全 文 ：湖 北 农 业 科 学 2015 年
第 54 卷第 8 期
2015年 4 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 54 No.8
Apr.，2015
收稿日期：2014－08－08
基金项目：云南省烟草公司科技项目（2011YN58）
作者简介：张芬芬（1990－），女，湖南郴州人，在读硕士研究生，研究方向为烟草生理生化，（电话）15825252051（电子信箱）742938495＠qq．com；
通信作者，文国松（1969－），男，副研究员，主要从事分子生物学和微生物学技术研究，（电子信箱）wengs＠163．com；赵明富（1975－），
男，副教授，主要从事微生物学研究，（电子信箱）zhaomingfu＠163．com。
甜罗勒根际细菌的筛选鉴定及其对烟草赤星病菌
的抑制作用
张芬芬 1a，李祖红 2，曾 嵘 2，孙 媛 1b，赵明富 1b，彭 晟1b，李永忠 1a，文国松 1a
（1．云南农业大学，a.农学与生物技术学院；b．植物保护学院，昆明 650201；
2．云南省烟草公司曲靖市公司，云南 曲靖 655000）
摘要：从甜罗勒（Ocimum basilicum）根际分离得到的 28 株细菌菌株，通过平板对峙试验筛选出对烟草赤
星病菌（Alternaria alternata）抑制作用最强的菌株 LL－16，其平均抑菌带宽度为 7．77 mm。 对 LL－16 菌株
进行生理生化鉴定和 16S rDNA 序列分析，表明其与 Bacillus subtilis（JQ978219）聚类成为一支，支持强
度达到 71％，同源性为 98．9％，鉴定其属于枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。 采用菌落直径法和凹玻片法
测定不同浓度的菌液、无菌滤液和灭活滤液对烟草赤星病菌的菌丝生长和孢子萌发的影响。 结果表明，
一定浓度范围内，菌液、无菌滤液和灭活滤液均能抑制赤星病菌丝生长和孢子芽管伸长，形成泡状芽管，
致使病菌丧失侵染能力。同一种处理随着其浓度的降低对赤星病菌的抑制作用减弱。相同浓度的 3 种处
理抑制作用从强到弱依次为菌液、无菌滤液、灭活滤液。
关键词：甜罗勒（Ocimum basilicum）根际细菌；烟草赤星病菌（Alternaria alternata）；枯草芽孢杆菌（Bacil-
lus subtilis）；鉴定；抑制作用
中图分类号：S435．72；S482．2＋92 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2015）08－1886－06
DOI：10．14088 ／ j．cnki．issn0439－8114．2015．08．025
Screening and Identification on Sweet Ocimum Basilicum Rhizosphere Bacteria and Its
Inhibition against Tobacco Brown Spot
ZHANG Fen-fen1a，LI Zu-hong2，ZENG Rong2，SUN Yuan1b，ZHAO Ming-fu1b，PENG Sheng1b，
LI Yong-zhong1a，WEN Guo-song1a
（1． College of Agriculture and Biological Technology， Yunnan Agricultural University， Kunming 650201，China；2． Qujing Branch of Yunnan
Tobacco Company， Qujing 655000， Yunnan，China；3． College of Plant Protection， Yunnan Agricultural University， Kunming 650201，China）
Abstract： 28 rhizospeheric bacterial strains were obtained from sweet Ocimum basilicum roots， strain LL－16 was screened to
have the strongest inhibition against tobacco brown spot through dual culture on PDA plates． The average antibacterial width
was 7．77mm． Analysis on 16S rDNA sequence and physiological and biochemical characteristics of strain LL－16，showed that
Bacillus subtilis （JQ978219） clustering and strain LL－16 became a branch， support strength reached 71％ and the homology
was 98．9％．SO， it was identified as Bacillus subtilis． Through diameter of the colony and the concave slide method， the ef-
fects on tobacco brown spot mycelial growth and spore germination of bacteria liquid， bacteria free filtrate and inactivated fil-
trate in different concentrations were determined． The results showed that in a certain range of concentration bacteria liquid ，
bacteria free filtrate and inactivated filtrate inhibited tobacco brown spot mycelial growth and spore germination strongly ， re-
sulting the formation of bubble germ tube and in loss of ability of pathogen infection． The same treatment as the concentra-
tion decreasing， the inhibition effects on Alternaria alternate weakened． Three treatments of the same concentration， the inhi-
bition effects performed as： bacteria liquid ＞ bacteria free filtrate ＞inactivated filtrate．
Key words： rhizosphere bacteria of Ocimum basilicum； Alternaria alternata； Bacillus subtilis； identification； inhibition effect
第 8 期
甜罗勒（Ocimum basilicum）属于唇形科（Lami-
aceae）罗勒属 （Ocimum），全株具有令人愉快的香
味，喜温暖，对土壤具有较强的适应性，对其根际细
菌的分离及应用研究较少。 烟草是一种重要的经济
作物，烟草赤星病是烟叶成熟期普遍发生的叶斑病
害，在各大烟区均发生，影响烟叶的产量和品质，造
成巨大的经济损失［1，2］。当前烟草赤星病的防治主要
是化学防治 ［3－5］，具有简单、经济实惠和立竿见影的
效果。 烟草具有与其他作物不同的特点，它收获的
是营养器官——叶片，对烟叶的外观质量和内在品
质都有严格的要求，由化学防治所带来的一系列问
题日益严重 ［6－9］，限制化学农药的大规模使用，选用
低毒甚至无毒、安全的防治方式是必然趋势。
生物防治是利用生物及其产物控制有害生物
的方法，不污染环境，对人、畜安全，能避免或延缓
病虫产生抗药性［10］。 利用微生物防治烟草赤星病已
有报道，生防菌主要是从烟叶表面及烟株附近区域
分离得到。 罗坤等［11］从烟叶表面分离得到对烟草赤
星病菌（Alternaria alternata）有较强拮抗作用的 16
株菌株。 李洪林等［12］发现荧光假单胞杆菌 G20－9 菌
株的无菌滤液对烟草赤星病菌菌丝抑制效果达
82．1％，优于化学药剂菌核净。 枯草芽孢杆菌对植物
病害的生物防治机制主要有竞争作用、产生抗菌物
质、拮抗作用、促进植物生长及诱导植物产生抗性
等［13］。 本研究利用从甜罗勒植株根际分离得到的菌
株，通过平板对峙试验、孢子萌发和菌丝生长抑制
试验，探究其对烟草赤星病菌的抑制效果，以期为
赤星病的生物防治和生物农药资源的开发提供理
论依据。
1 材料与方法
1．1 供试材料
1．1．1 烟草赤星病菌的分离与纯化 采集大田中
赤星病发病较典型的烟叶，用无菌剪刀剪取病健交
界处带病斑的叶片，75％乙醇表面消毒 3 min， 无菌
水清洗 3～4次，用无菌镊子挑取叶片置于 PDA 培养
基平板中央，置于 28 ℃培养箱中恒温培养，待形成
较大菌落后进行镜检和纯化，4 ℃保种备用。 赤星病
菌孢子悬浮液的制备参照文献［14］的方法进行。
1．1．2 供试生防菌的筛选 将从甜罗勒植株根际
分离得到的细菌菌株以平板对峙法进行拮抗试
验 ［15］，分析各个菌株的抗菌能力，确定生防菌。 在
PDA培养基平板中央接种培养了 7 d 的烟草赤星病
菌菌饼（直径 5 mm），两侧 2 cm 处对称划线接种细
菌，重复 3 次，以只接赤星病菌的为对照。 28 ℃恒温
培养至对照长满全皿，检查对峙培养结果，记录抑
菌带的宽度， 选择抑制作用最强的菌株进行后续
试验。
1．1．3 拮抗菌株的生理生化鉴定和 16S rDNA 序列
分析 按《常见细菌系统鉴定手册》进行生理生化
鉴定。 以提取的拮抗细菌基因组总 DNA 为模板，
27F（5′－TACGGTACCTTGTTACGACT－3′）和 1492R
（5′－CTGAGCCAGGATCAAACT－3′）为上、下游引物
扩增菌株的 16S rDNA 序列。 PCR产物经 1．5％琼脂
糖凝胶电泳后送昆明硕阳科技有限公司测序。
1．2 拮抗菌株抑制烟草赤星病菌效果测定
采用平板对峙培养法［15］，在 PDA 平板中央接种
培养 7 d 的烟草赤星病菌菌饼（直径 5 mm），在离该
菌饼 3 cm 处放蘸取在 PD 培养液中培养了 8 h（180
r ／ min，30 ℃）的拮抗菌株菌液的滤纸片，以只接病原
菌的平板作为对照，重复 3 次。 置于 28 ℃培养箱中
培养 7 d后测量菌落直径并计算其抑制率。抑制率＝
（对照菌落直径-处理菌落直径） ／对照菌落直径×
100％。
1．3 拮抗菌株不同处理方式对赤星病菌的抑制作用
1．3．1 拮抗菌株无菌滤液及灭活滤液的制备 取
拮抗菌株培养液 （6×108 CFU ／ mL）5 mL 接种于
150 mL的 PD培养液中，置于 30 ℃的摇床 180 r ／min
振荡培养 72 h， 培养液 5 000 r ／ min 离心 30 min，取
上清液用 0．22 μm 微孔滤膜除菌，得到的滤液即为
拮抗菌株无菌滤液。 取无菌滤液置于 121 ℃灭菌
30 min，得灭活滤液。
1．3．2 无菌滤液及灭活滤液对赤星病菌菌丝生长
的影响 不同浓度无菌滤液及灭活滤液对赤星病
菌菌丝生长的影响采用菌落直径法测定［2］。将“1．3．1”
制备的无菌滤液及灭活滤液分别用无菌水稀释，使
其浓度为原始浓度的 100％ 、80％ 、60％ 、40％和
20％。 每个浓度梯度取 100 μL均匀涂布 PDA平板，
置于无菌操作台上自然晾干后将直径为 5 mm 的赤
星病菌菌饼移至含不同浓度滤液的 PDA 平板中央，
3 次重复， 以涂布等量无菌水接种赤星病菌的作为
对照，于 28 ℃培养箱中培养 7 d 后分别测量其菌落
直径，计算抑制率。
1．3．3 菌液、无菌滤液及灭活滤液对赤星病菌孢子
萌发的抑制作用 孢子萌发抑制试验采用凹玻片
法［16］。 将拮抗菌株菌液与“1．3．1”制备的无菌滤液与
灭活滤液分别用无菌水稀释，使其浓度为原始浓度
的 100％、60％和 20％。 分别取 20 μL各浓度梯度的
处理液、20 μL PD培养液、20 μL 孢子悬浮液加入到
凹玻片的凹穴中，共 9 个处理，重复 3 次，以 20 μL
无菌水、20 μL PD 培养液、20 μL 孢子悬浮液为对
照， 置于含有 20 mL 20％甘油湿润滤纸制成的灭菌
张芬芬等：甜罗勒根际细菌的筛选鉴定及其对烟草赤星病菌的抑制作用 1887
湖 北 农 业 科 学 2015 年
表 1 菌株 LL-16 的生理生化鉴定结果
试验
革兰氏染色
甲基红
吲哚
V-P
淀粉水解
柠檬酸
尿素
甘油
硝酸盐还原
结果
+
-
-
+
+
+
-
+
+
注：表中“+”表示阳性，“-”表示阴性。
培养皿湿室中，于 28 ℃培养，分别在 6、12 、24 h 检
查孢子萌发情况，芽管长度超过分生孢子小端直径
一半则记录为萌发，计算各处理孢子萌发率和萌发
抑制率， 于 24 h 后镜检处理和对照孢子萌发情况。
孢子萌发率＝萌发的孢子数 ／孢子总数×100％； 孢子
萌发抑制率＝（对照孢子萌发率-处理孢子萌发率） ／
对照孢子萌发率×100％。
1．4 数据处理
采用 Excel、SPSS 17．0、MEGA5．0 和 Bioedit 软
件进行数据处理和分析。
2 结果与分析
2．1 生防菌的筛选及其鉴定
2．1．1 生防菌的筛选结果 从甜罗勒植株根际分
离得到 28 株细菌菌株，对其进行抑菌效果试验，结
果表明菌株 LL－16的抑菌效果最好。菌株 LL－16与
烟草赤星病菌的对峙试验结果显示，其对烟草赤星
病菌具有明显的抑制作用，抑菌带平均宽度为 7．77
mm，标准差为 0．208 mm，能有效地抑制烟草赤星
病菌的生长和发展，烟草赤星病菌菌丝出现聚集的
现象。
2．1．2 生理生化鉴定结果 对菌株 LL－16 进行部
分生理生化鉴定，试验结果见表 1。菌株 LL－16为革
兰氏阳性菌，且该菌的甲基红、吲哚等生理生化试
验特性与王寅寒等 ［17］报道的枯草芽孢杆菌 A2菌株
一致。
2．1．3 菌株 LL－16的 16S rDNA序列分析 以提取
的菌株 LL－16 总 DNA 为模板， 利用 27F 和 1492R
为上、 下游引物扩增菌株的 16S rDNA 得到菌株
LL－16的 16S rDNA基因片段为 1 454 bp，将获得的
序列进行 BLAST分析，选取与之同源性较高的菌株
在相应片段区域利用软件 MEGA5．0 进行系统发育
分析 、Neighbor－Joining 法构建 LL－16 菌株的 16S
rDNA 系统发育树，结果见图 1。 由图 1 可见，菌株
LL－16 与 Bacillus subtilis （JQ978219）聚类成为一
支，支持强度达到 71％，可以看出，菌株 LL－16 与
Bacillus subtilis（JQ978219）具有较近的亲缘关系。
进行同源性比对，结果菌株 LL－16 与 Bacillus sub-
tilis（JQ978219）和 Bacillus tequilensis（JF411302）的
同源性最高，均达到 98．9％。
2．2 LL－16的抑菌效果
平板对峙法测定 LL－16 菌液对烟草赤星病菌
的抑制作用结果表明， 培养了 8 h 的 LL－16 菌液对
烟草赤星病菌具有明显抑制作用，处理菌落直径平
均为 15．7 mm，标准差为 0．764 mm，对照菌落直径平
均值为 49．3 mm，标准差为 2．082 mm，抑制率在 67％
～70％之间，平均抑制率为 68．2％。 处理的烟草赤星
图 1 菌株 LL－16 的系统进化树
Bacillus subtilis （KF001839）
Bacillus subtilis （HQ166109）
Bacillus licheniformis （JN983128）
Bacillus subtilis （KF641841）
Bacillus subtilis （EU882846）
Bacillus subtilis （HM055602）
Bacillus tequilensis （JF411302）
Bacillus subtilis （KC478517）
Bacillus subtilis （JQ978219）
LL-16
Bacillus axarquiensis （HM753616）
Bacillus subtilis （JF932296）
Bacillus tequilensis （JX077105）
Bacillus subtilis （HQ650841）
Bacillus subtilis （CP004019）
36
36
22
28
5
35
50
29
71
66
58
88
1888
第 8 期
表 2 不同浓度滤液对菌丝生长的影响
滤液浓度//%
100
80
60
40
20
0
菌落直径//mm
25.3dC
31.7cB
33.8bcB
34.7bcB
37.7bB
49.7aA
抑制率//%
48.99aA
36.24bB
31.88bBC
30.2bcBC
24.16cC
0dD
抑制率//%
39.60aA
32.89aAB
29.87abAB
22.15abAB
12.75bB
0cC
灭活滤液无菌滤液
菌落直径//mm
30.0dC
33.3cdBC
34.8cdBC
38.7bcABC
43.3abAB
49.7aA
注：同列数据后不同英文小写字母表示在 0.05 水平差异达到显
著水平；大写字母表示在 0.01 水平差异达到显著水平，下同。
表 3 100%菌液、无菌滤液和灭活滤液对孢子萌发的影响
处理
100%菌液
100%无菌滤液
100%灭活滤液
对照
萌发率//%
20.38 bB
21.56 bB
20.84 bB
74.13 aA
抑制率//%
72.51 aA
70.92 aA
71.89 aA
0 bB
抑制率//%
63.17 aA
61.52 abA
59.39 bA
0 cB
12 h6 h
萌发率//%
30.42 cB
31.79 bcB
33.54 bB
82.61 aA
抑制率//%
65.26 aA
62.97 aA
62.34 aA
0 bB
24 h
萌发率//%
32.17 bB
34.30 bB
34.86 bB
92.61 aA
表 4 60%菌液、无菌滤液和灭活滤液对孢子萌发的影响
处理
60%菌液
60%无菌滤液
60%灭活滤液
对照
萌发率//%
25.02 cC
31.03 cBC
39.80 bB
74.13 aA
抑制率//%
66.25 aA
58.14 aAB
46.31 bB
0 cC
抑制率//%
59.42aA
52.84bAB
47.17cB
0dC
12 h6 h
萌发率//%
33.52dC
38.96cBC
43.64bB
82.61aA
抑制率//%
55.36aA
48.42aA
45.14aA
0bB
24 h
萌发率//%
41.34bB
47.77bB
50.81bB
92.61aA
病菌菌落颜色加深， 菌丝与对照相比较白且密集，
边缘稀疏，镜检其产孢量明显减少。
2．3 无菌滤液及灭活滤液对赤星病菌菌丝生长的
影响
不同浓度无菌滤液对赤星病菌菌丝生长的影
响（表 2）表现为，100％浓度的无菌滤液处理的菌落
直径最小，为 25．3 mm，抑制率最大，为 48．99％。 随
着浓度的降低，抑制作用减弱，但各个浓度处理的
菌落直径均极显著小于对照。 就抑制率而言，100％
浓度的无菌滤液极显著大于其他浓度处理，80％浓
度处理极显著大于 20％浓度处理，20％和 40％两个
处理间则无显著差异。
不同浓度灭活滤液对赤星病菌菌丝生长的影
响（表 2）表现为，100％灭活滤液处理的菌落直径最
小，为 30．0 mm，极显著小于对照和 20％灭活滤液处
理，且显著小于其他处理。 100％灭活滤液处理的抑
制率最大，为 36．90％，极显著大于对照和 20％灭活
滤液处理，与其他处理则无显著差异。
相同浓度的无菌滤液和灭活滤液对赤星病菌
菌丝生长的影响表现为，除 100％、40％和 20％浓度
有显著差异外，其他处理没有显著差异，且菌落直
径和抑制率的变化规律一致。 从总体上看，无菌滤
液对赤星病菌菌丝生长的抑制作用强于灭活滤液，
这点在高浓度和低浓度条件下表现尤为明显。
2．4 菌液、无菌滤液及灭活滤液对赤星病菌孢子萌
发的抑制作用
不同浓度菌液、无菌滤液及灭活滤液处理对赤
星病菌孢子萌发的抑制作用见表3、表 4、表 5。 总体
看，随着时间的推移 3种处理的孢子萌发率升高，抑
制率表现略有差异。 3种处理的抑制作用均表现为
菌液大于无菌滤液大于灭活滤液。100％浓度的 3种
处理抑制率在 12 h 降低，到 24 h 又稍有上升，三者
间无明显差异，萌发率则均极显著低于对照（表 3）。
60％浓度的 3 种处理的抑制率均在 45％以上，
且在 6 h达到最高，萌发率都极显著低于对照， 6～12
h 菌液处理的萌发率和抑制率与灭活滤液处理具有
极显著差异，且萌发率显著低于 60％无菌滤液处理，
抑制率则只在 12 h 时显著高于 60％无菌滤液处理，
60％无菌滤液处理和 60％灭活滤液处理的萌发率和
抑制率在 6 h和12 h均具有显著性差异（表 4）。
20％浓度的处理抑制率均在 24％以下， 在 12 h
达到最高。 在 6 h时，20％菌液处理萌发率极显著低
于对照，显著低于 20％灭活滤液，抑制率极显著高
于 20％灭活滤液，显著高于 20％无菌滤液，其余处
理间无明显差异。 在 12 h 时，20％菌液处理的萌发
率极显著低于对照和 20％灭活滤液处理，显著低于
20％无菌滤液处理。 在 24 h 时，各处理之间无显著
性差异（表 5）。
2．5 不同浓度的菌液或滤液对烟草赤星病菌孢子
萌发的影响
不同浓度的菌液或滤液对烟草赤星病菌孢子
萌发的影响见图 2、图 3 和图 4。 随着时间的延长，
张芬芬等：甜罗勒根际细菌的筛选鉴定及其对烟草赤星病菌的抑制作用 1889
湖 北 农 业 科 学 2015 年
6 12 24
时间//h
100
80
60
40
20
0
抑
制
率
//%
图 2 不同浓度菌液对孢子萌发的影响
20%
60%
100%
图 3 不同浓度无菌滤液对孢子萌发的影响
6 12 24
时间//h
100
80
60
40
20
0
抑
制
率
//%
20%
60%
100%
图 4 不同浓度灭活滤液对孢子萌发的影响
6 12 24
时间//h
100
80
60
40
20
0
抑
制
率
//%
20%
60%
100%
图 5 孢子萌发情况
处理 对照
表 5 20%菌液、无菌滤液和灭活滤液对孢子萌发的影响
处理
20%菌液
20%无菌滤液
20%灭活滤液
对照
萌发率//%
59.19 bB
66.60 abAB
67.83 aAB
74.13 aA
抑制率//%
20.16 aA
10.15 bAB
8.49 bB
0 cC
抑制率//%
23.22 aA
15.40 bAB
10.99 bB
0 cC
12 h6 h
萌发率//%
63.42 bB
69.89 abAB
73.53 aA
82.61 aA
抑制率//%
9.17 aA
10.37 aA
6.56 aA
0 bB
24 h
萌发率//%
84.12 aA
83.01 aA
86.55 aA
92.61 aA
各浓度的菌液、无菌滤液和灭活滤液的抑制作用均
有不同程度降低。 每种处理随着浓度降低抑制作用
减弱，但 60％及以上浓度处理仍表现出较强的抑制
作用 ，20％浓度处理表现出来的抑制作用较弱 。
100％浓度和 60％浓度的 3 种处理在 24 h 仍表现出
较强的抑制作用，镜检（图 5）发现，菌液、无菌滤液
和灭活滤液处理的孢子芽管伸长被抑制，呈现泡状。
3 小结与讨论
3．1 甜罗勒根际细菌的筛选与鉴定
平板对峙试验中显示，菌株 LL－16 平均抑菌带
宽度达到 7．77 mm， 且烟草赤星病菌菌丝出现聚集
的现象，边缘稀疏，菌丝颜色比对照白，菌落颜色加
深。 说明从甜罗勒根际分离的枯草芽孢杆菌菌株
LL－16对烟草赤星病菌具有一定的抑制作用， 这为
拓宽生物农药资源提供了一定的理论依据。 对烟草
赤星病菌有强烈抑制作用的菌株 LL－16 经 16S
rDNA 序列分析，其与 Bacillus（JQ978219）聚类成为
一支， 与 Bacillus subtilis （JQ978219） 和 Bacillus
tequilensis（JF411302）的同源性达到 98．9％，在生理
生化特性鉴定中菌株 LL－16 与 Bacillus tequilensis
的生理生化特性有一定的差异（如吲哚、脲酶试验
为阳性反应）［18，19］，而与枯草芽孢杆菌表现一致。 因
此，初步判定菌株 LL－16属于枯草芽孢杆菌。
3．2 菌株 LL－16对烟草赤星病菌的抑制效果
LL－16菌液对烟草赤星病菌菌丝生长的抑制率
达到 68．2％， 无菌滤液和灭活滤液也有一定的抑制
烟草赤星病菌效果，但抑制作用弱于菌液。LL－16菌
液为含菌发酵液，无菌滤液是不含菌体的 LL－16 粗
代谢产物，灭活滤液则是经过高温处理的 LL－16 粗
代谢产物。 这表明 LL－16的抑制作用可能包括分泌
的抑菌物质和菌体本身，且部分抑菌物质具有耐高
温的特性。 具体的抑菌作用物质和其抑菌机理有待
进一步研究。
不同浓度的菌液、无菌滤液和灭活滤液均对孢
1890
第 8 期
（责任编辑 陈 焰）
［6］ 谭建权，魏文树，陈海生 ．彩云多糖药理研究进展 ［J］．中成药，
1999，21（5）：259－260．
［7］ 林桂兰，许学书，连文思．食用菇多糖提取物体外抗氧化性能研
究［J］．华东理工大学学报（自然科学版），2006，32（3）：278－281．
［8］ 吴建国 ，王敏慧 ，吴岩斌 ，等 ．硬孔灵芝粗多糖抗氧化活性研
究［J］．福建中医药，2012，43（2）：42－45．
［9］ 王蓓蓓 ，段玉峰 ，邵红军 ，等 ．红托竹荪多糖抗氧化活性的研
究［J］．天然产物研究与开发，2012，24（8）：1122－1125．
［10］ 李书倩，辛 广，戴亚东，等．白灵菇多糖抗氧化性质的研究［J］．
鞍山师范学院学报，2007，9（2）：27－29．
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
（上接第 1881页）
（责任编辑 陈 焰）
子萌发有一定的抑制作用，且抑制效果表现为菌液
高于无菌滤液高于灭活滤液。 20％浓度时抑制率较
低，在实际抑菌应用中推荐使用 60％以上浓度。 经
LL－16菌株菌液、 无菌滤液和灭活滤液处理过的烟
草赤星病菌孢子芽管伸长被抑制，膨大而呈现泡状
芽管，这与李安娜等 ［20］、方敦煌等 ［21］的研究结果一
致。 分别用 LL－16 菌株菌液、无菌滤液和灭活滤液
进行赤星病菌的孢子萌发和菌丝生长抑制试验，3
种处理对孢子萌发及芽管伸长的抑制活性较强，而
对菌丝生长的抑制作用较弱，这与陶刚等 ［22］的研究
结果有一致性，可能与烟草赤星病菌的菌丝细胞壁
和孢子细胞壁结构或成分上存在差异有关，具体机
制有待进一步研究。
本试验分别利用不同浓度的菌液、无菌滤液和
灭活滤液研究 LL－16 菌株对赤星病菌菌丝生长和
孢子萌发的影响，证实 3 种处理对病原菌都有一定
的抑制作用，为生防菌 LL－16 菌株抗病分子机理研
究奠定了一定的基础。 生防菌 LL－16菌株的实际应
用还有待深入探讨。
参考文献：
［1］ 方敦煌，吴祖建，邓云龙，等．防治烟草赤星病拮抗根际芽孢杆菌
的筛选［J］．植物病理学报，2006，36（6）：555－561．
［2］ 易 龙，肖崇刚，马冠华，等．防治烟草赤星病有益内生细菌的筛
选及抑菌作用［J］．微生物学报，2004，44（1）：19－22．
［3］ 谈 文，吴元华．烟草病理学［M］．北京：中国农业出版社，2003．
［4］ 刘强华，陈永林，胡定邦，等 ．不同药剂防治烟草赤星病药效研
究［J］．现代农业科技，2013（16）：97－99．
［5］ 李小波．钾肥与不同药剂联合防控烟草赤星病的效果研究［J］．湖
南农业科学，2013（9）：70－73．
［6］ 陈荣华，张祖清，肖先仪，等．烟草农药使用过程中存在的问题及
对策［J］．江西植保，2006，29（4）：187－192．
［7］ 李梅云，祝明亮．烟草赤星病菌对菌核净的抗药性测定［J］．西南
农业学报，2007，20（3）：412－416．
［8］ 高冬冬，刘忠丽，孙希文，等．我国有机烟叶主要病虫害防治方法
研究［J］．贵州农业科学 2013，41（6）：118－122．
［9］ 谭仲夏，杨龙祥．烟草赤星病的生物防治研究现状及展望［J］．中
国烟草学报，2005，11（3）：34－37．
［10］ 李照会．园艺植物昆虫学［M］．北京：中国农业出版社，2008．
［11］ 罗 坤，罗 宽，朱小湘，等．烟叶面细菌分离筛选及其对烟草
赤星病的拮抗作用 ［J］．湖南农业大学学报 （自然科学版 ），
2006，32（3）：245－247．
［12］ 李洪林，万秀清，颜培强，等．荧光假单胞杆菌 G20－9 拮抗烟草
赤星病菌研究［J］．烟草科技，2008（4）：56－59．
［13］ 赵新林，赵思峰．枯草芽孢杆菌对植物病害生物防治的作用机
理［J］．湖北农业科学，2011，50（15）：3025－3028．
［14］ 方敦煌，马永凯，孔光辉，等．云南烟草赤星病菌致病力分化研
究［J］．西南农业大学学报，2000，22（1）：42－44．
［15］ 鲁素云．植物病害生物防治学［M］．北京：北京农业大学出版社，
1993．
［16］ 方中达 ．植病研究方法 ［M］．第三版 ．北京 ：中国农业出版社 ，
1998．
［17］ 王寅寒，谭志琼，刘 海，等．丹尼斯凤梨细菌性软腐病拮抗细
菌的筛选及鉴定［J］．广东农业科学，2012（20）：63－67．
［18］ 何 华． 油藏耐热微生物分离鉴定及其对石油烃降解特性研
究［D］．郑州：河南工业大学，2012．
［19］ 纪学芳，师俊玲，张锦华．柠檬苦素降解菌的分离筛选与分类鉴
定［J］．食品科学，2011，32（15）：177－181．
［20］ 李安娜，金 莹，逯 鹏，等．抗烟草赤星病芽孢杆菌 B102 菌株
的筛选及抑菌作用［J］．烟草科技，2008（2）：57－64．
［21］ 方敦煌，王 革，马永凯，等．烟草赤星病菌拮抗微生物的筛选
及其对病原的抑制作用［J］．西南农业学报，2002，15（2）：59－61．
［22］ 陶 刚，刘杏忠，王 革，等．木霉几丁质酶对烟草赤星病菌的
作用［J］．中国生物防治，2004，20（4）：252－255．
张芬芬等：甜罗勒根际细菌的筛选鉴定及其对烟草赤星病菌的抑制作用 1891