全 文 ：HPLC法同时测定萝卜秦艽中 4种环烯醚萜苷的含量
余振喜 ,王钢力 ,林瑞超
(中国药品生物制品检定所 ,北京 100050)
　　摘要　目的:建立 HPLC法同时测定萝卜秦艽(PhlomismedicinalisDiels.)中 sesamoside(Ⅰ )、山栀苷甲酯
(Ⅱ)、dehydropentstemoside(Ⅲ)和 8-乙酰基山栀苷甲酯(Ⅳ)等 4种环烯醚萜苷含量的方法。方法:采用 HPLC法 ,
色谱柱:DiamonsilTMC18(250 mm×4.6 mm, 5μm);流动相:乙腈-水 ,梯度洗脱;流速:1.0ml/min;检测波长:235nm;
柱温:25℃。结果:4种环烯醚萜苷的线性范围分别为:Ⅰ :0.102 ～ 0.521 mg/ml(r=0.9999);Ⅱ:0.101 ～ 0.505 mg/
ml(r=1.0000);Ⅲ:0.101 ～ 0.506 mg/ml(r=0.9999);Ⅳ:0.021 ～ 0.105 mg/ml(r=0.9998)。 4种成分的平均回收
率均在 99.34% ～ 100.23%, RSD≤1.5%。结论:本法简便 、快速 、准确 , 可以用来同时测定萝卜秦艽中 4种环烯醚
萜苷的含量。
关键词　HPLC;萝卜秦艽;seasmoside;山栀苷甲酯;dehydropentstemoside;8-乙酰基山栀苷甲酯
中图分类号:R284.1　　文章标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)12-1836-03
　　萝卜秦艽为唇形科糙苏属多年生草本植物萝卜
秦艽 PhlomismedicinalisDiels.的根 ,主产于四川西
部 、西藏东部 ,生长于海拔 1 700 ～ 3 600 m的山坡
上 〔1, 2〕。其性凉 ,味苦 ,有疏风清热 、止咳化痰 、生肌
敛疮之功效 ,主治风热感冒 、咳嗽痰多 、疮疡久溃不
敛等症 〔2, 3〕。萝卜秦艽作为螃蟹甲 RadixPhlomidis
入药 ,在西藏等地区应用广泛 。笔者对该植物根的
95%乙醇提取物的化学成分进行了较为系统的研
究 ,共分离出 6个环烯醚萜苷类化合物 〔4〕。鉴于环
烯醚萜苷类成分是糙苏属植物所含主要成分之一 ,
是其止血 、抗炎 、抗氧化和抗肿瘤的主要有效成
分 〔5, 6〕 ,且目前还没有关于该属植物质量控制的标
准和报道 ,因此 ,建立可行的环烯醚萜苷类成分的分
析方法对于有效评价该属药材品种的质量具有一定
的实际意义 。本文采用 HPLC法对萝卜秦艽中的
sesamoside、山栀苷甲酯 、dehydropentstemoside和 8-
乙酰基山栀苷甲酯等 4种含量相对较高的环烯醚萜
苷类成分进行了定量分析 ,取得了较为满意的结果 。
1 　仪器与试药
1.1 　仪器　LC-10ADVP液相色谱仪 , SPD-M10AVP
DAD检测器(日本 Shimadzu公司);FX-200型电子
分析天平(日本 And公司);AE240型电子分析天
平(瑞士 Metler公司);KQ-250DE型医用数控超声
波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
1.2 　试剂　乙腈为色谱纯 ,水为去离子水 ,甲醇为
分析纯 。
1.3 　试样　萝卜秦艽经中国药品生物制品检定所
张继副主任药师鉴定为 P.medicinalis的干燥根 。
2003年 8月采于西藏自治区林芝地区 ,由西藏藏药
股份有限公司提供 ,样品标本存放于西藏自治区药
品检验所标本室。对照品 sesamoside(Ⅰ )、山栀苷
甲酯(shanzhisedmethylester, Ⅱ)、dehydropentstemo-
side(Ⅲ)、8-乙酰基山栀苷甲酯(8-O-acetyl-shanzhi-
sidemethylester, Ⅳ)均为从萝卜秦艽中提取分离纯
化所得 ,并经理化分析和波谱鉴定 , HPLC面积归一
化法计算 ,纯度均大于 98.0%。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 　色谱柱:DiamonsilTMC18柱 (250
mm×4.6mm, 5μm);流动相:乙腈-水梯度洗脱(见
表 1);检测波长:235 nm;流速:1.0 ml/min;柱温:
25℃;进样体积:10 μl。
　表 1 　流动相梯度洗脱程序
时间(min) 乙腈(%) 水(%)
0 10 90
8 10 90
38 36 64
2.2　溶液的制备
2.2.1 　供试品溶液的制备:取样品干燥粉末(过三
号筛)约 1.0 g,精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加
入甲醇-水(1∶1)50 ml,称定重量 ,超声处理(功率
250W,频率 33 kHz)30 min,取出 ,放冷 ,再称定重
量 ,用甲醇 -水(1∶1)补足减失的重量 ,摇匀 ,滤纸滤
过 ,取续滤液 ,用 0.45 μm微孔滤膜滤过 ,取续滤
液 ,作为供试品溶液 。
2.2.2 　混合对照品溶液的制备:分别取所需 4种
对照品适量 ,精密称定 ,加甲醇-水(1∶1)制成含 Ⅰ
0.512 mg/ml、Ⅱ 0.505 mg/ml、Ⅲ 0.506 mg/ml和Ⅳ
0.105 mg/ml的混合溶液 ,作为混合对照品溶液 。
2.3　系统适用性试验　按上述色谱条件 ,分别取
各对照品溶液 、混合对照品溶液 、供试品溶液进样
10μl,记录色谱图。结果表明:对照品 Ⅰ 、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ
保留时间分别为 9.17、13.91、20.64和 26.12 min;
·1836· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 12期 2008年 12月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.12.025
混合对照品溶液色谱图上 ,各对照品色谱峰的理论
塔板数均大于 5000,拖尾因子均小于 2.0;在供试品
溶液的色谱图上 ,各对照品对应的色谱峰与其相邻
色谱峰的分离度均大于 2.0。见图 1。
图 1　供试品溶液的 HPLC色谱图
Ⅰ .sesamoside　Ⅱ.山栀苷甲酯　Ⅲ.delydropentstemoside　
Ⅳ.8-乙酰基山栀苷甲酯
2.4 　方法学考察
2.4.1　线性范围考察:精密量取混合对照品溶液
1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml,分别置于 5 ml容量瓶中 ,
用甲醇 -水(1∶1)稀释至刻度 ,摇匀 ,作为线性范围考
察的对照品溶液 。分别精密吸取上述各浓度混合对
照品溶液 10μl,注入液相色谱仪 ,测定 ,记录色谱
图。分别以 4个对照品的 5个浓度 X(mg/ml)为横
坐标 ,峰面积 Y为纵坐标 ,进行线性回归 ,对照品Ⅰ、
Ⅱ、 Ⅲ、 Ⅳ的回归方程 、相关系数 、线性范围见表 2。结
果表明:各对照品在各自浓度范围内线性关系良好。
　表 2　　　　　对照品Ⅰ 、Ⅱ 、Ⅲ 、Ⅳ的回归
方程 、相关系数和线性范围
对照品 线性回归方程 相关系数 线性范围(mg/ml)
Ⅰ Y=1.31×107X+5.83×104 0.9999 0.102 ～ 0.512
Ⅱ Y=1.15×107X+2.07×103 1.0000 0.101 ～ 0.505
Ⅲ Y=1.03×107X-2.50×104 0.9999 0.101 ～ 0.506
Ⅳ Y=1.19×107X-4.89×102 0.9998 0.021 ～ 0.105
2.4.2 　精密度试验:精密吸取混合对照品溶液 10
μl,注入液相色谱仪 ,测定 ,连续进样 6次 ,记录色谱
图。对照品 Ⅰ 、Ⅱ 、Ⅲ 、Ⅳ峰面积的 RSD分别为
0.1%、0.8%、0.9%和 0.9%,表明色谱系统稳定 、
精密度良好。
2.4.3 　稳定性试验:分别于 0、2、4、6、8、10、12 h
精密吸取供试品溶液 10 μl,注入液相色谱仪 ,测定 ,
记录色谱图。对照品 Ⅰ 、Ⅱ 、Ⅲ 、Ⅳ对应色谱峰峰面
积的 RSD分别为 0.4%、 0.5%、1.3%和 0.3%,表
明供试品溶液在 12 h内稳定性良好 。
　　表 3 　回收率试验结果(n=6)
测量成分 No. 取样量(g) 含量(mg) 加入量(mg) 实测值(mg) 回收率(%) 平均值(%) RSD(%)
成分Ⅰ
1 0.5013 7.5776 7.5731 15.2103 100.79
2 0.4995 7.5504 7.5652 15.0985 99.77
3 0.5010 7.5731 7.6028 15.1732 99.96
4 0.4998 7.5550 7.4950 15.1219 100.96
5 0.5084 7.6850 7.6194 15.1946 98.56
6 0.5105 7.7167 7.6787 15.4651 100.91
100.16 1.0
成分Ⅱ
1 0.5107 4.1255 4.0634 8.1545 99.16
2 0.5086 4.1084 4.0925 8.1938 99.82
3 0.5032 4.0648 4.0691 8.2091 101.85
4 0.4997 4.0366 4.0676 8.0659 99.06
5 0.4992 4.0325 4.0548 8.1003 100.32
6 0.5109 4.1270 4.1019 8.1587 98.29
99.75 1.3
成分Ⅲ
1 0.4991 2.9616 2.9596 5.9431 100.74
2 0.5030 2.9848 2.9991 5.9745 99.69
3 0.5002 2.9682 2.8973 5.8798 100.49
4 0.4999 2.9664 2.9889 5.9013 98.193
5 0.5045 2.9937 2.9625 5.9865 101.02
6 0.4994 2.9634 2.9736 5.9746 101.26
100.23 1.2
成分Ⅳ
1 0.5102 2.3270 2.2875 4.6473 101.43
2 0.4996 2.2788 2.2912 4.5265 98.11
3 0.5045 2.3010 2.3127 4.5728 98.23
4 0.5022 2.2905 2.2994 4.5491 98.22
5 0.4993 2.2773 2.2781 4.5694 100.61
6 0.5059 2.3074 2.2943 4.5882 99.41
99.34 1.5
·1837·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 12期 2008年 12月
2.4.4　加样回收率试验:精密称取已知含量的样
品 0.5g,置具塞锥形瓶中 ,分别精密加入相当于已
知含量的对照品 Ⅰ 、Ⅱ 、Ⅲ、Ⅳ ,按 “ 2.2.1”项方法 ,
制成所需样品溶液 ,进行加样回收率试验 。按公式:
回收率%=100% ×(C-A)/B(式中:A为供试品
所含被测成分量 , B为加入对照品量 , C为实测值),
计算回收率 (%), 并求出其平均值 (%)和 RSD
(%),结果如表 3。
2.5 　含量测定结果　按 “ 2.2”项下方法制备供试
品溶液和对照品溶液 。色谱条件同 “ 2.1”项下 。精
密吸取对照品溶液和各供试品溶液各 10μl,分别注
入液相色谱仪 ,测定 ,记录色谱图。按外标法以峰面
积计算各样品中所含化学成分 Ⅰ 、Ⅱ 、Ⅲ 、Ⅳ的含量
(%),结果见表 4。
　表 4 　含量测定结果(n=3)
测量成分 样品 含量(%) RSD(%)
1 1.50 0.54
Ⅰ 2 1.51 0.43
3 1.48 0.56
1 0.80 0.69
Ⅱ 2 0.83 0.57
3 0.79 0.80
1 0.58 0.81
Ⅲ 2 0.62 0.76
3 0.59 1.05
1 0.49 0.92
Ⅳ 2 0.46 1.10
3 0.45 0.78
3 　讨论
3.1 　提取条件的选择
3.1.1　提取溶液的选择:由于环烯醚萜苷类成分
易溶于甲醇和水 ,于是以甲醇 、甲醇-水(1∶1)和水为
提取溶剂 ,分别采用超声和连续回流的提取方法对
实验结果进行比较 ,综合分析实验结果表明在其它
条件相同的情况下 ,甲醇-水(1∶1)提取效率较高。
3.1.2　提取方法的选择:综合分析甲醇-水(1∶1)
超声提取和连续回流提取的实验结果表明:在其它
条件相同的情况下 ,超声提取 30min和连续回流提
取至近无色(4.0 h左右)时 ,两者提取效率相差不
大 ,但考虑到连续回流提取费时费事 ,操作相对比较
繁琐 ,故选择超声提取作为提取方法 。
3.1.3　提取时间的选择:在其它条件相同的情况
下 ,取 4份样品 ,采用甲醇-水(1∶1)超声提取 ,超声
时间分别为 15、30、45和 60min。结果表明:待测成
分在 30 min时已基本提取完全 ,故确定提取时间为
30 min。
3.2　色谱条件的选择
3.2.1 　测定波长的选择:配制一定浓度的 Ⅰ 、Ⅱ、
Ⅲ、 Ⅳ对照品溶液 , 采用 ShimadzuHPLCSPD-
M10AVPDAD检测器在 190 ～ 370 nm范围内进行扫
描 ,记录光谱图 。结果表明:对照品Ⅰ在 234 nm波
长处有最大吸收 ,对照品 Ⅱ在 236nm波长处有最大
吸收 ,对照品Ⅲ在 236 nm波长处有最大吸收 ,对照
品Ⅳ在 235 nm波长处有最大吸收 。考虑到同时测
定这 4个化学成分的含量 ,综合各对照品的最大吸
收波长 ,在可以允许的范围内 ,选择 235 nm为检测
波长 。
3.2.2　流动相的选择:实验结果表明:采用等度洗
脱 ,分析时间太长 ,因此采用梯度洗脱。经过反复试
验 ,在保证分离度 、柱效和尽量缩短分析时间的前提
下 ,采用乙腈 -水为流动相按表 1所示进行梯度洗脱
为优 。
3.3　小结　由于环烯醚萜苷类成分有一定的药理
活性 ,因此 ,本文采用 HPLC法 ,以 sesamoside、山栀
苷甲酯 、dehydropentstemoside和 8-乙酰基山栀苷甲
酯为指标 ,对萝卜秦艽中含量相对较高的 4个环烯
醚萜苷类成分进行了定量分析。该分析对萝卜秦艽
药材的鉴别和质量评价具有重要的意义 ,并对该药
材的进一步研究 、开发 、利用和质量标准的制定提供
了理论依据和科学参考 ,同时也为糙苏属其它植物 ,
特别是以螃蟹甲为主要来源的作为露木尔类药材入
药的药材的含量测定或质量标准 〔7〕的制定 、修改和
完善有一定的借鉴意义 。
参 考 文 献
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(2008-06-02收稿)
·1838· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 12期 2008年 12月