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两产地罗勒挥发油化学成分比较



全 文 :[收稿日期] 20111219(004)
[通讯作者] * 袁旭江,副研究员,在读博士,从事中药开发利
用及 其 质 量 分 析,Tel:020-39352540,E-mail:
xjyuan. xj@ 163. com
两产地罗勒挥发油化学成分比较
袁旭江1,2* ,林励1,谭翠明2
(1. 广州中医药大学中药学院,广州 510006;2. 广东药学院,广州 510006)
[摘要] 目的:比较分析广东广州与安徽亳州产罗勒挥发油化学成分差异。方法:用水蒸气蒸馏法提取罗勒挥发油,用
气相-质谱联用仪(GC-MS)对挥发油成分进行分析,并通过峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量;采用薄层色谱法进行
比较分析。结果:广州产罗勒挥发油鉴定出 29 种化合物,并确定了其相对含量,占总含量的 99. 90%,主成分为对烯丙基茴香
醚(83. 082%)、芳樟醇(4. 734%)、τ-杜松醇(2. 715%)、桉叶油素(2. 251%)。亳州产罗勒挥发油鉴定出 31 种化合物,并确定
了其相对含量,占总含量的 98. 65%,主成分为芳樟醇(26. 909%)、肉桂酸甲酯(21. 85%)、τ-杜松醇(17. 411%)、喇叭茶醇
(14. 154%) ;薄层色谱显示广州产罗勒挥发油比亳州产者多了 2 个特征斑点。结论:产地对罗勒挥发油化学成分具有显著影
响,气质联用和薄层色谱法均可用于罗勒挥发油的鉴别和产地分析,提示罗勒开发利用应明确品质产地。
[关键词] 罗勒;挥发油;气质联用;薄层色谱法
[中图分类号] R284. 1 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903(2012)11-0121-05
[DOI] CNKI:11-3495 /R. 20120327. 2700. 015 [网络出版时间] 2012-03-27 17:06
[网络出版地址] http:/ / www. cnki. net / kcms / detail /11. 3495. R. 20120327. 1706. 015. html
Studies on Chemical Constituents of Volatile Oil of Ocimum basilicum
from Two Different Sources
YUAN Xu-jiang1,2* ,LIN Li1,TAN Cui-ming2
(1. Department of Chinese Medicine,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510006,China;
2. Guangdong Pharmaceutical University,Guangzhou 510006,China)
[Abstract] Objective: To analyze the chemical constituents of volatile oil from Ocimum basilicum
collected in two different sources. Method:The volatile components were extracted by steam distillation method,
and analyzed by GC-MS. Peak area normalization method was used for the relative content of volatile oil. TLC was
used for the identification of two samples. Result:Twenty-nine components were identified in O. basilicum from
Guangzhou,which accounted for 99. 90% of the total relative content. The main components were p-allylanisole
(83. 082%) ,linalool 4. 734%) ,tau-cadinol (2. 715%) ,eucalyptol (2. 251%). Thirty-one components were
identified in O. basilicum from Bozhou,which accounted for 98. 65% of the total relative content. The main
components were linalool (26. 91%) ,methyl cinnamate (21. 85%) ,tau-cadinol (17. 41%) ,ledol
(14. 154%). Two characteristic spots could not be identified in O. basilicum from Bozhou but from Guangzhou.
Conclusion:The volatile oil from different sources had obviously different chemical constituents. GC-MS and TLC
can be used for the identification and analysis of sources. It pointed out that O. basilicum should clear about its
quality and sources before exploitation and application.
[Key words] Ocimum basilicum;volatile oil;GC-MS;TLC
唇形科罗勒属一年生植物罗勒,又称兰杏(《齐
民要术》)、香菜(《嘉柏本草》)、翳子草(《本草纲
目》)、九层塔、香花子(《岭南采药录》)、家佩兰
(《中国药植志》)[1],罗勒全草可入药,能疏风解表、
化湿和中、行气活血、解毒消肿,主治感冒头疼、发热
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第 18 卷第 11 期
2012 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 18,No. 11
Jun.,2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.11.043
咳嗽、中暑、食积不化等[2]。罗勒的化学成分主要
为挥发油、黄酮、香豆素、甾体化合物等[3]。罗勒挥
发油作为罗勒的有效成分之一,具有抑菌、降血压、
抗血栓、延长睡眠时间、驱蚊、抗肿瘤和抗氧化等活
性[4-8]。目前国内外对罗勒商业化栽培主要目的在
于尽量提高主成分含量,通过精油单体分离生产出
供作调香用和药用的单一原料。罗勒在我国广东和
安徽均有栽培,且尚未见两地药材质量比较报道。
故作者采用气质联用法比较分析广东广州和安徽亳
州产罗勒的挥发油化学成分,揭示产地对罗勒挥发
油主成分影响程度,并建立其薄层色谱鉴别方法,为
穗产罗勒产业化栽培和开发利用提供依据。
1 材料
6890-5973N型气相色谱-质谱联用仪(美国安捷伦
公司) ,乙醚、石油醚、乙酸乙酯、无水硫酸钠等试剂
(AR)。薄层色谱硅胶 G预制板(青岛海洋化工厂)。
罗勒药材分别采自广东广州和安徽亳州,均为
栽培品种,经广州中医药大学中药鉴定教研室喻良
文副教授鉴定为唇形科罗勒属植物罗勒 Ocimum
basilicum L.。
2 方法
2. 1 挥发油提取[9] 将罗勒地上部分,去杂处理,
阴干,切成细段(1 ~ 2 cm) ,各称取 200 g 置挥发油
提取器中,参照《中国药典》2010 年版一部附录 XD
挥发油测定法甲法进行提取,提取液冷却后,读取挥
发油层体积:广东产罗勒得油率为 0. 5% (mL·
g - 1) ,油层淡黄色;安徽产罗勒得油率为 0. 25%
(mL·g - 1) ,油层黄色。
2. 2 挥发油供试品溶液的制备 分取上层挥发油,
用无水乙醚萃取并稀释,置 10 mL 量瓶,加乙醚定
容,加无水 Na2 SO4 脱水,0. 22 um 微孔滤膜滤过,滤
液备用。
2. 3 气相色谱-质谱分析
2. 3. 1 色谱条件 HP-5MS 弹性石英毛细管柱
(0. 25 mm × 0. 25 mm × 30 m) ,柱温采用程序升温,
初温60 ℃,保持 3 min,以 10 ℃·min - 1升至 200 ℃,保
持 2 min,再以 10 ℃·min - 1升至 280 ℃,保持 3 min;
载气为高纯 He(99. 999%) ,流量 1. 0 mL·min - 1;进样
量1 μL,分流进样,分流比 20∶ 1。可达到较好分离效
果。峰面积归一法计算各化合物的相对百分
含量[10]。
2. 3. 2 质谱条件 离子源为 EI 源,离子源温度
200 ℃,电子能量 70 eV,接口温度 220 ℃,质量扫描
范围 m / z 40 ~ 400,检索谱库为 NIST02. L。
2. 4 薄层色谱条件 薄层板为硅胶 G 预制板,展
开系统为石油醚(60 ~ 90 ℃)-乙酸乙酯(19 ∶ 1) ,显
色剂为 1%香草醛硫酸溶液。
3 结果
3. 1 气质联用分析结果 按 2. 3 项下条件,取挥发
油供试品溶液进行 GC-MS 联用分析,得到总离子流
图,将所得各组分的质谱数据入 NIST02 数据库进行
检索,结合人工图谱和有关文献进行解析,确定挥发
油化学成分,并用峰面积归一法计算各化合物的相
对百分含量,结果见表 1。两产地罗勒挥发油 GC-
MS 的总离子流图见图 1。
A. 广州产;B. 亳州产
图 1 两产地罗勒挥发油 GC-MS 总离子流
表 1 罗勒挥发油成分分析
No. tR /min 化合物
相对含量 /%
广东 安徽
相对
分子质量
分子式
1 5. 54 α-pinene α-蒎烯 0. 039 - 136 C10 H16
2 6. 28 β-phellandrene β-水芹烯 0. 051 - 136 C10 H16
3 6. 35 β-pinene β-蒎烯 0. 102 - 136 C10 H16
4 7. 29 limonene 柠檬烯 0. 054 - 136 C10 H16
5 7. 37 eucalyptol 桉叶油素 2. 251 0. 257 154 C10 H18 O
6 7. 62 (Z)-3,7-dimethyl-1,3,6-octatriene 罗勒烯 0. 243 - 136 C10 H16
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 18,No. 11
Jun.,2012
续表 1
No. tR /min 化合物
相对含量 /%
广东 安徽
相对
分子质量
分子式
7 8. 01 cis-sabinene hydrate 水合桧烯 0. 042 - 170 C10 H18 O2
8 8. 10 linalool oxide 氧化芳樟醇 - 0. 44 170 C10 H18 O2
9 8. 37 linalool oxide 氧化芳樟醇 - 0. 477 170 C10 H18 O2
10 8. 53 linalool 芳樟醇 4. 734 26. 909 154 C10 H18 O
11 9. 09 4-acetyl-1-methylcyclohexene 4-乙酰基-1-甲基环己烯 - 0. 309 138 C9 H14 O
12 9. 35
bicyclo[2. 2. 1]heptan-2-one,1,7,7-trimethyl-,(1S)-
(1S)-1,7,7-三甲基-双环[2. 2. 1]庚-2-酮
0. 042 0. 15 152 C10 H16 O
13 9. 677 borneol 龙脑 0. 286 0. 532 154 C10 H18 O
14 9. 85 3-cyclohexene-1-ol,4-methyl-1-(1-methylethenyl)-,(R)-(R)-4-
甲基-1-(1-甲基乙烯基)-3-环己烯-1-醇
0. 06 - 154 C10 H18 O
15 10. 06 α-terpineol α-松油醇 0. 389 0. 465 154 C10 H18 O
16 10. 20 p-allyl-anisole,对烯丙基茴香醚 83. 082 - 148 C10 H12 O
17 10. 97 neryl acetate 乙酸橙花酯 - 2. 191 196 C12 H20 O2
18 11. 48 bomyl acetate 左旋乙酸龙脑酯 0. 565 0. 813 196 C12 H20 O2
19 11. 75 methyl cinnamate 肉桂酸甲酯 - 7. 694 168 C10 H16 O2
20 12. 21
cyclohexane,1-ethenyl-1-methyl-2-(1-methylethenyl)-4-
(1-methylethylidene)-1-乙烯基-1-甲基-2-(1-甲基乙烯基)-
4-(1-甲基亚乙基)环己烷
0. 009 - 204 C15 H24
21 12. 75 neryl acetate 乙酸橙花酯 - 1. 11 196 C12 H20 O2
22 12. 84 methyl cinnamate 肉桂酸甲酯 - 14. 156 168 C10 H16 O2
23 12. 96 β-elemene β-榄香烯 0. 775 0. 10 204 C15 H24
24 13. 07 benzene,1,2-dimethoxy-4-(2-propenyl)-甲基丁香酚 0. 399 - 170 C11 H14 O2
25 13. 51 bicyclo[3. 1. 1]hept-2-ene,2,6-dimethyl-6-(4-methyl-3-pentenyl)-
2,6 二甲基-6-(4-甲基-3-戊烯基)-双环[3. 1. 1]庚-2-烯
1. 116 0. 525 204 C15 H24
26 13. 58 α-guaiene α-愈创木烯 0. 148 0. 278 204 C15 H24
27 13. 71 . alpha. -cubebene α-筚澄茄油烯 0. 096 - 204 C15 H24
28 13. 82 . alpha. -caryophyllene α-石竹烯 0. 106 0. 159 204 C15 H24
29 13. 93 (+)-epi-bicyclosesquiphellandrene 表-双环倍半水芹烯 0. 115 0. 378 204 C15 H24
30 14. 17 β-cubebene β-橙椒烯 0. 579 1. 246 204 C15 H24
31 14. 24 (+)-β-selinene β-瑟林烯 - 0. 11 204 C15 H24
32 14. 34 α-gurjunene α-古云烯 - 0. 989 204 C15 H24
33 14. 36 . gamma. -elemene γ-.榄香烯 0. 528 - 204 C15 H24
34 14. 45 α-bulnesene α-布藜烯 0. 41 0. 756 204 C15 H24
35 14. 56 naphthalene,1,2,3,4,4a,5,6,8a-octahydro-7-methyl-4-methylene-1-
(1-methylethyl)-,(1. alpha.,4a. beta.,8a. alpha.)-(1α,4aβ,8aα)1,2,3,
4,4a,5,6,8a-八氢-7-甲基-4-亚甲基-1-(1-甲基乙基)-萘
0. 464 2. 488 204 C15 H24
36 14. 65 d-δ-cadinene 杜松烯 - 0. 638 204 C15 H24
37 15. 37 (-)-spathulenol (-)-斯巴醇 - 0. 655 220 C15 H24 O
38 15. 56 ledol 喇叭茶醇 - 14. 154 222 C15 H26 O
39 15. 8 cubenol 荜澄茄醇 0. 337 2. 568 222 C15 H26 O
40 16. 08 tau-cadinol τ-杜松醇 2. 715 17. 411 222 C15 H26 O
41 16. 24 tau-muurolol τ-依兰油醇 0. 162 0. 135 222 C15 H26 O
42 16. 28 junipercamphor 杜松脑 - 0. 178 222 C15 H26 O
43 16. 52 . alpha. -bisabobol 红没药醇 - 0. 382 222 C15 H26 O
注:“ -”未检出。
3. 2 薄层色谱层析结果 分别吸取 2 个挥发油供 试品溶液 5 μL,点于同一硅胶 G 薄层板上,展开,取
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袁旭江,等:两产地罗勒挥发油化学成分比较
出,晾干,喷显色剂后于 105 ℃烘干至斑点显色清
晰。结果表明,广州、亳州产罗勒挥发油的薄层鉴别
图谱存在差别,其中斑点①和斑点②为广州产罗勒
挥发油特征斑点,安徽产罗勒挥发油未见该 2 个斑
点。见图 2。
1. 广州产;2. 亳州产
图 2 两个产地罗勒挥发油的薄层色谱
4 讨论
薄层色谱研究结果显示,两产地罗勒挥发油的
薄层色谱行为存在显著差异,广州产罗勒挥发油比
安徽亳州产者多了 2 个特征斑点,易于鉴别。
GC-MS 研究结果显示,广东广州产罗勒挥发油
共鉴定出 29 个色谱峰,占总出峰面积的 99. 90%,
以芳香化合物为主,次之为萜烯及其含氧衍生物,含
量最高者为对烯丙基茴香醚(即对甲氧基苯丙烯) ,
在挥发油中相对含量高达 83. 082%;其次为芳樟醇
(4. 734%)、τ-杜 松 醇 (2. 715%)、桉 叶 油 素
(2. 251%)等;安徽亳州产罗勒的挥发油共鉴定出
31 个色谱峰,占总出峰面积的 98. 65%,以不饱和及
饱和醇类化合物为主,其次芳香化合物和酯类等,含
量最高者为芳樟醇(26. 909%) ,其次为肉桂酸甲酯
(21. 85%)、τ-杜 松 醇 (17. 411%)、喇 叭 茶 醇
(14. 154%)等。
据报道,国外商业性栽培品种罗勒根据主成分
不同主要分为 4 个化学类型;甲基佳味醇型、芳樟醇
型、肉桂酸甲酯型和柠檬醛型,其中甲基佳味醇也称
草蒿脑、龙蒿脑、甲基黑椒酚等,化学名称为对甲氧
基苯丙烯、对烯丙基茴香醚、对烯丙基苯甲醚。可知
广东广州产罗勒属甲基佳味醇型,安徽亳州罗勒属
芳樟醇型。已有报道河北、新疆、福建罗勒挥发油主
成分为芳樟醇[11-13],广西、安徽、广东清新县、深圳
罗勒挥发油主成分为对烯丙基苯甲醚[14-19],浙江金
华罗勒挥发油主成分为丁子香酚甲醚[19],广东东莞
罗勒挥发油主成分却为 τ-杜松醇[19],新疆产罗勒挥
发油主成分为 α-萜品油烯[20],河南开封产罗勒挥发
油主成分为 1,7-甲基-1,6-辛二烯-3-醇[21],可见产
地对我国罗勒挥发油所含主成分具有显著影响,其
药效学也应存在显著影响。因此,对我国罗勒主产
地进行资源和质量综合评价,是很有必要的。
主成分对烯丙基茴香醚是重要的香料之一,也
是重要的生物活性物质或中间体,具有很强的抗抑
郁、杀菌、退热、减缓压力、止咳、健胃醒脑等功
能[19],具有广阔的市场前景和新药开发利用价值。
罗勒商业化栽培主要目的在于尽量提高主成分含
量,但目前文献报道中罗勒挥发油主成分对烯丙基
茴香醚含量均低于本研究广州产罗勒,其主成分含
量达到 83%,可见,广州产罗勒值得开发研究。
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[责任编辑 邹晓翠]
[收稿日期] 20111202(014)
[基金项目] 科技基础性工作专项重点项目子课题(SB2007FY020) ;甘肃教育厅科研项目(1106B-07) ;甘肃中医学院中青年科研基金项
目(ZQ2011-12)
[第一作者] 朱田田,硕士,讲师,从事中药资源开发与利用研究,Tel:13088731903,E-mail:ztt0935@ 163. com
[通讯作者] * 晋玲,博士,副教授,从事药用植物资源可持续利用研究,Tel:0931-8765335,E-mail:jinl@ gszy. edu. cn
中麻黄基因组 DNA不同提取方法的比较
朱田田1,2,晋玲1,2* ,杜弢1,2,陈红刚1,2,张延红1,2,王惠珍1,2,王艳1,2
(1. 甘肃中医学院,兰州 730000;2. 甘肃省高校中(藏)药化学质量研究省级重点实验室,兰州 730000)
[摘要] 目的:比较不同 DNA 提取方法,选择最适于中麻黄基因组的方法。方法:采用改良 CTAB,SDS 法、试剂盒法提
取中麻黄基因组 DNA;用琼脂糖凝胶电泳法和紫外分光光度法检测所得总 DNA 的得率和纯度,并进行 ISSR-PCR 扩增检测。
结果:3 种方法均可从新鲜中麻黄中提取出产量较高的基因组 DNA,但其中改良 CTAB 法提取的总 DNA 纯度高,质量好,扩增
产物的电泳条带也较明显;SDS 法和试剂盒法提取的总 DNA 质量差,不适用于下游分子生物学实验。结论:改良十六烷基三
甲基溴化铵(CTAB)法为中麻黄基因组 DNA 提取的最佳方法,该方法提取的基因组 DNA 适用于中麻黄基因组 PCR 扩增和其
他分子生物学研究。
[关键词] 中麻黄;DNA 提取;十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法
[中图分类号] R284. 1 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903(2012)11-0125-04
[DOI] CNKI:11-3495 /R. 20120327. 2700. 019 [网络出版时间] 2012-03-27 17:06
[网络出版地址] http:/ / www. cnki. net / kcms / detail /11. 3495. R. 20120327. 1706. 019. html
Comparison of Different Methods for Extraction of
Genomic DNA from Ephedra intermedia
ZHU Tian-tian1,2,JIN Ling1,2* ,DU Tao1,2,CHEN Hong-gang1,2,
ZHANG Yan-hong1,2,WANG Hui-zhen1,2,WANG Yan1,2
(1. Gansu College of Traditional Chinese Medicine,Lanzhou 730000,China;2. Key Laboratory of Chemistry
and Quality for Traditional Chinese Medicines of the College of Gansu Province,Lanzhou 730000,China)
[Abstract] Objective:By comparing different extraction methods of genomic DNA,the best extraction
method of Ephedra intermedia genomic DNA was selected. Method:Improved cetyltrimethyl ammonium bromide
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第 18 卷第 11 期
2012 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 18,No. 11
Jun.,2012