全 文 ：收稿日期:2005-05-30
1)教育部 2001年度科学技术研究重点项目(01131)《藏药湿生扁蕾研究与开发》课题资助
正交设计法研究花锚药效成份的优化提取工艺1)
屠兰英 ,曹长年
(青海大学化工学院应用化学系 ,青海西宁 810016)
摘　要:运用正交设计法研究了椭叶花锚中总黄酮的提取工艺 ,通过实验确定出了最佳的提取工艺条件 。
关键词:正交设计法;花锚;总黄酮
Orthognal design method for medicinal efficaly research of
Halenia sibirica with optimal abstraclyng technology1)
Tu lanying ,Cao changnian
(Department Applined Chemistry Qinghai University ,Qinghai ,Xining 810016)
Abstract:T o study the extraclive technology of gross flavonlids f rom Halenia sibirica Borkh using orthogonal
design and the best condition of extraclive technology is determ ined by experiments.
Key word:O rthogonal design;Halenia sibir ica Borkh;gross flavonlids
　　花锚为龙胆科植物花锚(Helenia sibirica Borkh)
的干燥全草。椭叶花锚又名黑及草 ,藏语称“去合斗拉
果玛” 。产于西藏 、青海 、内蒙等地 , 1 年生草本 ,生于海
拔 2600 ～ 4600m的灌丛林缘 、高山草甸 、河滩潮湿的地
方。据普查 ,青海省蕴藏量约有92 万t [ 1] 。花锚全草入
药 ,具有清热利湿 、平肝利胆等功能。是民间藏医用于
治疗乙型肝炎 、急性黄胆型肝炎 、胆囊炎 ,还用于外伤
感染发烧 、外伤出血 ,疗效显著[ 2] 。为了制定出最佳的
提取工艺 ,特作如下实验。
1　原料与仪器
花锚全草 ,由青海师范大学生物系植物教研室提
供;芦丁对照品(青海省药品检验所提供);日立 557双
波长/双光束分光光度计 ,7230分光光度计(上海第三分
析仪器厂),TG328B光电分析天平(福州天平仪器厂)。
2　实验
2.1　正交实验设计
经查阅参考文献[ 3 ～ 8]研究决定 ,拟订 3 种因素 ,每
种因素选择 3个水平 ,见(表 1),按 L9(34)正交实验设
计(表 2),对花锚进行回流提取实验。
表 1　因素水平表
A 乙醇浓度(%) B回流时间(h) C溶剂量(倍)
1 70 3(3次) 10
2 85 4(3次) 8
3 90 5(3次) 6
　　注:C溶剂量(倍)———药材重量的倍数
2.2　实验
取花锚全草 ,切成大致 1cm左右的小段 ,分别称取
150g ,按表 1 选择的因素和水平 ,用乙醇回流提取 3
次 ,回收乙醇提取液 ,再用水沉法除去叶绿素等杂质 ,
加蒸馏水 ,使体积为 300m l ,即每 1ml水浸提取液相当
于原药材 0.5g 。最后 ,测定总黄酮的含量。
表 2　L9(34)正交实验及实验结果(n=2)
1A(%) 2B(h) 3C(倍) 4 总黄酮含量 Xi(mg/g)
1 1 1 1 1 46.39
2 1 2 2 2 52.16
3 1 3 3 3 49.38
4 2 1 3 2 58.56
5 2 2 1 3 69.82
6 2 3 2 1 65.65
7 3 1 2 3 58.81
8 3 2 3 1 63.29
9 3 3 1 2 62.79
K 1 147.93 163.76 179.00 175.33
K 2 194.03 185.27 176.62 173.51
K 3 184.89 177.82 171.23 178.01
K 12 21883.28 26817.33 32041.00 30740.61 G=∑Xi=526.85
K 22 37647.64 34324.97 31194.62 30105.72 CT =G2/ 9=30841.21
K 32 34184.31 31619.95 29319.71 31687.56
R 93715.23 92762.25 92555.33 92533.89
Q 31238.41 30920.75 30851.78 30844.63
S 397.20 79.53 10.57 3.42
R=K 12 +K22 +K32 ; S=Q-CT; Q =R/3
2.3　实验结果
根据实验所得数据 ,进行了数据处理及分析 ,见表 2 ,
根据 R值可判断出各因素对花锚蕾中总黄酮含量的影响
由 A 、B 、C顺序递减 ,同时 ,根据方差分析理论 ,得到方差
分析结果见表3。结果表明 ,因素 A对提取工艺影响非常
显著(P <0.01);因素 B对提取工艺影响显著(P <
0.05)。由于因素水平数≥3时 ,F 检验显著 ,并不一定所
有的水平之间差异都显著 ,因此 ,必须进行多重比较 ,作 T
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第1期(总第 80期) 中 国 林 副 特 产 N o.1(GSNO.80)
2006年 2月 Forest By-Product and Speciality in China Feb.2006
DOI :10.13268/j.cnki.fbsic.2006.01.002
千头菊组织离体培养及快繁技术的研究
张晓军1 ,2 ,郭长虹1
(1.哈尔滨师范大学生命科学与环境学院 , 黑龙江哈尔滨 150030;2.牡丹江师范学院生物系 , 黑龙江牡丹江 157012)
摘　要:以 MS 作为基本培养基 ,离体培养千头菊带腋芽茎段。结果表明:6-BA 和 NAA分别为 1.0mg/L
和 0.1mg/L的组合时丛生芽的诱导效率最高 ,诱导频率可达 100%, 6-BA 诱导丛生芽的效果明显优于
KT 和ZT 。组培苗在大量元素减半并附加 0.4mg/L NAA和 0.2%活性炭的 1/2MS 培养基上诱导生根
最为适宜 ,生根率达 100%。
关键词:千头菊;离体培养;快速繁殖
Studies on Tissue Culture in Vitro and Rapid Propagation
of Chrysanthemummorif olium
Zhang Xiao jun1 , 2 , Guo Changhong1
(1.College of Life Sciences and Environment , harbin Normal university ,harbin 150030;
2.Department of Biology , Mudanjiang Normal College , Mudanjiang Heilongjiang 157012)
检验。结果见表 4 、表 5。由表 4 、表 5可见 ,回流提取
4h与 5h 之间无显著差异 ,但回流提取 4h 、5h 优于提
取 3h;85%和 90%乙醇之间无显著差异 ,但 85%和
90%乙醇极显著优于 70%的乙醇。因此 ,花锚提取有
效成分总黄酮的最佳工艺条件为 A2B2C1 。
表 3　方差分析表
方差来源 离差平方和 自由度 均方 F 值 显著性
A 397.20 2 198.60 116.14 ＊＊
B 79.53 2 39.76 23.25 ＊
C 10.57 2 5.28 3.09
e(误差) 3.42 2 1.71
总和 490.72 8
　　F 0.01(2 , 2)=99.0;　F 0.05(2 , 2)=19.0
T检验:查得 q 0.05(3 , 2)=8.33 　q 0.01(3 , 2)=
19.02　所以 T 0.05 =11.05 　T 0.01 =25.23 用 T 值与
各水平因素差值的平均数进行比较 ,结果如下:
表 4　A 因素 T检验表
K2 K 3 K 1
K 2
K 3 3.05
K 1 15.37＊ 12.32＊
表 5　B因素 T 检验表
K2 K 3 K 1
K 2
K 3 2.48
K 1 7.17 4.68
3　结论
3.1　从表 2 、3 、4 、5可见 ,花锚提取有效成分总黄酮的
最佳工艺条件为 A 2B2C 1 。即用 85%乙醇 ,每次回流提
取 4h ,共提 3次 ,乙醇用量为药材重量的 10倍。
3.2　提取工艺中各因素对花锚中总黄酮含量的影响由
A 、B 、C顺序递减 ,即按乙醇浓度 、回流时间、溶剂用量
顺序递减。其中 ,因素 A 对提取工艺影响非常显著
(P<0.01);因素 B对提取工艺影响显著(P <0.05)。
3.3　花锚是作为优良的藏医药材 ,具有疗效好 、副作
用小 、绿色无污染等特点。本实验在工艺技术上为它
的开发和生产提供了理论依据。
参 考 文 献
1　罗达尚.藏药资源及其研究开发.中国藏药学 , 1997(4).
2　纪兰菊 ,瘳志新 , 孙洪发.青海龙胆科植物部分藏药植物
化学成分研究进展.高原生物学集刊 , 2002:243 ～ 249.
3　白玉霞.比色法测定花锚中部黄酮的含量.中国民族医
药杂志 , 1997 , 12(3).
4　徐任生.天然产物化学.北京:科学出版社 , 1997.
5　杨志学 ,万顺 , 张亮军.正交试验优选金银花中总黄酮的
最佳提取工艺.中国民族医药杂志 , 2004(1):17～ 18.
6　肖建波 ,邹登峰.正交设计提取梨皮总黄酮.中国林副
特产 , 2004(6):9 ～ 10.
7　青海药品检验所 , 青海省藏医药研究所.中国藏学.第
一卷.上海:科学技术出版社 , 1996.157 ～ 161.
8　中国科学院上海药物研究所主编.中草药有效成分的分
离与提取.第二版.上海:上海科学技术出版社 , 1983.7.
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第1期(总第 80期) 中 国 林 副 特 产 N o.1(GSNO.80)
2006年 2月 Forest By-Product and Speciality in China Feb.2006