全 文 ：RP-HPLC法测定青海不同地区麻花艽中獐牙菜苦苷含量
李梅兰　(青海大学化工学院 ,青海西宁 810007)
摘要　[目的]建立反相高效液相色谱法测定青海不同产地藏药麻花艽中有效成分獐牙菜苦苷含量的方法。[方法] 采用Kromasil C18(250
mm×4.6 mm , 5μm)色谱柱 ,26%甲醇水溶液(含 0.04%H3PO4)为流动相 ,流速 1 ml/min ,检测波长 240 nm ,柱温 30 ℃,测定獐牙菜苦苷含量。[结果]獐牙菜苦苷在 14 min内与其他组分达均到基线分离 ,獐牙菜苦苷的线性范围是 0.009 5～ 2.900 0μg/10μl(r=0.999 9),加标
回收率为 99.5%(RSD=3.2%)。[结论] RP-HPLC方法测定快速 ,结果准确、可靠。
关键词　反相高效液相色谱法;獐牙菜苦苷;麻花艽
中图分类号　S567.23+9　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2008)24-10522-02
Determination of Swertisin Content in Gentiana straminea Maxim.by RP-HPLC
LI Mei-lan　(College of Chemistry , Qinhai University , Xining, Qinghai 810007)
Abstract　[ Objective] The aim of this paperwas to establish a method for the determination of swertiamarin content in Gentiana straminea Maxim.by
RP-HPLC.[Method] The samples were separated in the column of Kromasil C18(250 mm×4.6 mm , 5μm).Then , it was eluted with 26%methanol/
water(0.04%H3PO4)with 240 nm detected wavelength and 1 ml/min flow rate under 30 ℃column temperature.[ Result] Swertiamarin was base-iso-
lated.The linear range of swertiamarin was between 0.009 5 and 2.900 0μg(r=0.999 9).The addition recovery ratewas 99.5%(RSD=3.2%).
[ Conclusion] The method was rapid , precise and credible.
Key words　RP-HPLC;Swertiamarin;Gentiana stramineaMaxim.
基金项目　青海省重点科技攻关项目(2006-N-141)。
作者简介　李梅兰(1969-), 女 ,青海湟中人 , 工程师, 从事分析化学
研究。
收稿日期　2008-06-02
　　麻花艽(Gentiana straminea Maxim.)藏医称“解吉嘎保” ,
属龙胆科多年生草本植物 ,主根粗长 ,圆锥形 ,上粗下细 ,扭
曲不直 ,有少数分枝 ,其中部多呈罗纹状 ,根头部有许多纤维
状残存叶基[ 1] ,可止血 ,消肿 ,清腹热 、胆热及脉热 ,藏医用全
草治关节炎 、肺病发烧 、黄疸及二便不通[ 2] 。其主要化学成
分是以龙胆苦苷为代表的环烯醚萜苷类化合物[ 3] 。前期研
究中 ,笔者从麻花艽水溶性部位分离得到了另一种环烯醚萜
苷类成分獐牙菜苦苷。现代药理学研究表明 ,獐牙菜苦苷和
龙胆苦苷都是龙胆科植物中抗炎活性成分[ 4] 。对麻花艽中
龙胆苦苷及獐牙菜中獐牙菜苦苷的含量测定方法较多[ 5-6] ,
但对麻花艽中獐牙菜苦苷的测定方法较少。该研究优化了
HPLC法测定麻花艽中獐牙菜苦苷含量测定的方法 ,测定了
青海不同产地麻花艽中獐牙菜苦苷的含量 ,对评价药材质量
及新药源的研究均有重要意义。
1　材料与方法
1.1　仪器　Agilent1100 高效液相色谱仪(配置:手动进样
器 ,在线脱气机 ,高压二元梯度泵 ,恒温柱温箱 ,DAD检测器 、
Agilent1100色谱工作站);Kromasil C18(250 mm×4.6mm ,5μm)
色谱柱;KQ3200超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);
SZ-97自动三重纯水整流器(上海亚荣生化仪器厂)。
1.2　试剂与材料　甲醇:高效液相色谱专用试剂(山东禹王
实业有限公司禹城化工厂),水:自制三重蒸馏水 ,磷酸:AR
级(北京红星化工厂)。
獐牙菜苦苷对照品由青海民族学院药学系林鹏程教授
提供 ,经归一化法检测 ,纯度大于 98%。
1.3　样品采集　麻花艽于 2004年 8月采自青海省境内 ,由
青海民族学院药学系林鹏程教授鉴定 ,阴干粉碎后过 80目
筛 ,冷藏保存。
1.4　溶液配置
1.4.1　对照品溶液的配置。精密称取獐牙菜苦苷对照品
4.39mg置 1ml容量瓶中 ,以甲醇溶解并定容 ,配置成相应浓
度的对照品储备液 ,使用时稀释成所需浓度 。
1.4.2　样品溶液的配置。精密称取 0.5 g样品 ,加 10 ml
60%甲醇超声 60 min ,过滤 ,滤渣重复提取 2次 ,合并滤液 ,浓
缩后定容至 25 ml ,过 0.45μm 滤膜 ,在选定色谱条件下测定
峰面积。
1.5　色谱条件　使用Kromasil C18(250 mm×4.6 mm , 5μm)色
谱柱 ,在流动相为 26%甲醇/水溶液(含 0.04%H3PO4),流速 1
ml/min ,柱温 30 ℃,检测波长 240 nm的条件下测定獐牙菜苦
苷含量 ,獐牙菜苦苷在 14 min内与其他成分达到基线分离。
2　结果与分析
2.1　系统适应性试验
2.1.1　线性关系考察。精密量取对照品储备液 ,以甲醇稀
释后 ,分别进样 10 μl ,以峰面积的积分值为纵坐标 ,以绝对进
样量为横坐标绘制标准曲线 ,得回归方程为
A=670.02 x+23.04 (1)
其相关系数 r =0.999 8 ,线性范围为 0.009 5 ～ 2.900 0
μg/10 μl。
2.1.2　检测限。在选定的色谱条件下 ,以 4.39 mg/ml的獐
牙菜对照品溶液逐级稀释 ,每次进样 5μl ,当信噪比 S/N=3
时 ,测得最低检测限为 0.56 ng。
2.1.3　精密度试验。取浓度为 0.043 9 mg/ml獐牙菜苦苷对
照品溶液 ,在选定的色谱条件下测定色谱峰的峰面积 ,计算
得 RSD 为 0.90%(n=6),表明仪器精密度良好。
2.1.4　重复性试验。精密称取麻花艽干粉 0.5 g共 5份 ,按
“1.4.2”项下方法操作 ,在选定色谱条件下 ,测定獐牙菜苦苷
的含量 ,计算得 RSD 为 1.4%(n =5),表明方法的重复性
良好 。
2.1.5　稳定性试验。精密称取麻花艽干粉 0.5g ,按“1.4.2”
项下方法操作 ,在选定色谱条件下 ,分别在 0、2、4、6 、8 h 进
样 ,测定獐牙菜苦苷的峰面积 ,计算得 RSD 为 1.4%(n =5),
表明样品溶液在 8 h内稳定 。
安徽农业科学, Journal of Anhui Agri.Sci.2008, 36(24):10522-10523　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　张彩丽　责任校对　马君叶
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.24.140
图 1　獐牙菜苦苷对照品(A)及样品(B)色谱图
Fig.1　Chromatogram of the swertisin standard(A)and the sample(B)
2.1.6　回收试验。精密称取麻花艽样品 0.05 g 3份 ,各添加
獐牙菜苦苷 0.022 mg/ml溶液 0.8 ml ,按“1.4.2”项下方法操
作 ,测得獐牙菜苦苷的平均回收率(n=3)为 99.5%,RSD 为
3.2%。
2.2　獐牙菜苦苷含量测定结果　精密称取 0.5 g样品 ,按
“1.4.2”方法操作 ,在给定色谱条件下分析 ,经DAD检测器检
测待测组分的峰纯度 ,紫外光谱与对照品一致后 ,外标法定
量 ,测得青海省不同产地麻花艽样品中獐牙菜苦苷的含量见
表 1。
表1　青海不同地区麻花艽中獐牙菜苦苷含量
　　Table 1　Swertiamarin content in GentianastramineaMaxim.at differ-
ent areas of Qinghai
%
产地
Producing area
含量
Content
产地
Producing area
含量
Content
门源仙米林场 0.359 2 贵德 Guide 0.079 4
Menyuanxianmi forest farm 0.358 2 刚察 Gangcha 0.192 2
祁连 Qilian 0.443 4 泽库 Zeku 0.518 9
互助 Huzhu 0.396 7 大通 Datong 0.257 9
湟中 Huangzhong 0.118 5 门源 Menyuan 0.304 2
玉树 Yushu 0.351 9 海堰 Haiyan 0.318 2
果洛 Guoluo
2.3　不同提取方法对分析结果的影响
2.3.1　不同提取方法对獐牙菜苦苷提取率的影响。精密称
取9份麻花艽样品 ,每份 0.5 g ,用甲醇热回流 2 h ,超声 20
min ,冷浸 24 h ,分别测定不同提取法下獐牙菜苦苷的含量 ,结
果发现 ,超声提取方法提取时间短 ,提取率最高 ,因此该试验
选用超声提取法。
2.3.2　不同提取溶剂对獐牙菜苦苷提取率的影响。精密称
取 9份麻花艽样品 ,每份 0.5 g ,分别用甲醇 、乙醇 、水超声提
取 20 min ,测定甲醇 、乙醇 、水对獐牙菜苦苷提取率的影响 ,结
果发现 ,甲醇提取率最高 ,故选用甲醇为提取溶剂 。
2.3.3　不同甲醇浓度对獐牙菜苦苷提取率的影响 。精密称
取 12份麻花艽样品 ,每份 0.5 g ,分别用 40%、60%、80%、
100%的甲醇水溶液超声提取 20 min ,测定不同浓度甲醇对獐
牙菜苦苷提取率的影响 ,结果发现 , 60%甲醇提取率最高 ,故
选用 60%甲醇为提取溶剂。
2.3.4　检测波长的确定。利用 DAD检测器在 200～ 400 nm
扫描獐牙菜苦苷吸收光谱 ,獐牙菜苦苷在 240 nm处有较高的
吸收 ,选择 240 nm为检测波长。
2.3.5　流动相的选择。试验中 ,当流速为 1 ml/min时 ,以
26%甲醇水溶液(含 0.04%H3PO4)为流动相等度梯洗脱 ,柱
温 30 ℃,獐牙菜苦苷与其他组分在 12 min内达到基线分离 ,
水中加入 0.04%的磷酸 ,可抑制上述成分的拖尾 。
3　结论
该研究所建立方法具有提取完全 ,分析方法简便 、快速 ,
结果准确 、可靠等特点 ,对全面评价麻花艽的质量有重要的
参考价值。青海不同地区麻花艽中獐牙菜苦苷含量有较明
显的差异 ,其中以泽库县产麻花艽中獐牙菜苦苷含量最高 ,
贵德县麻花艽中含量最低 。
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