全 文 ：收稿日期:2010-03-15
基金项目:国家自然科学基金(30760195)资助项目.
作者简介:俞青芬(1975-),女 ,青海乐都人 ,副教授 , 硕士 ,主要从事理论与计算化学方面的研究.
文章编号:1000-5862(2010)02-0174-04
青海不同地区秦艽 、麻花艽中落干酸和
龙胆苦苷的含量测定
俞青芬
(青海民族大学 化学系 ,青海 西宁　810007)
摘要:采用Kromasil-C18(250 mm×4.6 mm , 5μm)色谱柱 , 流动相为甲醇-0.04%磷酸水溶液系统 ,流动相梯
度洗脱程序为在 15 min内甲醇从体积 23%线性变化为 30%, 检测波长为 238 nm ,流速为 1 mL/min , 柱温
为 35 ℃,建立了对青海不同地区秦艽 、麻花艽中落干酸和龙胆苦苷的高效液相色谱测定方法.结果表明:
落干酸和龙胆苦苷的回收率分别为 95.19%和 96.01%;RSD 分别为 0.57%和 0.33%;线性范围分别为
0.198 0～ 5.544 0μg(r=0.999 9)和 0.026 0 ～ 0.733 6 μg(r=0.999 9).
关键词:HPLC;秦艽;落干酸;龙胆苦苷
中图分类号:O 655　　　　　文献标识码:A
秦艽 、麻花艽藏医均称为“解吉嘎保” ,可止血 ,消肿 ,清腹热 、胆热 、脉热[ 1] .藏医用全草治关节炎 、肺病
发烧 、黄疸及二便不通[ 2] ,其主要化学成分有落干酸(loganic acid)、龙胆苦苷(gentiopicroside)等[ 3] .现代药理
学研究表明 ,落干酸具有一定的抗炎活性 ,对角叉菜胶引起的小鼠足肿胀和 TPA引起的小鼠耳肿胀抑制率
达44.4%[ 4] ;龙胆苦苷有促进胃液分泌 、抗原虫和抗炎作用[ 5] .对龙胆科植物中龙胆苦苷的测定方法主要有
薄层扫描和高效液相色谱法[ 6-9] ,但对落干酸及落干酸 、龙胆苦苷同时测定的方法未见报道.本文建立了对
麻花艽 、秦艽中上述 2种成分同时测定的方法 ,并利用该法测定了青海不同地区的麻花艽 、秦艽中落干酸和
龙胆苦苷的含量.
1　仪器与药品
Agilent 1100型色谱工作站 ,手动进样器 ,DAD检测器 ,在线脱气机 ,高压二元梯度泵 ,恒温柱温箱;甲醇
(高效液相色谱专用试剂 ,山东禹王实业有限公司禹城化工厂)、磷酸等均为分析纯 ,纯净水为自制 3重蒸
馏水.
落干酸 、龙胆苦苷标准品由中国科学院生物研究所提供.
秦艽各样品于 2005年 8月采自青海不同地区 ,由中国科学院西北高原研究所胡凤祖副研究员鉴定.样
品阴干 、粉碎 、过 80目筛 、冷藏保存.
2　方法与结果
2.1　色谱条件
Kromasil C18(4.6 mm×250 mm ,5μm)色谱柱;流动相:甲醇-0.04%磷酸水溶液线性梯度洗脱;柱温 35 ℃;
流速为 1mL/min;检测波长为 238 nm.多次试验证明 ,在上述流动相和波长下出现的峰最明显 ,色谱图见图 1.
2.2　对照品溶液的制备
分别称取落干酸 3.96 mg 、龙胆苦苷 1.27 mg用甲醇溶解并定容于 10 mL 容量瓶中 ,作为储备液 ,使用时
第 34 卷第 2期
2010 年 3 月　
江西师范大学学报(自然科学版)
JOURNAL OF JIANGXI NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
Vol.34 No.2
　Mar.2010
DOI :10.16357/j.cnki.issn1000-5862.2010.02.019
稀释至所需浓度.
1.落干酸(loganic acid);2.龙胆苦苷(gentiopicroside).
图 1　落干酸和龙胆苦苷的色谱图
2.3　供试品溶液的制备
称取青海不同地区的秦艽粉末 24份各 2.00 g 作为样品 ,量取 10.00 mL 的甲醇加入到圆底烧瓶中 ,超声
处理 30 min;将提取液滤入 50 mL的容量瓶中.重复上述操作 2次 ,将滤液滤入 50 mL容量瓶中定容.
2.4　标准曲线及线性范围
分别吸取落干酸-龙胆苦苷的混合对照品溶液 0.5 ,1.0 ,2.0 , 6.0 ,10.0 , 14.0 ,20.0 μL 分别注入高效液相
色谱仪中进行分析测定.以对照品峰面积为纵坐标 ,以进样量为横坐标绘制标准曲线 ,得落干酸的回归方程
为 A=1 090 x-94.417 ,线性范围为 0.198 0 ～ 5.544 0(r=0.999 9);龙胆苦苷的回归方程为 A=2 925.5x -
31.878 ,线性范围为 0.026 2 ～ 0.733 6(r=0.999 9),表明此范围下进样量与峰面积呈良好的线性关系.
2.5　精密度试验
吸取混合标准品溶液适量 ,连续5次进样 ,测定落干酸和龙胆苦苷的峰面积 ,计算其 RSD(n=5)分别为
1.10%和 1.16%.
2.6　重复性试验
称取 1 g 样品(青海平安1号)5份 ,按上述方法测定并计算含量.样品中落干酸 、龙胆苦苷的 RSD(n=5)
分别为1.10%,1.30%.说明方法可靠 ,重复性好.
2.7　回收率试验
称取已经测知含量的样品(青海平安 1号)共 3份 ,分别加入适量落干酸和龙胆苦苷混合标液依法提取
测定.落干酸 、龙胆苦苷的平均回收率见表 1.
表 1　2 种化合物的回收率测定(n=3)
化合物 测得量/μg 已知量/μg 加入量/μg 回收率/ % 平均回收率/ % RSD/ %
132.78 13.03 95.17
落干酸 144.80 120.38 26.09 93.60 95.19 0.57
152.74 33.43 96.80
143.46 8.73 97.14
龙胆苦苷 149.96 134.98 16.72 89.60 96.01 0.33
157.06 21.80 101.28
2.8　稳定性试验
取对照品混合溶液 ,室温放置 0 ,4 ,8 ,12 ,24 h.用以上确定的色谱条件进行测定 ,测得落干酸 、龙胆苦苷
175第 2期 俞青芬:青海不同地区秦艽 、麻花艽中落干酸和龙胆苦苷的含量测定
峰面积的 RSD(n=6)分别为 0.66%,0.34%.证明室温放置 24 h对照品溶液仍然稳定.
2.9　样品的测定
根据上述样品处理方法 ,对 24种秦艽属植物进行了定量提取 ,在适定的色谱条件下 ,对 24种秦艽进行
了落干酸和龙胆苦苷2种药效成分的含量测定 ,结果见表 2.表2中 A 、B 分别表示落干酸和龙胆苦苷的质量
百分浓度.
表 2　24种秦艽中 2 种药用成分的测定
编号 种名 采集地点 A/ % B/ %
1 麻花艽 青海平安 1号 5.68 7.73
2 麻花艽 青海化隆 1号 4.28 6.48
3 麻花艽 青海互助 1号 2.62 3.82
4 麻花艽 青海互助 2号 1.87 2.89
5 麻花艽 青海互助 3号 4.48 7.05
6 麻花艽 青海西宁 1号 1.20 2.73
7 麻花艽 青海西宁 2号 3.27 6.70
8 麻花艽 青海西宁 3号 3.21 6.59
9 麻花艽 青海湟源 1号 2.14 4.15
10 麻花艽 青海黄南州 1 号 3.18 4.04
11 麻花艽 青海黄南州 2 号 2.22 4.65
12 麻花艽 青海黄南州 3 号 4.29 8.58
13 麻花艽 青海黄南州 4 号 5.66 8.67
14 麻花艽 青海湟中 1号 3.51 6.88
15 麻花艽 青海龙羊峡 1 号 3.76 4.46
16 麻花艽 青海海南州 1 号 2.82 3.40
17 秦艽 青海黄南州 5 号 2.61 4.03
18 秦艽 青海互助 4号 2.22 4.18
19 达乌里秦艽 青海黄南州 6 号 0.87 1.66
20 达乌里秦艽 青海乐都 1号 1.86 3.36
21 达乌里秦艽 青海平安 2号 2.46 3.31
22 达乌里秦艽 青海化隆 2号 1.58 3.86
23 达乌里秦艽 青海互助 5号 1.32 3.83
24 达乌里 蕾 青海贵德 1号 1.04 1.54
3　讨论
本试验对秦艽药材的测定结果表明不同产地的样品中均含有落干酸和龙胆苦苷 ,说明这 2种化合物在
秦艽中普遍存在且含量较高.但不同品种秦艽药材中落干酸和龙胆苦苷含量差异悬殊 ,同品种秦艽药材因
产地不同 ,落干酸和龙胆苦苷含量也有较大差异.其中青海平安 1号 、青海化隆 1号 、青海黄南州 3号 、青海
互助 3号 4地落干酸质量分数均高于 4%,而青海黄南州 6号 、青海贵德1号 、青海西宁 1号的落干酸质量分
数仅在1%左右;青海黄南州 3号 、青海黄南州 4号 、青海平安 1号 、青海互助 3号 4地龙胆苦苷质量分数均
高于 7%,而青海西宁1号 、青海黄南州 6号 、青海贵德 1号龙胆苦苷的质量分数仅在 2%以下.造成青海各
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地秦艽品质良莠不齐的主要原因在于青海省秦艽药材分布区域广 ,产地气候条件及地理位置上差异较大.
因此 ,为保证药用秦艽的质量 ,改变中药制剂疗效不稳定的现状 ,药监管理需从源头抓起.
本文的回收率试验结果表明 ,各样品回收率均好 ,此测定方法可行.从含量测定结果看 ,本法专属性强 、
灵敏 、准确 、方便易行.
参考文献:
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77.
Compare with the Active Constituents in Different Districts of
Gentiana Macrophylla Pall
YU Qing-fen
(Department of Chemistry , Qinghai Nationalities College , Xining Qinghai 810007 ,China)
Abstract:The sample were separated on the column of Kromasil-C18(250 mm×4.6 nm ,5μm)which eluted with elutde
with methanol and water(0.04%phosphoric acid).The ratio of methanlo and water increased from 23% to 30% in 15
min with detected wavelength at 238 nm , flow rate at 1 mL/min , column temperature at 35 ℃, to establish a quantitative
method of simultaneously determination of loganic acid and gentiopicroside in different districts of Gentiana Macrophylla
Pall by RP-HPLC.The average recoreries were 95.19%,96.01%(RSD =0.57% and 0.33%)of the loganic acid and
the gentiopicroside , two compounds were baseisolated.The linear rangs of loganic acidand gentiopicrolatde.The linear
rangs of loganic acid and gentiopicroside were 0.198 0-5.544 0μg(r =0.999 9), 0.026 0-0.733 0 μg(r=0.999 9)
respectively.
Key words:HPLC;Gentiana Macrophylla Pall;laganic acid;gentiopic-roside
(责任编辑:刘显亮)
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