全 文 ：·中药研究·
收稿日期:2010 － 07 － 07
基金项目:甘肃省科技厅科技支撑计划项目(0804NKCA119 － 08)
作者简介:景明(1963 －) ，男，教授，理学学士，主要从事中药新药的研究开发工作。
藏药湿生扁蕾药材反相高效液相层析指纹图谱的研究
景 明，罗永皎，陈正君，李 硕
(甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000)
摘 要:目的 建立藏药湿生扁蕾药材反相高效液相色谱指纹图谱分析方法，为有效控制湿生扁蕾
药材的质量奠定基础。方法 采用反相高效液相层析(RP-HPLC)技术，选用 ZORBAX SB － C18色谱柱，
甲醇 － 0． 4 %磷酸水溶液梯度洗脱，紫外检测波长为 260 nm，流速为 1． 0 mL /min，记录时间为 60 min，
分析了 10 批湿生扁蕾药材的 HPLC 指纹图谱。结果 在选定的色谱条件下通过相似度分析，确定 10
个色谱峰构成湿生扁蕾药材指纹图谱的特征峰。结论 采用 RP-HPLC所建立的指纹图谱具有稳定、重
复性好的特点，可用于湿生扁蕾药材的质量控制。
关键词:湿生扁蕾;指纹图谱;反相高效液相层析
中图分类号:R284． 1 文献标识码:B 文章编号:1003 － 8450(2010)06 － 0018 － 04
湿生扁蕾为龙胆科扁蕾属植物 Gentianopsis
paludosa(Munro)Ma．的干燥全草，藏药称机合斗，
产于甘肃、青海、四川、西藏等地区，生长在海拔
2 300 ～ 4 100 m的河滩草地、沟边、山坡。具有清
热解毒、健脾止泻等功能，藏医用全草治疗肝炎、胆
囊炎、热病发斑、目赤肿痛、消化不良、肠胃炎
等［1］。所含的化学成分包括 酮类、黄酮类、三萜
类、三十烷醇、胡萝卜苷及 β － 谷甾醇，还含有酚
类、有机酸等［2］。现代药理学研究表明，木犀草素
是湿生扁蕾抗腹泻的主要活性成分［3］。由于受到
诸多因素的制约，致使目前藏药材使用不规范，缺
乏理化控制标准。中药材指纹图谱是近年来被国
际公认的控制中药或天然药物质量的有效方
法［4 － 6］，其优点在于可全面反映中药复杂的化学成
分及其相对比例。本文采用反相高效液相色谱法
对湿生扁蕾药材指纹图谱进行了研究，为湿生扁蕾
的药材鉴别、质量评价以及质量标准的制定提供依
据。
1 仪器与试药
Agilent HP1200 高效液相色谱仪(美国安捷
伦)、AE －240 电子天平(梅特勒 －托利多仪器上
海分公司)、KQ － 100 超声波清洗器(昆山市超声
技术有限公司)、R －200 旋转蒸发仪(瑞士布奇)。
甲醇(色谱纯，天津市光复精细化工研究所)、磷酸
(分析纯，白银良友化学试剂有限公司) ，水为重蒸
馏水，其他试剂均为分析纯。
木犀草素对照品(批号 111520 － 200201)购自
中国药品生物制品检定所;湿生扁蕾药材采自甘
肃、青海的 10 个不同地区(具体产地见表 1) ，均来
源于龙胆科扁蕾属植物 Gentianopsis paludosa(Mun-
ro)Ma．的干燥全草，由甘肃省药品检验所中药室
宋平顺主任药师对以上品种进行鉴定。
表 1 湿生扁蕾药材来源
编号 产地 编号 产地
1 合作 6 青海湖
2 玛曲 7 卓尼
3 临潭 8 海晏
4 湟中 9 碌曲
5 湟源 10 夏河
2 方法与结果
2． 1 色谱条件
选用 ZORBAX SB － C18色谱柱(250 mm ×
4． 6 mm，5 μm) ，柱温 30 ℃，流速 1 mL /min，进样
量 10 μL，检测波长 260 nm，流动相甲醇(A)－
0． 4 %磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0 ～ 15 min，A∶ B
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= 35∶ 65;15 ～ 60 min，A∶ B = 60∶ 40) ，记录时间为
60 min。
2． 2 参照物溶液的制备
精密称取木犀草素对照品 2． 0 g，置 50 mL 量
瓶中，加甲醇溶解并定容，制成每 1 mL含木犀草素
0． 04 mg的参照物溶液。
2． 3 供试品溶液的制备
精密称取不同产地湿生扁蕾药材的干燥粉末
(60 目)1． 0 g，置于锥形瓶中，加入 70 %乙醇水溶
液 50 mL，超声(33 kHz，250 W)提取 30 min，滤过，
滤液水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至 10 mL，
0． 45 μm微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。
2． 4 方法学考察
2． 4． 1 精密度试验 取采自临潭冶力关镇的
药材(编号 3) ，按 2． 3 项下方法制备供试品溶液，
按 2． 1 项下色谱条件连续进样 5 次，每次 10 μL，
测定其 HPLC图谱。选出 10 个共有指纹峰进行考
察，以 8 号峰木犀草素的色谱峰为参照峰，各共有
峰相对保留时间的 RSD 均小于 2 %，相对峰面积
的 RSD均小于 3 %。表明仪器精密度符合要求。
2． 4． 2 重复性试验 取同一批药材(编号 3)5
份，按 2． 3 项下方法制备供试品溶液，按 2． 1 项下
色谱条件分别进样 10 μL，测得各共有峰相对保留
时间的 RSD均小于 2 %，相对峰面积的 RSD 均小
于 3 %。结果表明本试验方法的重复性符合要求。
2． 4． 3 稳定性试验 取同一批药材(编号 3) ，
按 2． 3 项下方法制备供试品溶液，按 2． 1 项下色谱
条件分别在 0，4，8，12，24 h进样，每次 10 μL，得各
共有峰相对保留时间的 RSD 均小于 2 %，相对峰
面积的 RSD 均小于 3 %。表明样品溶液在 24 h
内的稳定性符合要求。
2． 5 样品指纹图谱测定
取不同产地的 10 批湿生扁蕾药材，照 2． 3 项
下方法制备供试品溶液，分别吸取参照物溶液及供
试品溶液各 10 μL，注入液相色谱仪，依法检测。
记录 10 批湿生扁蕾药材的 HPLC 指纹图谱，采用
国家药典委员会开发的“中药色谱指纹图谱相似
度评价系统”2004A 版进行全谱的相似度评价及
共有图谱拟合。10 批湿生扁蕾药材 HPLC 指纹图
谱叠加图见图 1。
2． 6 湿生扁蕾药材特征峰的标定
根据 10 批药材的 HPLC 指纹图谱检测结果，
得到湿生扁蕾药材共有模式的对照 HPLC 指纹图
谱见图 2，共标定 10 个共有峰作为指纹图谱的特
征峰，其中 8 号峰为木犀草素参照峰。
2． 7 不同产地湿生扁蕾药材指纹图谱相似度
评价
采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对 10
批不同产地湿生扁蕾药材进行相似度评价，各药材
指纹图谱与生成的对照图谱 R的相似度见表 2。
图 1 10 批湿生扁蕾药材 HPLC指纹图谱
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图 2 湿生扁蕾药材的 HPLC色谱图
表 2 10 批湿生扁蕾药材的相似度
样 品 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
相似度 0． 946 0． 951 0． 933 0． 917 0． 909 0． 921 0． 941 0． 985 0． 964 0． 958
3 讨论
3． 1 提取方法的选择
对不同提取方式超声、热回流进行考察，结果
表明超声与热回流提取物的色谱图中其成分数量
及含量相当。对不同提取溶剂甲醇、70 %甲醇水
溶液、无水乙醇、70 %乙醇水溶液进行考察，结果
表明 70 %乙醇提取物的色谱图中信息量最多，成
分含量最高。对不同提取时间 10 min、15 min、
30 min、45 min、60 min 进行了考察，结果表明70 %
乙醇超声 30 min 与 45 min 和 60 min 提取物的色
谱图中成分数量及含量相当。故供试品溶液的提
取方法选择 70 % 乙醇为提取溶剂，超声提取
30 min。
3． 2 色谱条件的选择
分别用乙腈 －水、甲醇 －水、甲醇 － 0． 4 %磷酸
水溶液为流动相，以不同梯度进行试验，结果表明甲
醇 －0． 4 %磷酸水溶液线性梯度洗脱效果最好。同
时采用 Agilent HP1200二极管阵列检测器对检测波
长进行了选择，通过比较 254 nm、260 nm、270 nm 和
280 nm 检测波长下的色谱图，发现检测波长为
260 nm时，色谱图所包含的信息量最大、成分含量
高，且各色谱峰分离较好，基线平稳。
3． 3 指纹图谱的评价
在中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A
版)的辅助下，得出了湿生扁蕾药材的 HPLC 色谱
指纹图谱的对照指纹图谱，为湿生扁蕾药材提供了
质量上的技术监控手段。比较 10 批湿生扁蕾药
材的指纹图谱中主要峰群的整体图貌基本一致，相
似度计算结果表明，10 批样品指纹图谱相似度均
在 90 %以上。
指纹图谱是目前控制中药材质量最有效、最直
观的手段之一。本文采用 RP-HPLC 方法，建立了
湿生扁蕾药材的指纹图谱。结果表明该方法稳定、
重复性好，可为湿生扁蕾药材质量分析、评价与控
制提供依据。
参考文献:
［1］张宝琛，甄润德，胡柏林，等．湿生扁蕾的化学成分研究
［J］．中草药，1980，11(4) :149．
［2］李作平，霍长虹，郑小莉． 扁蕾的化学成分研究［J］． 中
国现代应用药学杂志，2003，20(1) :24．
［3］王焕弟，谭成玉，白雪芳，等．藏药湿生扁蕾有效成分抑
菌作用初探［J］． 天然产物研究与开发，2005，17(5) :
598．
［4］国家食品药品监督管理局．关于印发《中药注射剂指纹
图谱研究的技术要求(暂行)》的通知［J］． 中成药，
2000，22(10) :671 － 675．
［5］谢培山．色谱指纹图谱分析是中草药质量控制的可行
策略［J］． 中药新药与临床药理，2001，12(3) :141 －
151．
［6］任德权．中药指纹图谱质控技术的意义与应用［J］． 中
药新药与临床药理，2001，12(3) :135．
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Study of Tibetan Medicine Gentianopsis paludosa Ma on RP-HPLC fingerprint chromatogram
Jing Ming，Luo Yongjiao，Chen Zhengjun，Li Shuo
(Gansu College of TCM，Lanzhou 730000，China)
Abstract:Objective To establish the analysis method of RP-HPLC fingerprint chromatogram of Tibetan
Medicine Gentianopsis paludosa Ma，and lay a foundation for effective control of the quality of Gentianopsis
paludosa Ma． Methods Adopted RP-HPLC technology，and selected ZORBAX SB-C18 chromatographic
column，methanlo and water including 0． 4 % phosphoric acid as mobile phase，detecting wavelength was
260 nm，flowrate was 1． 0 mL /min，the recording time was 60 minutes，The HPLC fingerprint chromatograms of
10 batches of Gentianopsis paludosa Ma were analysed． Results Through the analysis of similar degree under
the selected chromatographic condition，10 chromatographic peak was defined as the characteristic of forming
fingerprint chromatogram of Gentianopsis paludosa Ma． Conlusion The fingerprint chromatogram adopting
RP-HPLC to establish has steady and good repetitive characteristic，may be used to the quality control of Gen-
tianopsis paludosa Ma．
Key words:Gentianopsis paludosa Ma;fingerprint chromatogram;
櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐
RP-HPLC
收稿日期:2010 － 08 － 19
作者简介:范凌云(1983 －) ，女，助教，在读硕士研究生，主要从事中药药剂学教学与科研工作。
三黄微粉栓体外溶出度的测定
范凌云1，2，余 琰2，魏舒畅2，金 辉2
(1．兰州大学药学院，甘肃 兰州 730000;2．甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000)
摘 要:目的 测定三黄微粉栓体外溶出度。方法 依据《中国药典》2005 年版溶出度测定法项下
规定，进行三黄微粉栓体外溶出实验，用紫外分光光度法测定样品吸光度值，计算累积溶出率。结
果 三黄微粉溶出液在 7． 59 ～ 265． 58 μg /mL线性关系良好(r = 0． 9998) ;平均回收率为 99． 4 %，RSD
为 0． 95 %;吸收度 RSD为 0． 86 %，稳定性符合要求;三黄微粉栓在 30 min 时的溶出度达到 87． 04 %，
75 min达到 95． 78 %，说明三黄微粉栓溶出迅速而充分。结论 此法测定三黄微粉栓体外溶出度简单
易行、稳定可靠。
关键词:三黄栓;体外溶出度;紫外分光光度法
中图分类号:R284． 1 文献标识码:B 文章编号:1003 － 8450(2010)06 － 0021 － 03
三黄栓以黄连、黄芩、黄柏为主药，具有清热燥
湿、泻火解毒的功效，临床主要用于治疗痔疮，效果
可靠［1］。三黄微粉栓以三黄药材经超微粉碎后的
微粉为主药，前期已完成制备工艺研究。本试验建
立了三黄微粉栓体外溶出度测定方法，考察了其中
有效成分溶出的速度和程度，为进行微粉栓与普通
栓溶出度比较及后期质量评价提供参考。
1 仪器与试药
1． 1 实验仪器
RC －8 型智能溶出度试验仪(天津大学精密
仪器厂)、UV － 1800PC 型紫外可见分光光度计
(上海美谱达仪器有限公司)、BS124S sartorius 分
析天平。
1． 2 试药
三黄微粉栓(中药制药实验室制，载药量
20 %，每粒含三黄微粉 0． 34 g)、药用 PEG6000(国
药集团化学试剂有限公司)、黄芩苷对照品(中国
药品生物制品检定所，批号 110715 － 200514)、盐
酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号
111595 － 200604)、甘油(分析纯，沈阳化学试剂
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