全 文 ：螃蟹甲提取物体外抗葡萄球菌作用研究
杜宝中　甭多　白玛玉珍　王聚乐
(西藏大学医学院 ,西藏　拉萨　850002)
摘　要:目的:观察不同产地螃蟹甲干燥块根水 、乙醇提取物体外葡萄球菌抗菌活性。方法:以微量稀释
法测定拉萨地区及林芝地区产螃蟹甲干燥块根水 、乙醇提取物对 45株葡萄球菌临床分离株及标准菌株
A TCC27853的 M IC 、M IC50M IC90及 MBC ,并计算其累积抑菌率。结果:拉萨产和林芝产螃蟹甲水 、
乙醇提取物在体外对金黄色葡萄球菌标准菌株 A TCC25923以及 45株葡萄球菌临床分离株均有明显
的抗菌作用。但不同产地提取物抗菌作用存在一定差异 ,拉萨产螃蟹甲提取物体外抗菌作用优于林芝
产螃蟹甲 ,且同一产地药材乙醇提取物抗菌作用优于水提取物 。结论:藏药螃蟹甲干燥块根水 、乙醇提
取物对葡萄球菌具有明显抗菌作用。
关键词:螃蟹甲　提取物　葡萄球菌　体外抗菌试验
　　螃蟹甲为唇形科(Labiatae)糙苏属(Phlomis)植
物螃蟹甲(Phlomis y ounghusbandii Mukerjee.)的干
燥块根 ,藏语称“露木尔” ,为藏医习用药材 。民族医药
理论认为其具有清热消肿 、止咳祛痰之功效 ,被广泛用
于治疗感冒 、咳嗽 、疮疥肿毒 、肺炎 、支气管炎等疾病 。
我们前期实验显示螃蟹甲水 、乙醇提取物在体外对铜
绿假单胞菌具有明显的抗菌作用 。为了进一步观察其
体外抗菌作用 ,我们用其水 、乙醇提取物进行了体外抗
葡萄球菌抗菌活性的测定 ,同时比较了不同产地螃蟹
甲体外对葡萄球菌的抗菌作用 ,现报告如下:
1　材料及主要设备
1.1　实验材料
1.1.1　实验药材 。拉萨产及林芝产唇形科糙苏属植
物螃蟹甲的干燥块根由西藏大学医学院药学系鉴定
提供。
1.1.2　实验菌株 。标准菌株 ATCC25923(金黄色葡
萄球菌)购自卫生部临床检验中心临床微生物实验室 。
45株葡萄球菌临床分离株 ,分离自拉萨市各临床医
院 ,据《全国临床检验操作规程》(第三版)手工鉴定。
1.1.3　培养基及培养板。MH 肉汤培养基 、MH 琼
脂培养基及营养琼脂(OXOID)、96孔组织细胞培养板
(Co rning)。
1.1.4　菌量定量比浊液。据文献方法配制使用 。
1.2　主要实验设备
恒温培养箱 、恒温干燥箱 、超净工作台 、高压蒸汽
灭菌器 、723-可见光分光光度计 、OXOID 菌量浊度
计 、微量加样器(Gilson)、蜗旋振荡器。
2　方法
2.1　螃蟹甲水 、乙醇提取物的制备
拉萨及林芝地区藏药螃蟹甲块根生药常规方法制
备其水 、乙醇提取物 ,水提取物 80℃干燥品粉碎至粉
末状备用;乙醇提取物 60℃干燥粉碎至粉末状备用 。
不同产地药物制备所用生药量 、制备条件及干燥条件
一致。
2.2　抗菌实验
2.2.1　实验药物的制备。取不同产地螃蟹甲水 、乙醇
干燥提取物各 10g ,加入无菌适量蒸馏水 ,水浴加热完
全溶解 ,趁热精确测量其体积计算溶液药物浓度 ,作为
原液使用。取各药物原液以无菌蒸馏水 1∶2稀释 ,稀
释液用 0.22μm 一次性无菌滤器过滤除菌 ,滤液以无
菌 MH 肉汤培养基 2 倍稀释至 1∶054 ,共 10 个稀释
度备用 。
2.2.2　实验菌液的准备 。取标准菌株 ATCC25923
及葡萄球菌临床分离株斜面保存物划线接种于营养琼
脂平板 ,37℃培养 18h ～ 24h 。无菌挑取 4 ～ 8 个单菌
落或适量菌苔混悬于 4ml无菌生理盐水中 ,蜗旋振荡
器上震荡 15s ,以 0.5麦氏比浊标准液为参照 ,以浊度
计比浊 ,通过在菌液中加入生理盐水或菌落调整其浊
度为 0.5麦氏比浊单位 ,然后以无菌 MH 肉汤 1∶100
稀释备用 ,制备好的菌液 15分钟内接种完毕。
2.2.3　实验菌 M IC 测定 。取 2.2.1中制备之实验药
液加入 96 孔组织细胞培养板 ,各稀释度药液 100μl/
孔 ,然后加入 2.2.1中制备之实验菌液100μl/孔 ,每板
设各稀释度药物阳性对照(药液 100μl/孔加入无菌
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动植物研究　　　　　　　　　　　　　　　　　　《西藏科技》2011年 4期(总第 217期)
MH 肉汤培养基 100μl/孔)、阴性对照(无菌 MH 肉汤
培养基 100μl/孔加入实验菌液 100μl/孔)以及空白对
照(200μl无菌 MH 肉汤培养基/孔)。接种完毕之实
验培养板震荡混匀15秒 ,然后置湿盒中 37℃培养 18h
～ 24h ,观察各孔接种菌生长情况 。以无菌生长的药
物最高稀释度为实验菌之 M IC 。
2.2.4　实验菌 MBC测定。据文献 ,取 2.2.3中 37℃
培养 18h ～ 24h后无菌生长各孔孔液 10μl点种于不含
实验药物的 MH 琼脂平板 ,点种平板室温放置待平板
表面液体干燥后置 37℃培养 18h ～ 24h ,观察点种液细
菌生长情况。以无菌生长的药物最高稀释度为实验菌
之 MBC 。
3　结果
拉萨产和林芝产螃蟹甲水 、乙醇提取物对金黄色
葡萄球菌标准菌株 A TCC25923 以及 45株葡萄球菌
临床分离株的体外抗菌作用 M IC 、M IC50 、M IC90 、
MBC 及累积抑菌率结果见表 1至表 6 。从表中结果
可见拉萨产和林芝产螃蟹甲水 、乙醇提取物在体外对
金黄色葡萄球菌标准菌株 A TCC25923 以及 45 株葡
萄球菌临床分离株均有明显的抗菌作用。但不同产地
提取物抗菌作用存在一定差异 ,拉萨产螃蟹甲提取物
体外抗菌作用优于林芝产提取物 ,且同一产地药材乙
醇提取物抗菌作用优于水提取物 。
　　表 1 拉萨产螃蟹甲水 、乙醇提取物对标准菌株及葡萄球菌临床分离株抗菌菌作用 MIC 及 MBC(mg/ml)
菌　种 菌株数 MIC MIC50 MIC90 MBC水提物 醇提物 水提物 醇提物 水提物 醇提物 水提物 醇提物
ATCC25923 1 20.83 1.55 — — — — 41.67 1.55
葡萄球菌 45 83.33～ 2.6024.84～ 0.39 10.42 1.55 83.33 12.42 83.33～ 5.2149.69 ～ 0.78
　　注:表中“ —” ,无数据。
表 2 林芝产螃蟹甲水 、乙醇提取物对标准菌株及葡萄球菌临床分离株抗菌菌作用及 MBC(mg/ ml)
菌　种 菌株数 MIC MIC50 MIC90 MBC水提物 醇提物 水提物 醇提物 水提物 醇提物 水提物 醇提物
ATCC25923 1 18.06 3.52 — — — — 36.11 3.52
葡萄球菌 45 72.22～ 2.2656.39～ 1.76 4.51 3.52 36.11 28.20 72.22～ 4.51 112.78～ 3.52
　　注:表中“ —” ,无数据。
表 3 拉萨地区产螃蟹甲水提取物对葡萄球菌临床分离株的累积抑菌率(%)
M IC
(mg/ ml) 166.67 83.33 41.67 20.83 10.42 5.21 2.60 1.30 0.65 0.33
生长受抑
菌株数 45 45 42 37 34 12 5 0 0 0
抑制率(%) 100 100.00 93.33 82.22 75.56 26.67 11.11 0 0 0
　　表 4 拉萨地区产螃蟹甲醇提取物对葡萄球菌临床分离株的累积抑菌率(%)
M IC
(mg/ ml) 49.69 24.84 12.42 6.21 3.11 1.55 0.78 0.39 0.19 0.10
生长受抑
菌株数 45 45 43 35 35 30 17 12 0 0
抑制率(%) 100 100 95.56 77.78 77.78 66.67 37.78 26.67 0 0
　　表 5 林芝地区产螃蟹甲水提取物对葡萄球菌临床分离株的累积抑菌率(%)
M IC
(mg/ ml) 144.44 72.22 36.11 18.06 9.03 4.51 2.26 1.13 0.56 0.28
生长受抑
菌株数 45 45 43 36 33 17 7 0 0 0
抑制率(%) 100 100 95.56 80.00 73.33 37.78 15.56 0 0 0
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《西藏科技》2011年 4期(总第 217期)　　　　　　　　　　　　　　　　　　动植物研究
　　表 6 林芝地区产螃蟹甲醇提取物对葡萄球菌临床分离株的累积抑菌率(%)
M IC
(mg/ ml) 112.78 56.39 28.20 14.10 7.05 3.52 1.76 0.88 0.44 0.22
生长受抑
菌株数 45 45 41 37 35 30 9 0 0 0
抑制率(%) 100 100 91.11 82.22 77.78 66.67 20.00 0 0 0
4　讨论
藏药是祖国医药宝库中的珍贵财富之一 ,传统习
用藏药中有许多药具有治疗细菌性感染性疾病的功
效 ,螃蟹甲就是其中之一。传统藏医药理论及藏医实
践证实藏药螃蟹甲具有抗感冒 、咳嗽 、肺炎及支气管炎
等功效 。我们前期实验显示螃蟹甲水 、乙醇提取物在
体外对铜绿假单胞菌标准菌株 A TCC27853及耐亚胺
培南临床分离株具有明显的抗菌作用。在该实验中 ,
我们采用传统方法制备不同产地螃蟹甲干燥块根的
水 、乙醇提取物 ,经体外抗菌实验表明:不同产地螃蟹
甲块根水 、乙醇提取物对金黄色葡萄球菌标准菌株
A TCC25923及 45株葡萄球菌临床分离株均具有显著
地抗菌作用 ,进一步证实了螃蟹甲的抗菌作用。该实
验显示螃蟹甲水提取物抗菌活性较醇提取物稍差 ,其
原因可能为螃蟹甲抗菌活性成分主要存在于醇提取物
之故。
药材产地与药物质量和疗效有着直接关系 。由于
不同地区的土壤 、水质 、气候 、雨量等自然条件不同 ,而
这些因素都能影响药用植物生长 、开花 、结果等一系列
生态过程。因此 ,不同产地的同一植物所含有效成分
不完全相同 ,从而使药理作用有别 ,临床疗效存在一定
的差异 。这可能是在我们实验中拉萨产螃蟹甲提取物
优于林芝产提取物的原因。
参考文献
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活性比较研究.时珍国医国药 ,2004 , 15(8):475-476.
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研究.时珍国医国药 ,2005 , 16(1):6-7.
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卫生部 ,2000 ,5:4.
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国卫生部医政司 , 2006.905-911.
〔5〕　张菲菲 ,何永红 ,等.甘草水煎剂对变异链球菌生
长和产酸影响的体外研究.华西口腔医学杂志 , 2009 ,
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用研究.西藏大学学报(自然科学版), 2010 , 25(1):22
-25.
编校　白玛普赤
(上接 73页)
从表 1可以看出:野生鱼腥草含水量高 ,这是其食
用口感非常脆的主要鱼原因 ,可能与其林下生境有密
切关系;蛋白质和 vC 含量低于栽培种类;P 、Fe 和 Ca
含量比惠丽娟等报道的高很多倍;N 含量较低 ,而 K
含量高;微量元素中 B 最高 ,Cu 含量远远超出我国无
公害蔬菜规定的 10.000mg/kg 标准 , Cd含量超出我
国食品规定的重金属含量 0.05mg/kg 的标准 ,其它微
量元素都比较低。
5　讨论
鱼腥草作物野生蔬菜和药用植物 ,具有很高的开
发利用价值 ,但是其具有野生蔬菜的共性 ,即对某些环
境污染物如重金属的蓄积能力。我们的研究发现 ,野
生鱼腥草中 Cu和 Cd含量相当高 ,这成为其作物野生
蔬菜大规模开发利用的障碍之一 。这可能在于其自身
对重金属具有相当高的富集能力 ,同时也说明土壤环
境中这两类重金属含量相当高。因此 ,要对其进行开
发使之成为受人们青睐的野菜 ,则需要对其安全性进
行进一步的评价。而人工栽培时 ,通过对土壤的改良
可是土壤环境中的重金属含量大大减少 ,从而有效减
少其自身的重金属含量 ,使之成为人们饭桌上真正安
全 、美味 、高营养的食品 。
参考文献(略)
编校　白玛普赤
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