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白苞裸蒴抗菌和抑制α-葡萄糖苷酶活性研究



全 文 :肺损伤[5]。有实验研究提示:PAF 可能是肺损伤的启动因
子。已有研究证实在大鼠的气管内直接滴注 PAF 可引起大
鼠肺组织 ALI的病理变化[6],而 PAF抑制剂则可以阻断 PAF
引起的 ALI样变化[7]。本实验研究发现内毒素性肺损伤时
大鼠血浆及肺组织中 IL-1β和 PAF的水平均明显升高,且肺
组织水平高于血浆,也表明了炎症介质在肺内聚集可加重肺
损伤。茎叶人参皂苷能抑制血浆中炎症介质 IL-1β 和 PAF
水平,尤其能显著抑制其在肺组织中的聚集,推测可能与其
保护作用机制有关。
目前国内对中药防治内毒素导致的器官组织损伤机制
研究主要集中在直接破坏内毒素、抗炎、改善微循环、抗自由
基、改善微循环、防治弥散性血管内凝血、激活网状内皮系
统、保护细胞器等方面[8-10]。研究中药防治内毒素性损伤的
机制,可能对中药研究和防治内毒素性休克具有重要的价
值。本实验使用内毒素复制大鼠急性肺损伤模型,通过研究
大鼠肺损伤后炎症介质水平的变化,观察到茎叶人参皂苷可
抑制内毒素性肺损伤大鼠血浆及肺组织中炎症介质 IL-1β
和 PAF水平的升高,提示有助于缓解炎症反应,推测茎叶人
参皂苷对内毒素性肺损伤的保护作用机制可能与其抑制炎
症介质 IL-1β 和 PAF 水平有关。ALI 发病机制错综复杂,多
种炎症因子相互交错构成复杂的炎症反应网络,具体机制至
今尚未完全阐明。人参作为我国一种传统中药具有多靶点
药理作用且药效显著,其对内毒素性肺损伤的保护作用机制
值得进一步深入研究,以使其在防治内毒素性损伤方面发挥
更大的临床作用。
参考文献:
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白苞裸蒴抗菌和抑制 α-葡萄糖苷酶活性研究
陈百泉1, 杨再波2, 曹乃锋1, 赵 琳1, 康文艺1*
(1. 河南大学 药学院 中药研究所,河南 开封 475004;2. 黔南民族师范学院化学系,贵州 都匀 558000)
收稿日期:2010-03-20
基金项目:河南省教育厅青年骨干教师资助计划(教高 2008-755);贵州省黔南州 2008 年度社会发展项目(黔南科合字 2008(1)号)
作者简介:陈百泉(1958 -),男,副教授、硕士生导师,从事天然药物安全性评价工作。Tel:13937877371,E-mail:zzcbq@ 163. com
* 通信作者:康文艺,教授,从事中药活性成分及新药研究。E-mail:kangweny@ hotmail. com
摘要:目的 对白苞裸蒴各提取部位抑制 α-葡萄糖苷酶和抗菌活性进行研究。方法 利用 96 微孔板法检测其 α-葡萄
糖苷酶抑制活性;采用纸片扩散法测定最低抑菌浓度(MIC)和液体培养法测定半数抑菌浓度(IC50)。结果 白苞裸蒴
石油醚部位(IC50 = 0. 698 μg /mL),远低于阳性对照 Acarbose (IC50 = 1 081. 27 μg /mL),该部位同时对金黄色葡萄球菌
(SA)、耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)和 β-内酰胺酶阳性的金黄色葡萄球菌(ESBLs)的 MIC值和 IC50值分别为
156. 5 μg /disc,156. 5 μg /disc,625 μg /disc和 3. 47 mg /mL,5. 27 mg /mL,3. 54 mg /mL;正丁醇部位对 SA、MRSA和 ESBLs
的 MIC值和 IC50分别为 625 μg /disc,625 μg /disc,625 μg /disc和 1. 50 mg /mL,4. 80 mg /mL,2. 94 mg /mL。结论 白苞裸
蒴石油醚部位具有较好的 α-葡萄糖苷酶的抑制活性;并且白苞裸蒴石油醚和正丁醇部位对 SA、MRSA 和 ESBLs 均具有
良好的抗菌活性。
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第 33 卷 第 4 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
April 2011
Vol. 33 No. 4
关键词:白苞裸蒴;α-葡萄糖苷酶抑制活性;抗菌活性
中图分类号:R285. 5 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2011)04-0677-03
三白草科 Saururaceae全世界共有约 4 属 6 种,分布于亚
洲东部和北美洲,我国有 3 属 4 种。裸蒴属植物为我国特
有,只有 2 个种:裸蒴 Gymnotheca chinensis Decne 和白苞裸
蒴 G. involucrata Pei[1]。裸蒴和白苞裸蒴为民间草药,用于
白带增多、宫颈炎、腹部水肿、咳嗽等疾病[2]。其中,白苞裸
蒴主要分布于我国西南地区。全草药用,用于治疗跌打损
伤,肺痨咳嗽,腹胀水肿等症[3]。
研究发现,从三白草科植物中分离到的化合物类型多
样,其中有多种成分具有抗炎、抗菌等活性。随着对三白草
科植物研究的深入,还发现其中多种成分具有抗肿瘤,抗氧
化以及对神经系统的作用,并有多项相关专利申请[4-5]。该
科的化学成分主要集中在鱼腥草挥发油[6-8],其次发现含有
黄酮类、木脂素和生物碱等成分 [9]。白苞裸蒴化学的成分
研究报道极少,仅发现对山柰酚-4′7-二甲基-3-O-葡萄糖苷
的报道[10],其生物活性的研究尚未见报道。本实验对白苞
裸蒴抑制 α-葡萄糖苷酶和抗菌活性进行了研究。
1 仪器和材料
1. 1 材料与试剂 白苞裸蒴于 2008 年 7 月采集于贵州省
都匀地区,经黔南州民族师范学院生物系副教授郭治友鉴定
为三百草科裸蒴属植物白苞裸蒴 Gymnotheca involucrate
Pei.。
α-葡萄糖苷酶(EC3. 2. 1. 20);4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄
糖苷;阿卡波糖(Acarbose,Lot 16869)和二甲基亚砜均购自
美国 Sigma 公司。金黄色葡萄球菌(Staphlococcus aureus,
SA)ATCC25923(批号 TC-26,上海天呈生物信息有限公
司),耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(Methcillin-resistant
Staphylococcus aureus,MRSA)和 ESBLs 由河南大学附属淮河
医院临床分离并经全自动微生物分析仪 VITEK-AMS 鉴定
(符合率 99%)。
1. 2 仪器 Multiskan MK3 酶标仪(美国 Thermo Electron公
司);LRH-150 恒温培养箱(上海一恒科技有限公司);DEL-
TA 320 型 PH计(美国 Mettler-Toledo公司);电子天平(美国
Mettler-Toledo公司);旋转蒸发仪(德国 Heidolph 公司);
LDZX-30KB 立式压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂)。
2 方法
2. 1 提取 白苞裸蒴(1. 2 kg),用甲醇室温下冷浸 3 次,每
次 2 d。回收试剂后将浸膏悬浮于水中,依次用石油醚、乙酸
乙酯和正丁醇萃取。回收溶剂后,即可得石油醚部位、乙酸
乙酯部位和正丁醇部位。
2. 2 α-葡萄糖苷酶抑制活性的筛选方法 按照文献[11]方
法进行 α-葡萄糖苷酶筛选。
2. 3 抗菌试验 按照文献[12]纸片扩散方法,用 DMSO 将
白苞裸蒴各提取物分别配成 50 mg /mL 的溶液,测定其最小
抑菌浓度(MIC)。每份样品平行操作 3 次,用 DMSO作空白
对照。所有操作均在无菌条件下进行。
半数抑菌浓度(IC50)测定:在肉汤培养基中培养 18 h
的受试菌种液 90 μL分别加入洁净无菌的 96 孔培养板中,
然后加入不同浓度梯度的样品母液 10 μL,溶剂(丙酮 /甲
醇 /DMSO)终浓度为 1 /10 样品母液浓度。同时设阴性对照、
空白对照和溶剂对照,重复处理 4 次。然后将 96 孔板于 28
°C下培养箱中培养 24 h后,用酶标仪测定 595 nm处的吸光
度值,按下面公式计算出抑制率(%)。抑制率(%)=[(加
溶剂的细菌 OD 值 -相应上清液 OD 值)-(加样品的细菌
OD值 -相应上清液 OD 值)]/空白对照 OD 值* 100,然后
根据其各自的抑制率画出线性回归方程,计算相应 IC50值。
3 结果与讨论
3. 1 α-葡萄糖苷酶抑制活性 表 1 显示,除了石油醚部位
对 α-葡萄糖苷酶的抑制活性(64. 74%)高于阳性对照药阿
卡波糖(55. 63%)外,乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物对 α-
葡萄糖苷酶的抑制活性均低于阳性对照药阿卡波糖
(55. 63%)。
各提取物的 IC50值大小为:只有石油醚提取物(IC50 =
0. 698 μg /mL)低于阳性对照 Acarbose (IC50 = 1 081. 27 μg /
mL),表明白苞裸蒴石油醚提取物具有较好的 α-葡萄糖苷酶
的抑制活性。
表 1 白苞裸蒴提取物 α-糖苷酶抑制活性
样品 部位
初筛终浓度
/(mg /mL)
抑制率
/%
IC50
/(μg /mL)
白苞裸蒴 石油醚 1. 5 64. 74 0. 698
乙酸乙酯 1. 5 22. 48 NT
正丁醇 1. 5 2. 14 NT
Acarbose 1. 5 55. 63 1 081. 27
注:NT表示未测定。
3. 2 抗菌活性 白苞裸蒴各提取部位对各种受试菌种的抑
菌圈、最低抑菌浓度和 IC50值见表 2、表 3 和表 4。
表 2 白苞裸蒴各提取物对各种受试菌种的抑菌圈
受试菌种
浓度
/(mg /disc)
部位石
油醚 /mm
部位乙
酸乙酯 /mm
部位正
丁醇 /mm
SA 0. 25 10 - 9
MRSA 0. 25 11 - 9
ESBLs 0. 25 8 - 9
表 2 显示,白苞裸蒴的石油醚部位和正丁醇部位对 SA,
MRSA和 ESBLs均有抑制作用。比较抑菌圈直径发现,白苞
裸蒴的抑菌活性成分主要集中在极性小的石油醚部位和极
性大的正丁醇部位。
表 3 显示,白苞裸蒴各部位的抑菌活性大小顺序为:石
油醚部位 >正丁醇部位 >乙酸乙酯部位。
表 4 显示,白苞裸蒴各部位的 IC50大小顺序为:正丁醇
部位 >石油醚部位 >乙酸乙酯部位。
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中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
April 2011
Vol. 33 No. 4
表 3 白苞裸蒴各部位对各种受试菌种的
MIC值 /(μg /disc)
受试菌种 石油醚部位 乙酸乙酯部位 正丁醇部位
SA 156. 5 - 625
MRSA 156. 5 - 625
ESBLs 625 - 625
表 4 白苞裸蒴各部位对受试菌种的 IC50值 /(mg/mL)
受试菌种 石油醚部位 乙酸乙酯部位 正丁醇部位
SA 3. 47 - 1. 50
MRSA 5. 27 - 4. 80
ESBLs 3. 54 - 2. 94
注:-表示无抗菌活性。
4 结论
本实验对白苞裸蒴各提取部位抑制 α-葡萄糖苷酶和抗
菌活性进行研究,发现石油醚部位具有较好的 α-葡萄糖苷
酶抑制活性;石油醚部位和正丁醇部位均有较强的抑制金黄
色葡萄球菌(SA)、耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)和
β-内酰胺酶阳性的金黄色葡萄球菌(ESBLs)的抑菌活性。
提示我们有必要对该活性部位进行活性成分追踪。
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石榴花多酚对 2 型糖尿病大鼠游离脂肪酸和胰岛素抵抗的影响
李 潇1, 魏媛媛1, 窦 勤2, 闫 冬1, 阿吉艾克拜尔·艾萨3, 帕尔哈提·克热木1*
(1. 新疆医科大学,新疆 乌鲁木齐 830054;2. 新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所,新疆 乌鲁木齐;3.
中国科学院新疆理化技术研究所,新疆 乌鲁木齐 830011)
收稿日期:2010-06-06
基金项目:新疆维吾尔自治区科技攻关(含重大专项)和重点项目计划(200733146)
作者简介:李 潇(1983 -)女,硕士生,研究方向:心血管药理学
* 通信作者:帕尔哈提·克热木(1960 -),男(维吾尔族),博士,教授,博士生导师,研究方向:心血管药理及植物提取物药效学。
E-mail:parhatke@ vip. sina. com
摘要:目的 研究石榴花多酚(Pomegranate Flower Polyphenol,PFP)对 2 型糖尿病大鼠血糖、血脂代谢的影响及其对胰岛
素抵抗的改善作用。方法 通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)45 mg /kg,加高脂饲料喂养建立 2 型糖尿病脂代谢紊乱大鼠
模型,将成模大鼠随机分为模型组、二甲双胍组和两个给药剂量组,另设正常对照组,在接受石榴花多酚治疗 4 周后,测
定有关生化指标。结果 给药四周后,模型组大鼠空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FIns)、胰岛素抵抗指数(IRI)、血清游
离脂肪酸(FFA)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)显著升高,高密度脂蛋白胆固醇占总胆
固醇之比(HDL-C / TC)显著降低;与模型组比较,PFP各剂量组均降低 2 型糖尿病大鼠 FPG、FIns、IRI、FFA、TC、TG、LDL-
C,升高 HDL-C /TC(P < 0. 05 或 0. 01)。结论 石榴花多酚能降低 2 型糖尿病大鼠血糖、血清游离脂肪酸水平,调节血脂
代谢并改善胰岛素抵抗。
关键词:石榴花多酚;2 型糖尿病;胰岛素抵抗;游离脂肪酸;血脂
中图分类号:R966 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2011)04-0679-04
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第 33 卷 第 4 期
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