0.6 mg·L-1+NAA 0.1
mg·L-1培养基是活血丹不定芽生根培养的理想培养
基。
理想培养基。
2011年第2期 现代园艺 试验研究
2.1 不同生长素对嫩茎愈伤组织诱导的影响
培养到50天时观察统计，结果见表1。由表2
说明，在不加NAA或2,4-D的培养基上，所培养的
嫩茎段不能诱导形成愈伤组织；在附加不同浓度
NAA或2,4-D的培养基上，都能不同程度的诱导形
成愈伤组织，但其生长素的种类不同、浓度不同，愈
伤组织的诱导效果不同。其中在2,4-D浓度为2.0
mg·L-1和2.5mg·L-1的两种培养基上，不仅愈伤组
织的诱导率为100%，而且诱导的愈伤组织长势好。
观察还表明，在这两种培养基上培养12天可见形成
半透明状浅黄色的愈伤组织。培养到50天时，就会
生长为由许多质地较为疏松、直径1~1.8cm绿色的
愈伤组织。从外观上看，这样的愈伤组织是具有分化
能力的愈伤组织。以上结果说明：MS+BA 1mg·
L-1+CH10mg·L-1+2,4-D2.0~2.5mg·L-1的培养基是
活血丹嫩茎愈伤组织诱导培养的理想培养基。
2.2 不同基本培养基对愈伤组织分化培养的影响
培养到60天时观察统计，结果见表2。由表说
明除了N6培养基外，在其它基本培养基上培养的愈
伤组织均可分化。但就其愈伤组织的分化率和分化
不定芽的长势看，在以MS为基本培养基的培养基
上愈伤组织的分化率最高、分化的不定芽长势也最
好。并且4次重复试验的结果一致。观察表明，在以
MS为基本培养基的培养基上培养的愈伤组织培养
前15天基本没有变化，从第16天开始，可见有的愈
伤组织块出现绿色的芽点。接着，伴随着分化绿色芽
点的增加，先分化的绿色芽点逐渐生长为不定芽。培
养到60天时，1个培养的愈伤组织块就会分化生长
成为由 2~5 个不定芽组成的不定芽丛。这说明
MS+BA 0.8 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+ AgN030.2 mg·
L-1这一培养基是活血丹嫩茎愈伤组织分化培养的
表1不同生长素对嫩茎愈伤组织诱导状况统计表
2,4-D NAA 愈伤组织诱导率（%） 愈伤组织长势
0 0 0 -
0.5 0 16 +
1.0 0 27 +
1.5 0 57 +
2.0 0 100 ++
2.5 0 100 ++
3.0 0 66 +
0 0.5 11 +
0 1.0 21 +
0 1.5 46 +
0 2.0 88 +
0 2.5 56 +
注：-不生长；+长势一般；++长势较好。（以下同略）
表2 不同基本培养基对愈伤组织分化培养的影响
基本培养基 愈伤组织分化率% 分化不定芽长势
MS 89 ++
1/2MS 54 ++
1/3MS 53 +
1/4MS 22 +
B5 23 +
N6 0 -
表3 不同浓度生长素对愈伤组织诱导的影响
编号 基本培养基
生根
率%
生根
条数
生长
势
1 MS+IBA0.3mg·L-1+NAA0.1mg·L-1 56.5 3.2 +
2 1/2MS+IBA0.3mg·L-1+NAA0.1mg·L-1 33 2.5 +
3 1/3MS+IBA0.3mg·L-1+NAA0.1mg·L-1 35 1.9 +
4 MS+IBA0.6mg·L-1+NAA0.1mg·L-1 96.5 5.3 ++
5 1/2MS+IBA0.6mg·L-1+NAA0.1mg·L-1 75 5.3 ++
6 1/3MS+IBA0.6mg·L-1+NAA0.1mg·L-1 56 2.6 +
7 MS+IBA0.3mg·L-1+IAA0.1mg·L-1 0 0 -
8 1/2MS+IBA0.3mg·L-1+IAA0.1mg·L-1 5 1 +
9 1/3MS+IBA0.3mg·L-1+IAA0.1mg·L-1 0 0 -
10 MS+IBA0.6mg·L-1+IAA0.1mg·L-1 0 0 -
11 1/2MS+IBA0.6mg·L-1+IAA0.1mg·L-1 0 0 -
12 1/3MS+IBA0.6mg·L-1+IAA0.1mg·L-1 0 0 -
⑤
管苗发出新叶。移栽后前30天生长较慢，后生长加
速。这说明炉灰渣是活血丹试管苗移栽的理想基质。
2.6 试管苗的移植
把在温室中移栽成活的试管苗，于5月下旬移
植到大连石门山的林下。移植成活率为99%。移植
成活的试管苗不仅保持了野生活血丹的各种生物性
状，而且生长旺盛，当年开花结果。
3 讨论
在进行嫩茎愈伤组织的诱导试验中，添加不同
浓度的2,4-D的培养基愈伤组织的诱导效果明显的
好于添加NAA的培养基。这说明2,4-D对愈伤组织
诱导作用强于NAA，这种现象与前人的研究结果一
致[8]。
在愈伤组织分化培养中，出现了以MS为基本
培养基的愈伤组织不仅分化率高，而且分化的不定
芽长势好的现象。产生这种现象是由于MS培养基
营养成分全面且离子浓度较高、从而能够满足细胞
分化和增殖对营养的大量需求引起的。
在不定芽的继代分化培养中40d能繁殖出4.1
试验研究 现代园艺 2011年第2期
个不定芽。按照这个繁殖速度，每年能繁殖出4.19.1
个（32万多个）后代，这个繁殖速度不仅说明本研
究能达到快速繁殖目的，而且也为转基因等研究奠
定了技术基础。
（收稿：2010-09-21）
参考文献
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京:科学出版社,1980:636
[2]李书心主编.辽宁植物志(下册)[M].沈阳:辽宁科学技术出版社,
1991:204-205
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大学出版社,1993:649
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术出版社,2006:2415-2416
[5]陈光登,黎云祥,韩素菊,李婷,兰英.活血丹组织培养与快速繁殖
研究[J].广西植物,2007,27(2):256-271
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隆[J].生态学报.2000,20(2):207-211
[7]王宇,方晨,刘洋,徐娜,姜长阳.虎杖组织培养及高效无性系的建
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社,1996:55-56
⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤⑤
观赏植物花期调控技术研究进展
程永生
（湖南保靖县林业局 416500）
摘 要：本文简要介绍了花期调控的基本理论，从温度、光照、植物生长调节剂和栽培管理四个方面综述了观赏植物花期调
控的研究进展，并从三个方面指明了今后的研究方向。
关键词：观赏植物;花期调控;开花
究表明，植株感受低温的部位是茎尖分生组织有丝
分裂旺盛的细胞和处于生长旺盛时期的幼叶，某些
二年生植物和一些冬性一年生植物必须经过一定时
期的低温，才能形成花原基[2]。③光周期现象：根据植
物对光周期的反应，可将其分为3种类型，即短日照
植物、长日照植物与日中性植物。使长日照植物开花
的最短日照长度，或使短日照植物开花的最长日照
长度，称为临界日长。日照长度大于此值则短日照植
物不能开花，小于此值则长日照植物不能花芽分化
[3]。④激素平衡学说：该学说用GA3（赤霉素）/CTK
（细胞分裂素） 或CTK/GA3的平衡来解释花芽分
化。现已发现，花芽分化不但与CTK/GA3有密切的
关系，还与 CTK/ABA（脱落酸），IAA（吲哚乙酸）
/ABA，ZR（玉米素）+IAA/GA3等比值有密切关系[4]。
2 花期调控的技术研究
花期调控是广大园艺工作者十分关注的重要问
题。通过花期调控可以使花卉集中在同一个时期开
花，为节假日或其它需要提供定时用花；也能使花卉
均衡生产，解决市场上的旺淡矛盾；使不同花期的父
母本同时开花，解决杂交授粉上的矛盾，有利于育种
工作；在掌握开花规律后把一年1次开花改为一年
2次或2次以上开花，缩短栽培期，可提高开花率。
因此，对观赏植物花期调控的研究十分必要。
1 花期调控的基本理论
花期调控的核心问题就是如何促进或抑制花芽
分化。花芽分化及开花的理论概括起来有以下几点：
①碳氮比（C/N）学说：该学说认为植物体内含氮化
合物与同化糖类含量的比例是决定花芽分化的关
键，当含碳化合物较高时，花芽分化受促进；含氮化
合物较高时，营养生长受促进[1]。②春化作用：大量研
⑥