全 文 ：2013 年 6 月 第 15 卷 第 6 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Jun. 2013 Vol. 15 No. 6
△ ［基金项目］ 中国医学科学院北京协和医学院青年科研基金项目(XHYN-01) ，中央级公益性科研院所基本科研业务专项
(YZYN-11-03) ，云南省科技重大项目———傣药南药特色资源评价及保育技术研究(2008IF018)
* ［通讯作者］ 李光，Tel: (0691)2136981，E-mail:lhbg311@ hotmail. com
不同产地肾茶 HPLC指纹图谱研究
△
李光1，2* ，陈曦1，3，李宜航1，2，李学兰1，2
(1. 中国医学科学院 药用植物研究所 云南分所，云南 景洪 666100;
2. 西双版纳州傣药南药重点实验室，云南 景洪 666100;
3. 中国医学科学院 药用植物研究所，北京 100193)
［摘要］ 目的:建立肾茶药材的 HPLC 指纹图谱分析方法。方法:采用 Waters ODS 柱(150 mm × 4. 6 mm，
5 μm) ，流动相为乙腈 －水(含 0. 1%的磷酸) ，梯度洗脱，检测波长为 205 nm，流速为 1 mL·min －1。采用《中药色
谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)版》，计算不同产地肾茶样品的 HPLC 指纹图谱的整体相似度。结果:共有 15
个共有峰，13 批被测样品的色谱指纹图谱与对照指纹图谱的整体相似度在 0. 908 ～ 0. 985。结论:该指纹图谱检测方
法简便、重现性好，可作为肾茶药材质量控制的重要方法。
［关键词］ 肾茶;指纹图谱;高效液相色谱
肾茶 Clerodendranthus spicatus(Thunb. )C. Y. Wu
又名猫须草，为唇形科肾茶属多年生草本植物，是
傣医药中常用的解药(排解人体内积蓄毒素的药物)
品种，也是傣医用于预防和治疗肾、膀胱、尿道疾
病的首选药材，在西双版纳地区广泛种植， 《贝叶
经》(傣医经典论著)中记载其可单方煎汤或开水
浸泡当茶饮，具有清热解毒，利水消肿，利尿化石，
养肾保肾，凉血止血等功能。近年来，随着国内外
学者深入研究，发现肾茶的药理作用不仅仅应用于
泌尿系统，同时具有抗炎［1］、降血糖血脂［2］、保
肝［3］、提高机体免疫力［4］等一系列药理活性，功效
作用明确。随着以肾茶为原料的保健产品及药品的
开发，原药材质量控制变得尤为重要，肾茶主产地
遍布广西、海南、云南、东南亚等地，同属种类较
多，简单来讲分为白花和紫花之分，西双版纳地区
使用品种为白花样品，也有报道临床紫花品种质量
优于白花品种，所以质量问题亟待解决。
在现阶段，指纹图谱技术是全面、整体地控制
中药质量最有效的方法。至目前，未曾见有关肾茶
指纹图谱方面的文献报道，为更有效地控制肾茶的
质量，实验参照文献［5］应用 RP-HPLC 方法，建立了
肾茶的 HPLC 指纹图谱分析方法，为其药材鉴别和
质量控制提供实验依据。
1 材料、试剂与仪器
1. 1 材料与试剂
肾茶样品的产地具体情况见表 1。迷迭香酸对
照品(批号:ZL20110523MDXS，南京泽朗医药科技
有限公司)。乙腈(色谱纯，美国 Fisher 公司) ，其
余试剂均为分析纯。
表 1 13 批肾茶药材的样品信息
编号 花色 产地
S1 白花 海南省万宁市兴隆镇药植所
S2 白花 云南省勐腊县勐伴乡
S3 紫花 云南省景洪市药植所
S4 紫花 云南省勐腊县勐仑植物园
S5 白花 云南省普洱江城县
S6 白花 云南省耿马县孟定镇
S7 紫花 云南省勐腊县勐仑镇
S8 紫花 福建省鼓浪屿亚热带植物引种园
S9 白花 广东省阳春市时尚区新东头村
S10 白花 云南省元江县东峨镇
S11 白花 广西省南宁市南药园
S12 白花 福建省鼓浪屿亚热带植物引种园
S13 紫花 海南省儋州市热带植物园
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DOI:10.13313/j.issn.1673-4890.2013.06.020
2013 年 6 月 第 15 卷 第 6 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Jun. 2013 Vol. 15 No. 6
1. 2 仪器
Waters 600 高效液相色谱仪配 Waters 2489 紫外
检测器，Empower 色谱工作站(美国沃特世公司) ;
菲罗门 ODS 柱(150 mm × 4. 6 mm，5 μm) ，超声提
取器(上海仪器制造厂，SK3200H) ，电子天平(德国
赛多利斯，CP-224S) ，超声清洗仪(宁波市海曙五
方超声设备有限公司，WF-500E) ，遗传性超纯水仪
(英国 ELGA公司，ULTRAGE MK2)。
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的配制
精密称取迷迭香酸对照品 3. 55 mg，置于 10 mL
量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得迷
迭香酸浓度均为 0. 355 mg·mL －1的对照品溶液。
2. 2 供试品溶液的配制
分别取肾茶粉末(过 60目筛)约 500 mg，精密称
定，置于 25 mL量瓶中，加入50%甲醇10 mL，在常温
下超声(250 W，40 kHz)提取 30 min，过滤，滤液蒸
干，加甲醇溶解定容至 10 mL，即得供试品溶液。进样
前取适量溶液用 0. 45 μm微孔滤膜过滤。
2. 3 色谱条件和系统适用性试验
色谱柱:菲罗门 ODS 柱(150 mm × 4. 6 mm，
5 μm) ，以乙腈–水(含 0. 1%磷酸)为流动相，梯
度洗脱(见表 2) ，流速:1 mL·min －1，柱温:40 ℃，
检测波长:205 nm。在上述色谱条件下，按迷迭香
酸峰计算理论板数不低于 4 000，与其他色谱峰的分
离度大于 1. 0。
表 2 梯度洗脱程序
时间 /min 乙腈 /% 含 0. 1%磷酸的水
0 5 95
3 5 95
8 25 75
18 32 68
23 32 68
33 50 50
35 80 20
45 80 20
2. 4 标准曲线制备
精密称取迷迭香酸对照品 8. 875 mg，置 25 mL
容量瓶中，水溶解定容，在 2. 3 项色谱条件下分别
进样 1，2，4，6，8，10 μL，以浓度为横坐标(X) ，
峰面积为纵坐标(Y) ，建立标准曲线，得到迷迭香
酸对照品的回归方程为 Y = 106X + 52 387， r =
0. 999 8，显示迷迭香酸在 0. 348 6 ～ 3. 486 μg 呈现
良好线性关系。
2. 5 精密度试验
取同一供试品溶液，连续进样 6 次，分别对共
有峰的保留时间和峰面积比值进行考察。结果表明，
各共有峰保留时间的 RSD ＜1. 9%，峰面积的 RSD ＜
2. 3%，表明仪器精密度良好。
2. 6 重复性试验
取同一批样品 6 份，精密称定，按 2. 2 项下方
法制备供试品溶液，分别进样测定各共有峰保留时
间的 RSD ＜ 1. 8%，峰面积的 RSD ＜ 3. 0%，表明实
验方法重现性良好。
2. 7 稳定性试验
取同一供试品溶液，室温放置，分别于 0，2，
4，8，16，24 h 进样，测定各共有峰保留时间的
RSD ＜1. 2%，峰面积的 RSD ＜ 2. 8%，说明样品稳
定性良好。
2. 8 肾茶药材指纹图谱建立
取肾茶药材(1 ～ 13 号样品) ，按 2. 2 项下方法
制备供试品溶液，各取 20 μL分别进样，进行 HPLC
分析;另取迷迭香酸对照品溶液按相同条件进行分
析，根据相对保留时间对样品图谱中色谱峰进行归
属，并以迷迭香酸色谱峰为参比峰，共得到 17 个共
有峰，结果如图 1 所示，将指纹图谱信号数据导入
2004A版相似度评价软件，生成共有模式即对照指
纹图谱，见图 2。
A. 迷迭香酸对照品;B. 肾茶
图 1 肾茶及对照品 HPLC指纹图谱
2. 8. 1 指纹图谱及共有指纹峰的标定 按照对照品
溶液和供试品溶液的制备方法制备样品溶液，并对
对照品(见图 1)和 13 个批次供试品的 HPLC图进行
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2013 年 6 月 第 15 卷 第 6 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Jun. 2013 Vol. 15 No. 6
检测。结果表明 1 ～ 17 号峰在 13 批次样品的色谱图
中均出现，以迷迭香酸为参照，即 11 号峰，计算共
有峰保留时间分别为 2. 956、12. 525、13. 577、
13. 978、 14. 295、 14. 696、 15. 665、 17. 234、
17. 802、 18. 303、 18. 678、 20. 290、 21. 226、
22. 695、23. 363、39. 045、40. 364、42. 334，共有
指纹峰峰面积之和占总峰面积比值均大于 90%，符
合《中药指纹图谱研究技术指南(试行)》的要求。
因此标定此 17 个峰为共有指纹峰，并据此建立了肾
茶的 HPLC指纹图谱，见图 2。
2. 8. 2 相似度比较 采用中药指纹图谱相似度评
价系统软件，对 13 批肾茶样品图谱进行相似度比
较。以生成对照指纹图谱为模板，13 批样品与对
图 2 13 批肾茶药材指纹图谱
照指纹图谱之间相似度为 0. 908 ～ 0. 985，见
表 3。
表 3 肾茶药材共有峰的相对保留时间
批号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 对照指纹图谱
S1 1 0. 952 0. 964 0. 931 0. 971 0. 899 0. 91 0. 931 0. 736 0. 917 0. 924 0. 907 0. 903 0. 951
S2 0. 952 1 0. 976 0. 953 0. 939 0. 898 0. 902 0. 912 0. 775 0. 925 0. 911 0. 888 0. 895 0. 944
S3 0. 964 0. 976 1 0. 961 0. 961 0. 923 0. 907 0. 945 0. 77 0. 92 0. 943 0. 918 0. 917 0. 962
S4 0. 931 0. 953 0. 961 1 0. 925 0. 893 0. 898 0. 909 0. 769 0. 907 0. 912 0. 86 0. 904 0. 938
S5 0. 971 0. 939 0. 961 0. 925 1 0. 939 0. 937 0. 959 0. 761 0. 928 0. 935 0. 923 0. 91 0. 964
S6 0. 899 0. 898 0. 923 0. 893 0. 939 1 0. 97 0. 966 0. 774 0. 914 0. 948 0. 934 0. 923 0. 958
S7 0. 91 0. 902 0. 907 0. 898 0. 937 0. 97 1 0. 958 0. 819 0. 887 0. 941 0. 925 0. 932 0. 969
S8 0. 931 0. 912 0. 945 0. 909 0. 959 0. 966 0. 958 1 0. 787 0. 853 0. 974 0. 969 0. 964 0. 985
S9 0. 736 0. 775 0. 77 0. 769 0. 761 0. 774 0. 819 0. 787 1 0. 918 0. 771 0. 75 0. 84 0. 948
S10 0. 917 0. 925 0. 92 0. 907 0. 928 0. 914 0. 887 0. 853 0. 918 1 0. 941 0. 948 0. 887 0. 908
S11 0. 924 0. 911 0. 943 0. 912 0. 935 0. 948 0. 941 0. 974 0. 771 0. 941 1 0. 961 0. 953 0. 976
S12 0. 907 0. 888 0. 918 0. 86 0. 923 0. 934 0. 925 0. 969 0. 75 0. 948 0. 961 1 0. 952 0. 965
S13 0. 903 0. 895 0. 917 0. 904 0. 91 0. 923 0. 932 0. 964 0. 84 0. 887 0. 953 0. 952 1 0. 977
对照指
纹图谱
0. 951 0. 944 0. 962 0. 938 0. 964 0. 958 0. 969 0. 985 0. 948 0. 908 0. 976 0. 965 0. 977 1
2. 8. 3 肾茶品质评价 测定 13 批不同来源肾茶的
HPLC指纹图谱，并与共有模式图谱进行比较，计算
相似度，以相似度作为优质药材的定量判定标准，
见表 4。
结果表明，由相似度可以看出，以福建鼓浪屿
的紫花肾茶相似度最高，为 0. 985，紫花与白花肾
茶平均相似度分别为 0. 966 2 和 0. 951 7，说明紫
花肾茶较白花肾茶质量更加稳定;由迷迭香酸含量
可以看出，以云南景洪市药植所的紫花肾茶含量最
高，为 1. 51%，紫花与白花肾茶迷迭香酸含量平
均为 0. 94%和 0. 92%，说明紫花肾茶有效成分含
量要优于白花肾茶。综合上述，云南地区的紫花肾
茶可能为优质品种，药理作用是否更好，还待下一
步研究。
表 4 13 批肾茶来源及 HPLC指纹图谱相似度
样品号 花色 采集地 相似度
迷迭香酸
含量 /%
S8 紫花 福建省鼓浪屿亚热带植物引种园 0. 985 0. 68
S13 紫花 海南省詹州市热带植物园 0. 977 0. 83
S11 白花 广西省南宁市南药园 0. 976 0. 34
S7 紫花 云南省勐腊县勐仑镇 0. 969 0. 89
S12 白花 福建省鼓浪屿亚热带植物引种园 0. 965 0. 95
S5 白花 云南省普洱江城县 0. 964 0. 62
S3 紫花 云南省景洪市药植所 0. 962 1. 51
S6 白花 云南省耿马县孟定镇 0. 958 1. 24
S1 白花 海南省万宁市兴隆镇药植所 0. 951 1. 39
S9 白花 广东省阳春市时尚区新东头村 0. 948 0. 43
S2 白花 云南省勐腊县勐伴乡 0. 944 0. 94
S4 紫花 云南省勐腊县勐仑植物园 0. 938 0. 81
S10 白花 云南省元江县东峨镇 0. 908 1. 42
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3 讨论
实验对乙腈 － 水、乙腈 － 0. 05% 磷酸水溶液、
乙腈 － 0. 1%磷酸水溶液、乙腈 － 0. 5%醋酸水溶液
和乙腈 － 1%醋酸水溶液系统进行了考察，结果发现
只有在乙腈 － 0. 1%磷酸水溶液系统下保留时间较适
合且峰形较好，所以将乙腈 － 0. 1%磷酸水溶液系统
确定为流动相。
实验对检测波长进行了考察，记录并比较了不
同波长的指纹图谱，结果在 205 nm 检测波长下，指
纹图谱中色谱峰较多，信息较丰富，所以选择 205
nm为检测波长。
通过比较紫花肾茶与白花肾茶的平均相似度，
发现紫花肾茶优于白花肾茶，这也为临床用药提供
了技术参考。
实验采用 HPLC 技术对肾茶样品中黄酮类化合
物进行了检测，通过对 13 批次肾茶样品色谱峰保留
时间和峰面积百分比的比较和分析，对共有指纹峰
进行了标定，并据此成功建立了肾茶药材的 HPLC
指纹图谱。经过对不同产地肾茶样品的 HPLC 图谱
的比较，结果表明，实验获得的色谱指纹图谱在不
同产地肾茶样品中具有极大的相似性，从而可以有
效反映同一物种个体间的相似性，可以作为肾茶专
属性的指纹图谱，为肾茶的药材鉴别和质量控制提
供依据。
参考文献
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stamineus Extract on Thioacetamide-Induced Liver Cirrhosis
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Medicine，2011，(1) :1-6．
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预防医学，1997，(1) :78-79．
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指纹图谱研究［J］．中国药房，2010，(31) :2927-2928．
HPLC Fingerprint of Different Origin Orthosiphon stamineus
LI Guang1，2* ，CHEN Xi1，3，LI Yi-hang1，2，LI Xue-lan1，2
(1. Yunnan Branch，Institute of Medicinal Plant，Chinese Academy of Medical Sciences，Peking Union
Medical College，Jinghong 666100，China;2. Key Laboratory of Dai and Southern Medicine of
Xishuangbanna Dai Autonomous Prefecture，Jinghong 666100 ，China;3. Institute of Medicinal Plant，
Chinese Academy of Medical Sciences，Peking Union Medical College，Beijing 100193 ，China)
［Abstract］ Objective:To establish the analysis method of fingerprint for Orthosiphon stamineus by
HPLC. Methods:A column of Waters ODS(150 mm × 4. 6 mm，5 μm)was used. The mobile phase consisted of
acetonitrile-water(containing 2% acetic acid)with gradient elution. The detective wavelength was 205 nm，and the
flow rate was 1. 0 mL·min-1 . The similarity of different original Orthosiphon stamineus samples were compared by
Similarity Evaluation System for Chromatographic Fingerprint of CMM Version 2004A. Results:The fingerprint
consisted of 15 common peaks. And the similarity was in the range of 0. 908 ～ 0. 985. Conclusion:This method is
simple，accurate，and with good reproducibility，can be used specifically for the quality control of Orthosiphon
stamineus.
［Key words］ Orthosiphon stamineus;Fingerprint;HPLC
(收稿时间 2012-11-20)
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