全 文 ：天然产物研究与开发 Nat Prod Res Dev 2006, 18:1017-1019
文章编号:1001-6880(2006)06-1017-03
　
　
　收稿日期:2005-06-29　　　接受日期:2005-08-17
　基金项目:国家中西部专项资助项目(2001BA901A47);中国科学院
知识创新工程领域前沿项目(CXLY-2002-08)
＊通讯作者 Tel:86-971-6143900;E-mai l:gcchen@nwipb.ac.cn.
栽培藏药材麻花艽中四种苦苷类成分含量的季节性变化
孙　菁1 , 2 ,陈桂琛1＊ ,李玉林1 , 2 ,卢学峰1 ,纪兰菊1 ,周国英1 , 2
(1.中国科学院西北高原生物研究所 , 西宁 810008;2.中国科学院研究生院 ,北京 100039)
摘　要:采用高效液相色谱法 , 测定了栽培藏药材麻花艽根中龙胆苦苷 、落干酸 、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷四种苦
苷类成分的含量及其在不同生长期的动态变化。结果表明 , 四种苦苷类成分随植物的发育节律而波动。龙胆
苦苷的含量是评价药材质量的重要指标。龙胆苦苷的含量虽然在 7 月有个积累的高峰期 ,但 7 月为花期 , 从资
源可持续利用的角度考虑 ,不宜定为采收期 ,到 9 月含量又有所增加 ,故而确定栽培藏药麻花艽根的适宜采收期
应在 9～ 10月之间 。
关键词:龙胆科;麻花艽;龙胆苦苷;落干酸;獐牙菜苦苷;獐牙菜苷;季节变化;高效液相色谱法
中图分类号:Q946.83 文献标识码:A
Determination and Seasonal Variation of Four Iridoid Glycosides in
Gentiana straminea Cultivated
SUN Jing1 , 2 ,CHEN Gui-chen1＊ , LI Yu-lin1 ,2 ,LU Xue-feng1 , JI Lan-ju1 ,ZHOUGuo-ying1 ,2
(1.Northwest Institute of Plateau Biology , the Chinese Academy of Sciences , Xining 810008 , China;
2.Graduate School of the Chinese Academy of Sciences , Beijing 100039 , China)
Abstract:Seasonal variation of contents of four iridoids in Gentiana straminea cultivated were determined using a high perfor-
mance liquid chromatography equipped with a DVD ultraviolet detector at 240 nm and a Phenomenex kromasil Eclipse XDB-C8
column(4.6 mm×150 mm , 5 μm).Four iridoids showed a variation along the development rhythm.According to the contents
of gentiopicroside , roots of Gentiana straminea should be harvested during September and October.
Key words:Gentianaceae;Gentiana straminea;gentiopicroside;loganic acid;swertiamarin;sweroside;seasonal variation;HPLC
　　麻花艽(Gentiana straminea Maxim.)为龙胆科
(Gentianaceae)龙胆属多年生植物 ,是藏族民间常用
的解吉类草药之一[ 1] ,主要分布于青藏高原上 ,海拔
2000 ～ 4950 m[ 2] 。其以根入药 ,须根多数 ,扭结成一
个粗大 、圆锥形的根 ,为上品藏药;根味苦 、辛 ,性平 。
有祛风湿 、退虚热 、舒筋止疼的功能 。用于风湿关节
痛 、筋脉拘挛 、结核病潮热 、小儿疳积发热 、黄疸 、小
便不利等症[ 3] 。研究证明 ,其根中的有效成分主要
为苦苷类成分[ 4 , 5] ,如龙胆苦苷等 。由于近年来用
药量的增大 ,加之多年的过度采挖 ,造成了野生麻花
艽资源面临濒危的现状 。为此 ,我们进行了大量人
工引种栽培实验(实验结果另文发表),以期确保和
扩大麻花艽资源的可持续利用 ,为其合理利用和采
收提供一定参考 。本实验采用 HPLC 法测定了栽培
麻花艽中尚未有报道的四种主要苦苷类成分:龙胆
苦苷(gentiopicroside)、落干酸(loganic acid)、獐牙菜
苦苷(swertiamarin)、獐牙菜苷(sweroside)的含量;并
研究了其季节动态积累过程 。
1　实验部分
1.1　仪器 、试剂 、材料
仪器:Agilent1100型高效液相色谱仪(Agilent公
司),四元梯度泵 ,在线真空脱气机 ,DAD检测器 ,100
位自动进样器 ,KQ-200B型数控超声波清洗器(昆山
市超声仪器有限公司), Milli-Q 超纯水系统(美国
Millipore公司)。HPLC级色谱纯乙腈购自德国Mer-
ck公司;分析纯甲醇购自山东莱阳化工厂 。
龙胆苦苷 、獐牙菜苦苷对照品购自中国药品生
物制品鉴定所(批号分别为 110770-200308 、110785-
200203),落干酸 、獐牙菜苷由中国科学院西北高原
生物研究所李玉林副研究员提供(经归一法测定 ,纯
度大于 98%)。
2年生栽培麻花艽材料(根部)采自西宁地区栽
DOI :10.16333/j.1001-6880.2006.06.034
培基地 ,时间从 2004年 4月中下旬植物开始萌动发
芽开始 ,至 10月上旬植物地上部分基本枯萎 ,每月
一次 ,共 7个样品 ,基本包括了麻花艽整个生长期。
1.2　方法与结果
1.2.1　对照品的制备
分别精密称取龙胆苦苷 、落干酸 、獐牙菜苦苷和
獐牙菜苷对照品 ,用甲醇溶解后配成龙胆苦苷 1.9
mg/mL 、落干酸 0.8 mg/mL 、獐牙菜苦苷 1.2 mg/mL 、
獐牙菜苷 0.2 mg/mL的混合对照品溶液。
1.2.2　样品的制备
将麻花艽样品根部研成细粉 ,精密称取 0.2 g ,
置50 mL三角瓶中 ,加甲醇25 mL ,置于80 ℃水浴锅
上回流提取 2 h;放冷至室温后过滤 , 滤液置于 25
mL 容量瓶中 ,用甲醇定容 ,摇匀。
1.2.3　色谱条件
色谱柱:Eclipse XDB-C8色谱柱(4.6×150 mm 5
μm)。流动相A:5%乙腈(含 10mg/mL 的甲酸)水溶
液 ,B:95%的乙腈水溶液 。流速为 1.0 mg/mL ,进样
量为 10μL ,检测波长为 240 nm ,柱温 30 ℃。梯度洗
脱程序为:流动相B和A在 0 ～ 20min内由0:100至
100:0线性梯度洗脱。该色谱条件下落干酸 、獐牙
菜苦苷 、龙胆苦苷 、獐牙菜苷 4种成分均被洗脱并达
到基线分离(见图 1)。
图 1　对照品(A)及样品(B)9月份的色谱图
Fig.1　HPLC chromatogram of standards(A)and samples(B)
in September 2004
　　A、B中 1～ 4分别为落干酸 、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷
1～ 4 refer to loganic acid , swertiamarin , gentiopicroside and swero-
side , respectively
1.2.4　线性关系的考察
依据所待测样品的含量范围 ,将对照品混合溶液
逐级稀释 1倍 ,每次进样10μL ,按照上述色谱条件测
定四种成分各自的峰面积 ,以峰面积积分值为纵坐
标 ,进样量为横坐标绘制标准曲线 ,得到龙胆苦苷的
回归方程为 Y =6015.91X +106.47 , R =0.9999;落干
酸为 Y =6383.99X +40.12 , R=0.9999;獐牙菜苦苷为
Y =6058.47X+55.73 , R=0.9999;獐牙菜苷的为 Y =
6535.95X +10.82 , R=0.9999。
1.2.5　精密度试验
精密吸取上述对照品溶液 ,进样 10 μL ,在选定
的色谱条件下进样 ,重复 5次 ,进行精密度实验 ,得
龙胆苦苷峰面积的 RSD 为 0.96%, 落干酸为
1.99%,獐牙菜苦苷为 2.19%,獐牙菜苷为 2.00%。
1.2.6　重复性试验
精密称定同一批样品 ,按照供试品溶液制备方
法 ,进行重复性实验 ,每次进样 10 μL ,重复 5次 ,测
定后结果为龙胆苦苷 RSD 为 0.22%, 落干酸为
0.88%,獐牙菜苦苷为 0.80%,獐牙菜苷为 3.46%。
1.2.7　加样回收率度验
取已知含量的药材适量 ,加入一定量的对照品
混合溶液 ,按照样品处理方法制备并进样 10 μL ,计
算各对照品的加样回收率 ,得到龙胆苦苷 、落干酸 、
獐牙菜苦苷和獐牙菜苷的回收率分别为 100.22%、
99.45%、97.32%、99.31%。
1.2.8　样品的测定
吸取供试样品 10 μL ,分别进样 3次 ,用外标法
计算四种苦苷类成分的含量(表 1 、图 2)。
表 1　栽培麻花艽样品含量季节动态
Table 1　Seasonal variation of contents in Gentiana straminea cultivated
生长期
Growth
Stage
含量 Contents(%)
龙胆苦苷
Gentiopicroside
落干酸
Loganic
acid
獐牙菜苦苷
Swertiamarin
獐牙菜苷
Sweroside
总量
Total
content
4月 30日 6.140±
0.007
0.823±
0.008
0.453±
0.004
0.123±
0.006
7.538±
0.008
5月 28日 7.191±
0.004
1.235±
0.004
0.559±
0.003
0.441±
0.006
9.425±
0.010
6月 30日 6.978±
0.004
1.224±
0.003
0.653±
0.003
0.143±
0.003
8.998±
0.009
7月 29日 7.655±
0.003
1.168±
0.004
0.388±
0.004
0.257±
0.003
9.467±
0.012
8月 30日 5.704±
0.005
1.385±
0.004
0.505±
0.005
0.228±
0.003
7.822±
0.008
9月 24日 6.456±
0.017
1.351±
0.009
0.456±
0.010
0.114±
0.007
8.378±
0.032
10月 31日 5.643±
0.005
1.516±
0.003
0.404±
0.005
0.167±
0.003
7.730±
0.006
　　注:表中数值取自平均值与标准误(n=3)
Note:Values are means ±SEM(n=3)
2　讨论
自表1 、图 2中可以看出 ,7个不同生长期四种
苦苷类成分变化各有差异。龙胆苦苷的含量远远高
于落干酸 、獐牙菜苦苷与獐牙菜苷 ,使得其与四种成
1018 天然产物研究与开发　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　Vol.18
分总和的变化趋势一致 ,即最高含量出现在 7月 ,到
9月含量有所增加 ,较低含量在 10月。落干酸的含
量在整个生长期内基本呈上升趋势 ,即 4月含量最
低 ,到 10月基本达到 7个时期内的最高值 。獐牙菜
苦苷与獐牙菜苷的变化趋势比较相似 ,在 5 、6月份
呈现较高的含量后 ,此前 、此后一直处于较低水平 。
图 2　栽培麻花艽 4 种苦苷类成分季节动态
Fig.2　Seasonal variation of four glycosides total contents in
Gentiana straminea cultivated
　　注:1 ～ 7分别代表取样时间为 4 月 30 日 、5 月 28 日 、6
月 30日 、7 月 29 日 、8月 30日 、9 月 24 日 、10月 31 日
　　2005版《中国药典》中规定 ,秦艽类植物中龙胆
苦苷含量不低于 2%,从本实验的结果来看 ,栽培麻
花艽中龙胆苦苷的含量已经超过了 2%,7个时期的
平均值为 6.538%,已经达到用药的要求 ,为麻花艽
药材的人工引种栽培提供了初步的科学依据 。
四类苦苷类成分中 ,龙胆苦苷含量较其他三种
都高很多 ,因此确定栽培麻花艽根部的最佳采收期
主要依据龙胆苦苷的含量;此外 ,还应考虑资源的可
持续利用 ,7 月一般是植物形成花芽 、花苞的时间 ,
在此时期采收不利于该物种的生息繁衍;7 ～ 9月之
间 ,龙胆苦苷的含量经历了一个高—低—高的变化
过程 ,消耗掉一部分代谢能。同时 ,此间植物开始开
花甚至结实。有研究报道表明[ 6] ,植物化学成分的
这种变化很可能是在 7月 ,即花蕾期 ,产生较多的化
学物质 ,等到 8月开花结实时 ,作为植物用来传粉 、
繁衍后代或其他生物特性的能量;一旦主要的开花
结实期结束 ,植物体内化学成分的含量会有所增加 。
有关青藏高原上另一种重要藏药川西獐牙菜的研
究[ 7]与本实验有相似的结果 ,其 8月份各成分含量
较低 ,其中芒果苷 7月较高 ,其他 5种成分均在 9月
左右较高。因此 ,综合以上因素 ,我们认为栽培麻花
艽的最佳采收期应在 9 月至 10月之间 。对于此间
四种成分之间随季节变化的此消彼长 ,还有待进一
步的研究工作。
本实验所选用的高效液相色谱法与紫外检测器
联用的方法 ,对于不同生长期栽培麻花艽苦苷类成
分含量测定 ,精密度高 ,重复性好 ,方法简便 、快捷 ,
可为栽培麻花艽的药用及开发提供参考依据。
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1019Vol.18 孙　菁等:栽培藏药材麻花艽中四种苦苷类成分含量的季节性变化