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罗勒不同提取物对 3种实验性血栓形成模型的影响
周文婷 1 ,依把代提·托合提 1 ,田树革2 ,何志琴 1 ,艾尼瓦尔 ·吾买尔 1＊
(新疆医科大学 1.药学院药理教研室;2.中医学院实验中心 ,新疆 乌鲁木齐 830054)
　　摘要　目的:通过 3种不同的动物体内血栓形成模型 ,考察罗勒不同提取物对血栓形成的影响 ,比较不同极性
活性组分作用差别 , 进而探讨其有效作用成分类型及筛选最佳提取工艺。 方法:采用小鼠肺血栓模型 、FeCl3诱导
大鼠颈动脉血栓模型及大鼠下腔静脉血栓模型 3种实验性血栓模型 ,考察罗勒不同提取物的抗血栓形成作用。结
果:罗勒不同提取物均可提高胶原蛋白-肾上腺素混合诱导剂所致肺血栓小鼠的存活率 , 延长 FeCl3诱导大鼠颈动
脉血栓形成时间 , 并减轻血栓湿质量 ,减轻结扎法所致下腔静脉血栓湿质量 ,且其中以乙醇为溶剂采用超声波提取
法的罗勒提取物效果最为显著。结论:罗勒提取物有显著的抗血栓作用 , 其主要有效组分可能为某些极性较小的
脂溶性黄酮类成分。
关键词　罗勒提取物;血栓;提取方法
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2010)12-1922-04
收稿日期:2010-01-25基金项目:自治区高校科研计划(XJEDU2006130)作者简介:周文婷(1983-),女,在读硕士研究生 ,主要从事心血管药理研究;Tel:15899168882, E-mail:sherry zwt@126.com。＊通讯作者:艾尼瓦尔·吾买尔 , Tel:0991-24362421。
　　罗勒是维吾尔医应用历史悠久的常用药材之
一 ,是唇形科罗勒属植物罗勒 (Ocimumbasilicum
L.)的地上部分 〔1〕。罗勒是维吾尔医用于心脑血管
疾病的首选药材之一 ,具有治疗心肌梗塞及腹泻 、抗
肿瘤等作用 〔2-4〕。现代化学研究表明 ,罗勒全草的主
要成分为挥发油 、黄酮类 、香豆素类 、甾体化合物等 ,
其中挥发油含量最大〔5, 6〕。黄酮类化合物的主要提
取方法是有机溶剂提取法 ,用超声波法提取黄酮类
物质 ,是目前比较新的方法 〔7〕。本研究中 ,笔者以
水或 70%乙醇为溶剂 ,采用超声波提取法以及传统
的温浸提取法提取罗勒全草的有效成分 ,并通过 3
种不同的动物血栓模型观察各提取物对血栓形成的
影响 ,旨在筛选更加合适的提取方法并为进一步确
定其有效组分提供一定依据。
1　材料与仪器
1.1　实验动物　KM小鼠 、清洁级 Wistar大鼠 ,购
自新疆医科大学实验动物中心 ,许可证号:SCXK
(新)2003-0001。
1.2　药物与试剂 　阿司匹林 (Sigma公司进口分
装)、银杏叶片 (深圳海王药业有限公司 , 批号:
Z20027956)、胶原蛋白(Sigma公司进口分装);盐酸
肾上腺素注射液(天津药业集团新郑股份有限公
司 ,批号:071101);FeCl3为国产分析纯 ,配成 70%
水溶液。罗勒药材产地为新疆托克逊县 ,经新疆医
科大学帕丽达 ·阿不力孜教授鉴定为唇形科罗勒属
植物罗勒(OcimumbasilicumL.)的干燥地上部分。
1.3　主要仪器　超声波清洗仪(上海科导超声仪
器有限公司 , SK2200H);冷冻干燥机 (北京博医康
实验仪器有限公司 , FD-1);半导体点式温度计(厦
门中村电子仪器厂 , Model706);全自动酶标仪
(BECKMANCOULTERAD340)。
2　方法
2.1　药材提取
2.1.1　罗勒水提物(温浸法):罗勒地上部分粉碎
后加 10倍量蒸馏水 ,置 60 ℃恒温水浴锅浸泡 3 h
后过滤 ,残渣再加 10倍量蒸馏水 ,共提取 3次 ,合并
滤液 ,减压浓缩至浸膏状置 -70 ℃冷藏 12 h,取出
后放入冷冻干燥机 , 24 h后得罗勒水提物的固体粉
末。
2.1.2　罗勒水提物(超声波提取法):罗勒地上部
分粉碎后用 10倍量蒸馏水(60 ～ 70 ℃)浸泡 1 h,以
频率 25 Hz的超声波处理 30 min后过滤 ,残渣再加
·1922· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 33卷第 12期 2010年 12月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2010.12.033
10倍量蒸馏水(60 ～ 70 ℃)超声处理 30 min,过滤 ,
合并 2次滤液 ,减压浓缩至浸膏状置 -70 ℃冷藏 12
h,取出后放入冷冻干燥机 , 24 h后得罗勒水提物的
固体粉末。
2.1.3　罗勒醇提物(温浸法):罗勒地上部分粉碎
后加 10倍量 70%乙醇溶液 ,置 60 ℃恒温水浴锅浸
泡 3 h后过滤 ,残渣再加 10倍量 70%乙醇溶液 ,共
提取 3次 ,合并滤液 ,减压浓缩至浸膏状置 -70 ℃
冷藏 12 h,取出后放入冷冻干燥机 , 24 h后得罗勒水
提物的固体粉末 。
2.1.4　罗勒醇提物(超声波提取法):罗勒地上部
分粉碎后用 10倍量 70%乙醇溶液(常温)浸泡 1 h,
以频率 25 Hz的超声波处理 30 min后过滤 ,残渣再
加 10倍量 70%乙醇溶液(常温)超声处理 30 min,
过滤 ,合并 2次滤液 ,减压浓缩至浸膏状置 -70 ℃
冷藏 12 h,取出后放入冷冻干燥机 , 24 h后得罗勒乙
醇提取物的固体粉末 。实验时罗勒提取物固体粉末
加蒸馏水溶解至所需浓度(醇提物用超声助溶)。
2.2　小鼠肺血栓实验　取小鼠 140只 ,体质量 18
～ 22 g,雌雄各半 ,随机分成 7组 ,即:模型组(生理
盐水)、阿司匹林组 (5 mg/kg)、银杏叶片组(120
mg/kg),罗勒水提物(温浸法)组(400 mg/kg),罗勒
水提物(超声波提取法)组(400 mg/kg)、罗勒醇提
物(温浸法)组(400 mg/kg),罗勒醇提物(超声波提
取法)组(400 mg/kg),每组 20只 。小鼠分别灌胃
给药 15 d, 1次 /d,给药体积为 10 mL/kg末次给药 2
h后 ,参照 Diminno等的方法 〔8〕 ,尾静脉注射胶原蛋
白(10 mg/kg)与肾上腺素(1 mg/kg)混合诱导剂 ,
模型组注射生理盐水 ,观察 5 min内小鼠死亡数 ,计
算小鼠存活率。
2.3　FeCl3诱导大鼠颈动脉血栓实验　取雄性大
鼠 80只 ,随机分成 8组 ,即:假手术组(生理盐水)、
模型组(生理盐水)、阿司匹林组(5 mg/kg)、银杏叶
片组(120 mg/kg), 罗勒水提物 (温浸法)组 (400
mg/kg),罗勒水提物(超声波提取法)组 (400 mg/
kg)、罗勒醇提物(温浸法)组(400 mg/kg),罗勒醇
提物(超声波提取法)组(400 mg/kg),每组 10只 。
各组动物灌胃给药 15 d,每日给药 1次 ,给药体积为
1 mL/kg,末次给药 1 h后腹腔注射乌拉坦 (1.5 g/
kg)麻醉 ,参照 Kurz等 〔9〕的方法改良制作颈总动脉
血栓模型 ,分离左侧颈总动脉 2 cm,下方置小片塑
料薄膜(3 cm×1.5 cm),用于保护血管周围组织 ,
将吸有 70% FeCl3溶液的滤纸片 (1 cm×1 cm)敷
于暴露的动脉表面上 ,假手术组敷生理盐水滤纸片 ,
用半导体点式温度计监测动脉表面温度变化 ,记录
从敷上滤纸片开始计时 ,至温度突然下降的时间为
血栓形成时间(occlusiontime, OT),剪下血栓发生
部位的血管放于滤纸上吸干残血 ,以电子分析天平
测其质量 ,并计算血栓形成抑制率 。
血栓形成抑制率 /% =对照组血栓质量 -给药组血栓质量对照组血栓质量 ×100%
2.4　下腔静脉血栓实验　取雄性大鼠 70只 ,随机
分成 7组 ,即:模型组(生理盐水)、阿司匹林组 (5
mg/kg)、银杏叶片组(120 mg/kg),罗勒水提物(温
浸法)组(400 mg/kg),罗勒水提物(超声波提取法)
组(400 mg/kg)、罗勒醇提物 (温浸法)组(400 mg/
kg),罗勒醇提物(超声波提取法)组(400 mg/kg),
每组 10只。各组动物灌胃给药 15 d, 1次 /d,给药
体积为 10 mL/kg,末次给药 1 h后腹腔注射乌拉坦
(1.5 g/kg)麻醉 ,参照 Reyer等的方法〔10〕 ,沿大鼠腹
中线开腹腔 ,分离下腔静脉 ,于下腔静脉和左肾静脉
交叉下方用丝线结扎 ,缝合腹壁。 4 h后重新开腹
腔 ,用止血钳将距结扎处 2 cm的下腔静脉和与下腔
静脉连接的其他静脉侧枝夹住 ,剪取该段静脉 ,分离
出血管内血栓与滤纸上吸干残血 ,测其血栓质量 ,并
按上述公式计算血栓形成抑制率 。
2.5　统计学处理　各组数据均用 SPSS16.0统计
分析软件进行处理 ,其中小鼠肺血栓实验以 χ2检验
进行统计比较;其他各组数据以 x±s表示 ,以单因
素方差分析和 q检验进行统计比较 。
3　结果
3.1　罗勒提取物对小鼠肺血栓形成的影响　罗勒
提取物对由胶原蛋白和肾上腺素混合诱导剂引发的
肺血栓有一定的保护作用 ,其中罗勒水提物(超声
波法)组 、罗勒醇提物(温浸法和超声波法)组存活
率分别达到 50.0%、77.8%和 84.2%,与模型组(存
活率为 11.1%)比较可显著抑制小鼠的死亡 (P<
0.01),提高小鼠肺栓塞的存活率。结果见表 1。
　表 1 　罗勒提取物对小鼠肺栓塞的抑制作用
组别 n/只 死亡数 /只 存活率 /%
模型组 18 16/18 11.1
阿司匹林组 17 10/17 41.2＊
银杏叶片组 19 11/19 42.1＊
水提物(温浸法) 16 11/16 31.3
水提物(超声波法) 18 9/18 50.0＊＊
醇提物(温浸法) 18 4/18 77.8＊＊
醇提物(超声波法) 19 3/19 84.2＊＊
　　注:与对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01
3.2　罗勒提取物对 FeCl3诱导大鼠颈动脉血栓形
·1923·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 33卷第 12期 2010年 12月
成的影响　假手术组无血栓形成 ,对照组左侧颈总
动脉可见有闭塞性血栓形成。与模型组比较 ,罗勒
水提物(超声波法)组 、罗勒醇提物温浸法和超声波
法组均能显著延长血栓形成时间并降低血栓质量
(P<0.01), 其血栓形成抑制率分别为 36.0%、
46.7%和 52.9%。结果见表 2。
　　表 2　 罗勒提取物对 FeCl3诱导大鼠颈总动脉血栓形成时间及质量的影响( x±s)
组别 n/只 血栓形成时间 /s 血栓质量 /mg 血栓形成抑制率 /%
假手术组 10 - - -
模型组 9 531.3±88.3 10.52±1.29 -
阿司匹林组 10 777.4±66.1＊ 6.84±2.03＊＊ 35.0
银杏叶片组 10 831.7±108.7＊＊ 6.29±1.68＊＊ 40.2
水提物(温浸法) 9 639.7±52.8 7.49±1.05＊ 28.8
水提物(超声波法) 10 816.5±93.2＊＊ 6.73±1.18＊＊ 36.0
醇提物(温浸法) 10 976.8±163.4＊＊ 5.61±1.07＊＊ 46.7
醇提物(超声波法) 10 1083.6±128.9＊＊ 4.96±0.93＊＊ 52.9
　　注:与对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊ P<0.01
3.3　罗勒提取物对大鼠下腔静脉血栓形成的影响
　与生理盐水对照组比较 ,罗勒水提物(超声波法)
组能减少结扎所致大鼠下腔静脉血栓质量 (P<
0.05),罗勒醇提物(温浸法和超声波法)组能显著
减少结扎所致大鼠下腔静脉血栓质量(P<0.01),
其血栓形成抑制率 分别为 14.6%、 27.5%和
28.2%。结果见表 3。
　表 3　　　　　罗勒提取物对实验性大鼠下腔
静脉血栓形成的影响( x±s)
组别 n/只 血栓质量 /mg 血栓抑制率 /%
模型组 10 6.80±0.57 -
阿司匹林组 10 5.40±0.72＊＊ 20.6
银杏叶片组 10 5.14±0.62＊＊ 24.4
水提物(温浸法) 9 6.04±0.57 11.2
水提物(超声波法) 10 5.81±0.39＊ 14.6
醇提物(温浸法) 10 4.93±0.30＊＊ 27.5
醇提物(超声波法) 10 4.88±0.48＊＊ 28.2
　　注:与对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊ P<0.01
4　讨论
罗勒是维吾尔医应用历史悠久的常用药材之
一 ,作为传统的中草药 ,将其叶片用水浸泡当茶饮 ,
能够促进食欲 ,帮助消化 ,并治疗反胃 、呕吐 。临床
应用证实其抗血栓作用的疗效 ,且不良反应少 〔11〕 ,
并且具有较高的胃肠道安全性 〔12〕。
用超声波法提取黄酮类物质 ,其原理主要是利
用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的
浸出提取 。另外 ,还利用其次效应 ,如机械振动 ,扩
散 ,击碎等 ,使其加速被提取成份的扩散 ,释放 。超
声波提取法大大缩短了提取时间 ,提高了有效成分
的提取率 、原料的利用率 。超声波提取无需加热 ,对
有效成分具有保护作用 〔7〕。
本研究发现罗勒用不同的提取方法 ,其抗血栓
的作用有所不同 ,醇提物具有较明显的抗血栓作用 ,
而水提物作用不如醇提物强 。分析其原因 ,可能是
因为醇提物多含有极性相对较小的化学成分 ,而极
性较大的化学成分 ,如糖类等 ,则多存在于水提物
中。此结果提示 ,罗勒抗血栓作用的物质基础可能
为脂溶性较高的黄酮类化学成分 ,这与临床上多以
药材全粉入药 ,而少用煎煮是一致的 。故本实验结
果有助于确定罗勒抗血栓活性组分及其有效提取方
法。
参 考 文 献
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荔枝核及其含药血清的抗肿瘤作用研究
陈泳晖1 ,肖柳英 2 ,潘竞锵 2 ,吕俊华3
(1.广州市番禺区中医院 ,广东 广州 511400;2.广州市中医医院 /中医中药研究所 ,广东 广州 510130;
3.曁南大学药学院药理研究室 ,广东 广州 510632)
　　摘要　目的:研究不同剂型荔枝核含药血清的抗肿瘤作用。方法:采用小鼠腋下接种瘤株的方法 ,建立 EAC、
S180及肝癌荷瘤小鼠动物模型;小鼠 EAC、S180细胞与肝癌细胞混悬液用生理盐水按 1∶1进行稀释制成含瘤腹水混
悬液 ,在给药前 24h,每只小鼠腋窝皮下接种 0.2 mL/只。整个操作应在无菌条件下 60min内完成。荔枝核对小鼠
EAC、S180 、肝癌的抑瘤实验连续给药 10 d。结果:荔枝核水提物和荔枝核颗粒剂能明显抑制 EAC、S180肿瘤和肝癌肿
瘤的生长(P<0.01);结论:荔枝核水提物和荔枝核颗粒剂有抑制小鼠 EAC、S
180
、肝癌的作用;在体内 、外均能抑制
小鼠 S180 、EAC细胞生长;促进肿瘤细胞增殖和凋亡。
关键词　荔枝核;S180;EAC;抑瘤作用;凋亡
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2010)12-1925-05
收稿日期:2009-10-09基金项目:广州市中西医药科研课题资助项目(2003A026);广州市中西医结合课题(2006A15)作者简介:陈泳晖(1970-),女,主管药师 ,主要从事药理学研究;Tel:020-84822332。
　　荔枝核为无患子科植物荔枝 (Litchichinensis
Sonn.)的干燥成熟种子。夏季采摘成熟果实 ,除去
果皮及肉质假种皮 ,洗净 ,晒干。性味甘 ,微苦 ,温 ,
归肝 、肾经。具行气散结 ,祛寒止痛等功效。主寒
疝 ,腹痛 ,睾丸肿痛 〔1〕。现代研究表明荔枝核具有
多方面的药理作用 ,如降糖 、调血脂 、保肝以及抗氧
化等〔2, 3〕。本实验采用血清药理学的方法 ,对不同
剂型荔枝核的含药血清抗肿瘤细胞增殖和凋亡的活
性进行测定 ,为其在保健食品 、药品领域中的开发利
用提供理论依据 。
1　材料与仪器
1.1　实验动物　NIH小鼠 ,体质量 20 ～ 22 g,雌雄
各半 ,购自广东省医学实验动物中心 ,合格证号:粤
监证字 2007A004, 生产许可证:SCXK(粤 )2003-
0002;本实验室实验环境设施合格证号为粤检证
2005C0033;新西兰兔(普通级 ,体质量约 1.5 kg)由
广东省实验动物中心提供 (合格证号:粤监证字
2006A001)。
1.2　荔枝核水提物　荔枝核产自花都市花东镇九
一村王木海荔枝园 ,经广东省农科院果树所荔枝核
研究室专家鉴定。取荔枝核洗净 ,破核后投料 ,加水
煎煮 2次 ,第 1次加药材用 8倍的水 ,煎煮 2 h,第 2
次加药材用 7倍的水 ,煎煮 2 h,合并滤液 ,过滤 ,滤
液减压浓缩至密度为 1.25 ～ 1.30(60 ～ 65 ℃)的浸
膏 ,检验合格 。取以上浸膏 、药用糊精混匀制备 ,过
12目筛网制粒 ,烘干 ,颗粒检验合格后分装 , 10 g/包
(由广东一方制药有限公司制备)。
1.3　荔枝核颗粒剂　颗粒∶生药为 1∶10,广东一方
制药有限公司生产 ,批号:0604229。
1.4　HepG2细胞　由中山大学医学院实验动物中
心提供。
1.5　瘤株　EAC、S180和肝癌瘤株由中山大学肿瘤
研究所提供。
1.6　试剂　RPIM-1640培养液(GIBCO);新生牛
血清(杭州四季青生物工程材料有限公司);胰蛋白
酶液(BIFCO);四甲基偶氮唑盐(MTT, SIGMA);二
·1925·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 33卷第 12期 2010年 12月