全 文 ：表 1　黄芩苷的加样回收率试验结果(n=9)
Tab1　Therecoveryresultsofscutelarin(n=9)
取样量
(g)
样品量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
x
%
RSD
(%)
0.6608 1.1440 0.8960 2.0312 99.02
0.6036 1.0450 0.8960 1.9652 102.7
0.6227 1.0780 0.8960 1.9826 101.0
0.6080 1.0526 1.1200 2.1775 100.4
0.7296 1.2631 1.1200 2.4015 101.6 101.1 1.41
0.5561 0.9800 1.1200 2.1236 102.1
0.6491 1.1135 1.3440 2.4385 98.59
0.6290 1.0889 1.3440 2.4665 102.5
0.5863 1.0150 1.3440 2.378 101.4
表 2　软肝升白颗粒中黄芩苷的含量测定结果(n=3)
Tab2　Determinationofscutelarinin
RuanganshengbaiGranules(n=3)
批号 黄芩苷含量(mg·g-1) RSD(%)
20060824 1.7312 0.72
20080107 1.4129 0.77
20080109 1.3183 0.89
3　讨论
试验中使用甲醇-水为流动相 ,并用酸调节 pH值 ,
结果表明 , pH对保留时间和峰形有较大影响 , pH降低
保留时间缩短 ,拖尾现象减轻 ,使用磷酸调节效果好于
使用冰醋酸 ,但单独使用磷酸效果不理想 ,在水相中加
入三乙胺 ,可以有效的减轻拖尾现象。
黄芩苷的提取方法有多种 ,如水提取 ,醇提取 ,
加热回馏 ,超声波提取等。黄芩苷在乙醇和甲醇中
的溶解度明显高于其在水中的溶解度 ,由于加热回
馏的提取方法较为复杂 ,所以本文采用了醇超声提
取的方法 。试验中曾用 50%乙醇超声提取 ,发现黄
芩苷色谱峰为一钝峰 ,后改用甲醇超声提取 ,有效地
改善了峰形 。本制剂为药材提取物制成的含糖颗
粒 ,其中的有效成分较易提取 ,用 50%甲醇可以有
效的溶解分散药物颗粒 ,充分提取黄芩苷 ,加样回收
率表明软肝升白颗粒采用 50%甲醇超声 30min,黄
芩苷提取完全 。
参考文献:
[ 1] 　胡　勤 ,阳利龙 ,彭芳龄 ,等.RP-HPLC法测定鼻炎颗粒合剂中
黄芩苷的含量研究 [ J].中医药导报 , 2007, 13(6):102
[ 2] 　赵世初 ,王连心 ,洪志强 ,等.黄芩苷提取和测定方法研究 [ J].
中医药学刊 , 2006, 24(3):433
[ 3] 　戴　航 ,侯小涛 ,程世贤.正交试验优选复方百部止咳颗粒中
黄芩苷的提取工艺 [ J].世界中西医结合杂志 , 2008, 3(3):139
[ 4] 　郑国平.高效液相色谱法测定银黄颗粒中黄芩苷的含量 [ J].
中国药业 , 2004, 13(8):42
(收稿日期:2009-02-05;修回日期:2009-04-03)
(本文编辑　梁爱君)
文章编号:1008-9926(2009)03-0261-03　　中图分类号:R927.2　　　文献标识码:A
HPLC测定藏药螃蟹甲中 8-乙酰氧基山栀子苷甲酯的含量
张军莉① ,徐　娟 ,李茂星
(①兰州军区兰州总医院　甘肃　兰州　730050)
摘　要:目的　建立藏药螃蟹甲中 8-乙酰氧基山栀子苷甲酯的 HPLC测定方法,为进一步控制螃蟹甲药材及其制剂的质量提供参考
依据。方法　色谱柱为 SymmetryC18(4.6mm×150mm, 5μm), 流动相:乙腈-水(6∶94), HAc调 pH=4.50, 流速 0.8mL/min, 柱温
20℃, 检测波长 234 nm。结果　8-乙酰氧基山栀子苷甲酯浓度在 0.787 ～ 14.76μg·mL-1范围内与峰面积积分值线性关系良好(r=
0.999 9);加样回收率为 99.21%(RSD=1.68%)。螃蟹甲药材中 8-乙酰氧基山栀子苷甲酯平均含量为(0.62±0.19)mg·g-1。结
论　本方法简便、准确、专属性强,可用于螃蟹甲药材中 8-乙酰氧基山栀子苷甲酯的含量测定。
关键词:螃蟹甲;HPLC;8-乙酰氧基山栀子苷甲酯
Determinationof8-O-acetyl-shanzhisideMethylesterinTibetanMedicineRadix
PhlomisYounghusbandibyHPLC
ZHANGJun-Li① , XUJuan, LIMao-Xing
(LanzhouGeneralHospitalofPLA, Lanzhou　730050, Gansu　China)
·261·解放军药学学报　第 25卷第 3期　HPLC测定藏药螃蟹甲中 8-乙酰氧基山栀子苷甲酯的含量　　　　张军莉　
① 作者简介:张军莉(1977-),女 ,甘肃兰州人 ,在读硕士。研究方向:中药研究与开发。 Tel:E-mail:lm730530xing@yahoo.com.cn
　　通讯作者:李茂星 , Tel:(0931)8975884, E-mail:limaox2005@yahoo.com.cn
ABSTRACT:AimToestablishanHPLCmethodforthedeterminationof8-O-acetyl-shanzhisidemethylesterinTi-
betanmedicinalRadixPhlomisyounghusbandi.MethodsHPLCanalysiswasperformedonSymmetryC18(4.6mm
×150mm, 5μm, Waters)columnandthemixtureofacetonitrile-water(6∶94 , pH=4.5, HAc)wasusedasthe
mobilephaseataflowrateof0.8 mL/min.Thecolumntemperaturewas20℃ andthedetectionwavelengthwas
234nm.ResultsThelinearrangeof8-O-acetyl-shanzhisidemethylesterwas0.787 ～ 14.76μg·mL-1(r=0.999 9)
andtheaveragerecoverywas99.21% withRSD1.68%.Theaveragecontentof8-O-acetyl-shanzhisidemethylester
inRadixPhlomisyounghusbandiwas(0.62±0.19)mg·g-1.ConclusionThemethodissensitive, rapidandrepro-
ducible.Itissuitableforthedeterminationof8-O-acetyl-shanzhisidemethylesterinRadixPhlomisyounghusbandi.
KEYWORDS:HPLC;RadixPhlomisyounghusbandi.;8-O-acetyl-shanzhisidemethylester
　　螃蟹甲为唇形科糙苏属植物螃蟹甲 (Phlomis
younghusbandiMukerjee)的干燥块根 ,广泛分布于
西藏 、青海海拔 2 700 ～ 4 800m的地区 ,具有祛风活
络 、强筋壮骨 、清热消肿 、止咳祛痰之功效 ,用于治疗
感冒 、咳嗽 、疮疥肿毒 、风湿性关节炎 、肺炎 、支气管
炎等疾病。该药资源丰富 ,各地藏医院还将其制成
单味汤药或复方制剂 [ 1] 。化学成分研究表明螃蟹
甲根及地上部分含有大量以 8-乙酰氧基山栀苷甲
酯(8-O-acetylshanzhisidemethylester/barlerin)为代
表的环烯醚萜苷类成分[ 2、3] 。历届藏药质量标准及
1995年部颁 《药品标准 》藏药分册均有收载 ,但除性
状外都未建立定性 、定量质控指标 ,因而难以对螃蟹
甲药材及其制剂进行客观评价和有效质量控制 。高
咏莉等 [ 3、 4]在对其化学成分进行研究的基础上 ,比
较螃蟹甲指纹图谱 ,在多种来源螃蟹甲药材中均检
测出 8-乙酰氧基山栀苷甲酯 ,但是并没有测定出螃
蟹甲药材中 8-乙酰氧基山栀苷甲酯的含量。本文
在此基础上建立藏药螃蟹甲中 8-乙酰氧基山栀苷
甲酯含量的 HPLC测定法 ,并考察不同产地螃蟹甲
中 8-乙酰氧基山栀苷甲酯的含量 ,为进一步完善螃
蟹甲品质评价及质量控制提供参考依据。
1　材料
1.1　仪器　高效液相色谱仪 ,包括 600型二元梯度
泵 、996型二极管阵列紫外检测器 (美国 Waters公
司 ), BP210S电子分析天平 (Sartorius公司 ),
SK7200H超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公
司), Delta320pH计(梅特勒-托利多仪器公司)。
1.2　试药　螃蟹甲药材 [ 6份 ,分别收购于西藏林
芝 、昌都 、四川 、青海 、云南等地区 [经兰州医学院药
学系 赵汝能 教 授 鉴 定 为 螃 蟹 甲 (Phlomis
younghusbandiMukerjee)] ;8-乙酰氧基山栀子苷
甲 酯 对 照品 (自制 , 纯 度 >98.7%, 批 号:
20080520),纯化水 , HAc分析纯 ,乙腈为色谱纯 。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 　SymmetryC18色谱柱 (4.6mm×
150mm, 5μm);洗脱流动相为:乙腈 -水(6∶94), HAc
调 pH至 4.50;流速 0.8mL/min;检测波长 234nm;
柱温 20℃;进样量 20μL。在此色谱条件下 ,样品中
8-乙酰氧基山栀子苷甲酯峰形较好 ,与其它组分色
谱峰可达基线分离 ,见图 1 。
A对照品　B供试品　1 8-乙酰氧基山栀子苷甲酯
图 1　8-乙酰氧基山栀子苷甲酯 HPLC色谱图
Fig1　HPLCchromatogramof8-o-acetyl-shanzhiside
2.2　溶液的制备　(1)对照品溶液　精密称取干
燥至恒重的 8-乙酰氧基山栀子苷甲酯对照品 11.655
mg置 10mL量瓶中 ,加水至刻度 , 取此液 1mL置
10mL量瓶中 ,用 6%的乙腈定容 ,即得浓度为 116.5
μg·mL-1的对照品母液 。(2)供试品溶液精密称取
过 20目筛的螃蟹甲根 1g于 100mL具塞锥形瓶中 ,
加 50%甲醇 50mL,精密称重 , 60℃水浴加热 30min,
冷却称重 ,补齐重量 ,滤过后取续滤液适当稀释 ,即
得。
2.3　线性关系考察　精密吸取对照品溶液 ,以 6%
乙腈依次稀释配制 ,使 8-乙酰氧基山栀子苷甲酯浓
度分别为 0.787、 1.97、 3.94、 5.90、 9.84、 14.76
μg·mL-1。分别进样 20μL, 以色谱峰面积和浓度进
行回归分析 ,得回归方程:
A=29 819C+835.09 , r=0.999 9
表明 8-乙酰氧基山栀子苷甲酯的浓度在 0.787 ～
·262· 　解放军药学学报　 2009年 6月　第 25卷　第 3期　　　PharmJChinPLA　Vol25　 No3　Jun2009　　　　　
14.76μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系。
2.4　精密度试验　精密吸取 5.90μg·mL-1对照品溶
液 20μL, 分别于第 1、2、3天各重复进样 5次并测定 8-
乙酰氧基山栀子苷甲酯峰面积积分值 ,计算日内精密
度 RSD为 1.02%,日间精密度 RSD为 1.65%。
2.5　重复性试验　精密称取同一样品 6份 ,按 2.2
(2)项下制备供试品溶液 ,按 2.1项下条件测定峰
面积积分值 ,计算样品中 8-乙酰氧基山栀子苷甲酯
的含量 ,平均为 0.604mg·g-1 , RSD为 1.38%。
2.6　稳定性试验　精密吸取同一样品溶液分别在
0、2、4、8、12、24、48、72h测定峰面积积分值 , RSD为
1.45%,表明样品溶液在 72h内基本稳定。
2.7　加样回收率试验　取已知样品含量的供试品
适量 9份 ,分别加入对照品 0.59、0.984、1.476mg,
混匀 ,按 2.2(2)项下制备供试品溶液 ,按 2.1项下
测定色谱峰面积 ,计算其中 8-乙酰氧基山栀子苷甲
酯的含量及相应的加样回收率 ,结果见表 1。
表 1　加样回收率试验
Tab1　Recoveryresultsof8-O-acetyl-shanzhisidemethylester
取样量
(g)
样品量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
x
(%)
RSD
(%)
2.005 1.406 0.590 2.002 101.10
2.010 1.409 0.590 1.995 99.32
2.008 1.408 0.590 1.989 98.54
2.011 1.410 0.984 2.375 98.10
1.998 1.401 0.984 2.349 96.38 99.21 1.68
1.999 1.401 0.984 2.377 99.16
2.003 1.404 1.476 2.873 99.52
2.001 1.403 1.476 2.910 102.12
2.000 1.402 1.476 2.858 98.64
2.8　样品含量测定　精密称取螃蟹甲样品(过 20
目筛)1g于 100mL具塞锥形瓶中 , 加 50%甲醇
50mL,精密称重 , 60℃水浴加热 30min,冷却称重 ,补
齐重量 ,摇匀 ,滤过 ,精密吸取 2.0mL, 以流动相稀
释定容到 25mL,按照 2.1项色谱条件测定 8-乙酰氧
基山栀子苷甲酯的色谱峰面积 ,根据标准曲线计算
含量 ,结果见表 2。
3　讨论
3.1　提取溶媒的选择　取供试品分别考察加水
(两份)、50%甲醇(两份)和甲醇(两份)50mL,按供
试品溶液制备方法制备 ,上述色谱条件测定各供试
品溶液 ,结果 50%甲醇提取能力最强。
表 2　样品中 8-乙酰氧基山栀子苷甲酯含量测定(n=3)
Tab2　Thecontentof8-O-acetyl-shanzhisidemethylesterinsamples(n=3)
样品来源 含量(mg·g-1) x(mg·g-1)
西藏昌都 0.52
西藏林芝 0.84
西藏林芝 0.76
四川 0.39 0.62±0.19
青海 0.45
云南 0.75
3.2　提取方式的选择　取供试品分别以 60℃水
浴 ,回流提取及超声提取 30min,结果 60℃水浴与回
流提取无显著性差异 ,但明显优于超声提取 。
3.3　提取次数和提取时间的选择　在上述研究基
础上 ,进一步考察以 50%甲醇为溶剂 , 提取 1、2、3
次和提取 30、45min及 1h,结果表明 50%甲醇 60℃
水浴 30min就能实现样品中 8-乙酰氧基山栀子苷甲
酯的完全提取 ,增加提取次数和提取时间没有实质
性的意义 。
3.4　流动相乙腈-水 (6∶94)条件下 , 8-乙酰氧基山
栀子苷甲酯保留时间为 14.52min,样品中其他化合
物的出峰时间一般在 10min以内 ,基本无干扰 ,方法
快速简便 。
3.5　从不同地区来源螃蟹甲药材中均检测出 8-乙
酰氧基山栀子苷甲酯 ,平均含量为 0.62mg·g-1 ,但
差别较大 ,因此测定样品中 8-乙酰氧基山栀子苷甲
酯含量可以用来评价螃蟹甲药材品质。同时 8-乙
酰氧基山栀子苷甲酯广泛存在于螃蟹甲 、萝卜秦艽
及其他糙苏属植物中[ 5] 。建立样品中 8-乙酰氧基
山栀子苷甲酯的 HPLC测定方法 ,对于控制螃蟹甲
及其他糙苏属植物来源药材的质量具有重要借鉴意
义。
参考文献:
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[ J] .中药材 , 2007, 30(8):1239
[ 4] 　高咏莉 ,林瑞超 ,王钢力 ,等.藏药螃蟹甲的化学成分研究 [ J].
中药材 , 2007, 30(10):1239
[ 5] 　易近海 ,钟炽昌 ,罗泽渊 ,等.糙苏属和独一味属植物化学成分
及其分类学的意义 [ J] .中草药 , 1992, 23(7):382
(收稿日期:2008-07-02;修回日期:2009-04-08)
(本文编辑　狄亚敏)
·263·　解放军药学学报　 2009年 6月　第 25卷　第 3期　　　PharmJChinPLA　Vol25　 No3　Jun2009