全 文 ：另外，我们还对提取的总多糖进行了纯化，并对
其抗氧化作用进行了研究，发现其有较好的抗氧化
作用，将另文发表。
参考文献:
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罗勒水提物对秀丽隐杆线虫脂肪沉积的影响
屈长青1，2，徐林丽1，陆 娟1，姬云涛1
(1．阜阳师范学院 生命科学学院，2．抗衰老中草药安徽省工程技术研究中心，安徽 阜阳 236041)
摘 要:目的 研究罗勒水提物对秀丽隐杆线虫脂肪沉积的影响。方法 用罗勒水提物配制 NGM 培养基培养
同步化秀丽隐杆线虫，经油红 O染色后，裂解虫体，在 490 nm波长处测定吸光度值。结果 在罗勒水提物配制的培
养基生长的线虫吸光度值较小，与对照组相比差异显著。结论 罗勒水提物可减少线虫体内脂质含量，但其机制有
待于进一步研究。
关键词:罗勒水提物;秀丽隐杆线虫;脂肪沉积
中图分类号:R285 文献标识码:A 文章编号:1005-1678(2012)02-0165-02
The effect of aqueous extract of Ocimum basilicum L． on lipid droplets of
Caenorhabditis elegans
QU Chang-qing1，2，XU Lin-li1，LU Juan1，JI Yun-tao1
(1． School of Life Science，Fuyang Normal College，2． Engineering Technology Research Center of
Anti-aging Chinese Herbal Medicine，Fuyang 236041，China)
收稿日期:2010-11-12
基金项目:安徽省高校自然科学研究项目资助(KJ2011B127) ;
国家自然科学基金项目(31172182)
作者简介:屈长青，男，副教授，博士;姬云涛，女，通信作者，副
教授，博士，主要从事脂肪细胞增殖与分化机理研究。
罗勒(Ocimum basilicum)是唇形科罗勒属植物，
也被称为九层塔、金不换等，原生于亚洲热带区，国
内多栽培于安徽和河南等地，其他各省开发利用较
少［1］。现代化学研究表明，罗勒主要含有挥发油
类、黄酮及其苷类、香豆素类，此外还含有三萜类和
生物碱类等成份［2］。现已发现罗勒对头痛、鼻窦
炎、支气管炎、袪痰、伤风感冒、气喘、打嗝、胀气、肌
肉酸痛、皮肤松软等都有不同程度疗效［3］。近年
来，已有关于罗勒抗血栓形成、抗肿瘤转移、抗氧化、
降血脂和降血糖等作用的报道［4］，但罗勒对脂肪沉
积的影响尚未见报道。
秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)属于线
形动物门、线虫纲动物，因其结构简单、通体透明、生
命周期短和易于培养，而被用作为现代发育生物学、
遗传学、抗衰老及脂肪调控等方面研究的理想模式
生物，线虫中的许多重大发现为人们理解复杂的细
胞生命活动做出了极大的贡献［5］。近年来，也有用
其进行药物筛选的报道［6］。本实验通过用罗勒水
提物配制的 NGM 培养基培养同步化秀丽隐杆线
虫，发现罗勒水提物可以减少线虫体内脂质含量，但
其机制有待于进一步深入研究。
1 材 料
1． 1 秀丽隐杆线虫及食物
N2 野生型秀丽隐杆线虫(C． elegans，the Bristol
strain N2)及大肠杆菌 OP50 由中科院等离子体物理
研究所吴李君研究员惠赠;大肠杆菌 OP50 是尿嘧
啶渗漏突变型，作为线虫的食物。
561中国生化药物杂志 Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics 2012 年第 33 卷第 2 期
1． 2 药品及试剂
种子培养基、NGM培养基和各种缓冲液的配制
参照文献［7］。
裂解液:每 100 mL水中含有 5 mol /L KOH溶液
10 mL和 10%次氯酸钠溶液 10 mL。
2 方 法
2． 1 罗勒水提物与 NGM培养基的配制
称取罗勒粉末 10 g 于水 200 mL中，浸泡过夜，
次日过滤，取滤液配制 NGM 培养基。对照组中用
等量水配制 NGM培养基。
2． 2 大肠杆菌(E． coil)的培养与接种
将 OP50 单菌落接种于 B． broth 培养液中，
37 ℃振荡培养过夜。吸取 OP50 菌液于 NGM 平板
中央，再用灭菌的玻璃棒轻轻涂布使菌液均匀分散
占整个培养皿面积的 2 /3 左右，于 37 ℃培养 12 h。
2． 3 秀丽隐杆线虫的培养及同步化
将秀丽隐杆线虫接入培养好大肠杆菌的 NGM
平板，于 20 ℃培养 2 ～ 3 d;用 M9 冲洗培养平板，转
移至无菌的 1 mL EP管中，加入裂解液裂解虫体，获
得卵溶液;剧烈振荡混匀虫体，点动离心收集卵;用
M9 缓冲液冲洗 3 次后，卵置于 M9 溶液中 25 ℃条
件下孵化 12 h，获得同步化一龄幼虫(L1) ，然后将
同步化的 L1 幼虫转移到已培养好 OP50 的 NGM 平
板中，25 ℃培养 30 h，发育成四龄幼虫(L4)。
2． 4 虫体油红 O染色
参照本实验室的方法［8］，将同步化的秀丽隐杆
线虫接入培养好大肠杆菌的 NGM 平板，培养 3 d
后，用 M9 缓冲液从培养平板中各冲洗出 50 条至 1
mL EP管中，4%多聚甲醛室温固定 15 ～ 30 min 后，
置于 － 80 ℃冰箱中冷冻 15 min，43 ℃水浴解冻。低
速离心 1 min，弃上清。用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗
3 次。弃去 PBS，用 0． 1% Triton X-100、油红 O溶液
浸泡 30 min。用 PBS冲洗 3 次，异丙醇分化。
2． 5 虫体裂解
实验组与对照组 EP 管中分别加入裂解液，线
虫全部裂解后在 490 nm波长处测定吸光度(A)值。
A值反应细胞脂质变化，从而判断脂肪细胞中脂滴
含量。
3 结 果
3． 1 虫体染色观察
在光学显微镜下观察，用 1% Triton X-100 和油
红 O 联合处理 30 min 的线虫体内有明显的油红 O
着色现象，而没有处理的则为透明的(图 1)。
图 1 光镜下观察秀丽隐杆线虫
3． 2 罗勒水提物对线虫脂肪沉积的影响
实验组和对照组的 A 值(n = 3)分别为(0． 017
± 0． 009)和(0． 026 ± 0． 002) ，实验组 A 值明显降
低，与对照组相比，差异显著(P ＜ 0． 01) ，说明罗勒
水提物可抑制线虫体内的脂肪沉积。
4 讨 论
目前油红 O 被认为是一种优良的脂肪染色染
料［9］。为取得较好的染色效果，本实验先用多聚甲
醛对线虫进行固定，随后用 Triton X-100 和油红 O
共同处理线虫，获到了较好的染色效果。Triton X-
100 是一种非离子型表面活性剂，它能溶解脂质，以
增加抗体对细胞膜的通透性，在 Triton X-100 的透化
作用下，油红 O可以有效进入线虫体内进行着色。
本实验结果显示，线虫在罗勒水提物配制的培
养基中生长，经油红 O 染色并裂解后，其吸光度值
小于对照组，说明其脂质含量较少，提示罗勒可抑制
脂肪沉积，减少线虫体内的脂质含量，但其机制有待
于进一步研究。目前，本实验室正进行浓度梯度实
验和分子机制研究，如果将其作用机理探究清楚，可
为进一步开发利用罗勒提供理论依据。
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661 中国生化药物杂志 Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics 2012 年第 33 卷第 2 期