全 文 ：※基础研究 食品科学 2016, Vol.37, No.13 77
大果榕果实乙醇提取物抗氧化活性及对α-葡萄糖
苷酶和乙酰胆碱酯酶抑制活性
谭  琳1，郑晓燕1，王甲水1，马伏宁1，康由发2，臧小平1，马蔚红1
（1.中国热带农业科学院海口实验站，海南省香蕉遗传改良重点实验室，海南 海口 570102；
2.海南大学城西校区管委会，海南 海口 571101）
摘  要：研究大果榕果实的多酚含量及其抗氧化活性、α-葡萄糖苷酶和乙酰胆碱酯酶抑制活性，为其进一步开发利
用奠定基础。以采自海南保亭七仙岭的大果榕果实为实验材料，用体积分数65%的乙醇提取大果榕果实多酚，采用
Folin-酚法测定总酚含量。对获得的大果榕果实多酚进行1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，
DPPH）自由基、2,2’-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2,2’-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-
sulphonate)，ABTS）自由基、羟自由基（•OH）清除率以及α-葡萄糖苷酶抑制活性和乙酰胆碱酯酶抑制活性测定。
结果表明：大果榕果实多酚含量较高，达1.92 mg/g（以干质量计），其对DPPH自由基、ABTS＋•和•OH均具有显
著的清除活性，且呈质量浓度依赖性，IC50值分别为141.25、91.20、45.71 µg/mL；大果榕果实多酚对α-葡萄糖苷酶
抑制活性强于阳性对照阿卡波糖，且呈现明显的质量浓度依赖性，IC50值为102.33 µg/mL；同时大果榕果实多酚对
乙酰胆碱酯酶也具有一定的抑制活性，IC50值为 4.9 mg/mL。研究结果表明大果榕果实多酚具有良好的抗氧化性、
α-葡萄糖苷酶抑制活性和一定的乙酰胆碱酯酶抑制活性。
关键词：大果榕；果实多酚；抗氧化活性；自由基清除活性；α-葡萄糖苷酶抑制活性；乙酰胆碱酯酶抑制活性
Antioxidant Activity and Inhibitory Activity of Ethanol Extract from Ficus auriculata Fruits against
α-Glucosidase and Acetylcholine Esterase
TAN Lin1, ZHENG Xiaoyan1, WANG Jiashui1, MA Funing1, KANG Youfa2, ZANG Xiaoping1, MA Weihong1
(1. Hainan Key Laboratory of Banana Genetic Improvement, Haikou Experimental Station, Chinese Academy of Tropical Agricultural
Sciences, Haikou 570102, China; 2. Management Committee of Chengxi Campus, Hainan University, Haikou 571101, China)
Abstract: Total phenolics were extracted from Ficus auriculata fruits using 65% ethanol and quantified by the Folin phenol
method. The antioxidant activity of the ethanol extract was assessed by DPPH, ABTS and hydroxyl radical scavenging
assays and its inhibitory activity against alpha-glucosidase and acetylcholine esterase was also evaluated. Results showed
that the fruit extract contained high levels of total phenolics (1.92 mg/g DW) and could scavenge DPPH, ABTS and hydroxyl
radicals effectively in a concentration dependent manner with IC50 of 141.25, 91.20 and 45.71 µg/mL, respectively. It also
exhibited strong inhibitory activity against α-glucosidase in a concentration dependent manner with IC50 of 102.33 µg/mL.
Similarly, it showed inhibitory activity against acetylcholine esterase with IC50 of 4.9 mg/mL. Therefore, the polyphenol-
rich extract from Ficus auriculata fruits has strong antioxidant potential and inhibitory activity against α-glucosidase and
acetylcholine esterase.
Key words: Ficus auriculata; fruit polyphenols; antioxidant activity; radical scavenging activity; α-glucosidase inhibitory
activity; acetylcholine esterase inhibitory activity
DOI:10.7506/spkx1002-6630-201613014
中图分类号：S663.9 文献标志码：A 文章编号：1002-6630（2016）13-0077-05
引文格式：
谭琳, 郑晓燕, 王甲水, 等. 大果榕果实乙醇提取物抗氧化活性及对α-葡萄糖苷酶和乙酰胆碱酯酶抑制活性[J]. 食品科
学, 2016, 37(13): 77-81. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201613014. http://www.spkx.net.cn
TAN Lin, ZHENG Xiaoyan, WANG Jiashui, et al. Antioxidant activity and inhibitory activity of ethanol extract from Ficus
auriculata fruits against α-glucosidase and acetylcholine esterase[J]. Food Science, 2016, 37(13): 77-81. (in Chinese with
English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201613014. http://www.spkx.net.cn
收稿日期：2015-08-13
基金项目：中国热带农业科学院海口实验站科研启动项目（HKZKY140204）；农业部财政项目
作者简介：谭琳（1974—），女，副研究员，博士，主要从事分子营养学研究。E-mail：tanlin7402@126.com
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近年来许多研究表明植物多酚不仅具有良好的抗氧
化性，同时还具有显著的α-葡萄糖苷酶抑制活性和乙酰胆
碱酯酶抑制活性。如桑椹果实多酚[1]、黑加仑果实多酚[2]
等是α-葡萄糖苷酶极好的抑制剂，苹果多酚[3]、桃金娘果
实多酚[4]、野生蓝莓多酚[5]对乙酰胆碱酯酶具有显著的抑
制活性，这为人们通过膳食营养预防和治疗糖尿病及阿尔
茨海默症提供了理论指导，也为开发相关的健康食品提供
了实验依据。因此，从可食性植物尤其是水果中探寻具有
α-葡萄糖苷酶抑制活性、乙酰胆碱酯酶抑制活性的多酚化
合物已成为近年来食品营养学研究的热点。
大果榕（Ficus auriculata）为桑科（Moraceae）榕属
（Ficus）植物，俗称馒头果、大无花果，分布于我国海
南、云南、广西、贵州等地。大果榕果实成熟时清香微
甜，可食用[6]。《南药园植物名录》记载大果榕的果实具
有祛风宣肺、补肾益精作用，主治肺热咳嗽、遗精、吐
血[7]。近年来的研究表明大果榕叶具有抗氧化、抗炎、抗
糖尿病和保肝作用[8]，同时还具有很强的抑菌活性[9]。目
前关于大果榕果实多酚抗氧化性、α-葡萄糖苷酶抑制活
性和乙酰胆碱酯酶抑制活性的研究尚无报道。本研究旨
在测定大果榕果实的多酚含量、多酚的抗氧化活性以及
α-葡萄糖苷酶抑制活性和乙酰胆碱酯酶抑制活性，以期
为大果榕果实的开发利用奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
大果榕果实：于2014年10月30日采于海南省保
亭七仙岭国家森林公园，经中国热带农业科学院热带
作物品种资源研究所王祝年教授鉴定为大果榕Ficus
auriculata Lour.。
4-硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷（p-ni trophenyl-
β-D-galactopyranoside，PNPG）、α-葡萄糖苷酶、
乙酰胆碱酯酶、 5 , 5 ’ -二硫代双（ 2 -硝基苯甲酸）
（dithiobisnitrobenzoicacid，DTNB）、碘化硫代乙酰胆
碱（acetylthiocholine iodide，ATCI） 美国Sigma公
司；石杉碱甲（高效液相色谱纯度＞98%） 中国药品
生物制品检定所。
1.2 仪器与设备
IKA/RV10数显型旋蒸仪 德国IKA公司；Thermo/
SPD1010真空离心浓缩仪、Thermo Multiskan FC全自动酶
标仪 美国Thermo Scientific公司；UV-1800紫外-可见分
光光度计 日本岛津公司。
1.3 方法
1.3.1 大果榕果实多酚的提取
在刘晓丽 [10]的方法的基础上稍作改动：将大果榕
整果洗净，置于40 ℃烘箱烘干，用粉碎机将其粉碎，
过100 目筛。称取5 g粉末样品，加入65%乙醇溶液
200 mL，在40 ℃条件下水浴振荡提取3 h，过滤，滤渣重
复上述步骤3 次，合并3 次提取的滤液，进行旋转蒸发和
45 ℃真空浓缩挥去乙醇，得到大果榕果实浸膏。
1.3.2 总酚含量的测定  
采用Folin-酚比色法[11]，以没食子酸为标准品绘制标
准曲线。精确称取大果榕果实浸膏，用无水乙醇稀释至
1 mg/mL得到母液，测定提取物的总酚含量。取0.2 mL稀
释的提取物加入0.5 mL蒸馏水和125 μL的Folin-Ciocalteu
试剂，反应6 min后依次加入4 mL质量分数2%的碳酸钠
溶液和1 mL蒸馏水，混匀，避光反应90 min后于760 nm
波长处测定其吸光度。各提取物总酚含量以没食子酸
（gallic acid，GA）为标准进行定量，最终的总酚含量以
每克干粉所含的没食子酸当量表示（mg GAE/g）。
1.3.3 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-
picrylhydrazyl，DPPH）自由基清除能力的测定
参考文献[12]的方法，并做适当改动：将大果榕多酚
用100%的乙醇分别配制成0.125、0.25、0.5、1、2、3、
4、5 mg/mL的样品液，取0.2 mL不同质量浓度的样品液
添加到2 mL含0.1 mmol/L DPPH的95%乙醇中，混合，振
荡，在室温条件下放置30 min，然后在517 nm波长处检
测吸光度（Ai），以1.5 mL 95%的乙醇加入1.5 mL蒸馏水
调零作为空白。IC50值为自由基清除率达到50%时的样品
的质量浓度。
DPPH㠚⭡ส␵䲔⦷/%＝˄1ˉ˅×100AiˉAj
Ac
（1）
式中：Ac为对照组（2 mL DPPH溶液＋0.1 mL蒸
馏水）在517 nm波长处的吸光度；Aj为0.1 mL样品液＋
2 mL 95%乙醇在517 nm波长处的吸光度；Ai为0.1 mL样
品液＋2 mL DPPH溶液在517 nm波长处的吸光度。
1.3.4 羟自由基（•OH）清除能力的测定
采用邻二氮菲-Fe2+氧化法[13]测定样品的•OH清除能
力：在试管中依次加入0.75 mmol/Ｌ邻二氮菲溶液1 mL、
0.1 mol/L pH 7.4的磷酸盐缓冲液（phosphate buffered
saline，PBS）1 mL、蒸馏水1 mL、0.75 mmol/L硫酸亚铁
溶液1 mL，混匀，再加入0.01% H2O2 1 mL，混合溶液在
37 ℃水浴反应60 min，于536 nm波长处测吸光度（A损，
损伤管），以VC作为阳性对照，每组实验平行3 次，取
其平均值。gOH⏙䰸⥛/%＝ ×100A样－A损A空－A损   （2）
式中：A空为以蒸馏水替代H2O2反应体系的吸光度；
A样为以样品替代蒸馏水反应体系的吸光度。
※基础研究 食品科学 2016, Vol.37, No.13 79
1.3.5 2,2’-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵
盐（2,2’-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate)，
ABTS）自由基清除能力的测定
参考文献[14]的方法：精确称取大果榕果实多酚提
取物（浸膏），用水充分溶解，配制成质量浓度分别为
0.125、0.25、0.5、1、2、3、4、5 mg/mL的溶液，分别取
不同质量浓度的多酚样品0.2 mL，各加入1.9 mL ABTS＋•
工作液，准确反应6 min后于734 nm波长处测量吸光度
（Ai），同时以VC作为阳性对照，重复3 次，结果取平
均值，按下式计算ABTS＋•清除率。
ABTS＋g␵䲔⦷/%＝˄1ˉ˅h100Ai－AjA0 （3）
式中：Aj为以超纯水替代ABTS＋•工作液反应体系的
吸光度；A0为以超纯水替代样品溶液反应体系的吸光度。
1.3.6 α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定
参照Li Ting[15]和康文艺 [16]等的方法，先制作标准
曲线，然后测定α-葡萄糖苷酶抑制活性：在96 孔板中
加入112 µL磷酸钾缓冲液（pH 6.8）、20 µL 0.2 U/mL
α-葡萄糖苷酶、8 µL样品，37 ℃恒温反应15 min后加入
2.5 mmol/L PNPG 20 µL，37 ℃恒温反应15 min。再加
入80 µL 0.2 mol/L的Na2CO3溶液，于405 nm波长处测定
吸光度（A样），每个样品平行测定3 次。同时设定相同
条件下以磷酸钾缓冲液替代α-葡萄糖苷酶的样品空白组
（A样空），不加样品的阴性对照组（A阴），不加样品、
酶与底物的空白对照组（A空）以及以阿卡波糖为抑制剂
的阳性对照组（A阳）。按照下式计算α-葡萄糖苷酶活性
抑制率，并求出相应IC50值。
α-葡萄㌆㤧䞦⍫ᙗᣁࡦ⦷/%＝˄1ˉ˅h100AṧˉAṧオA䱤ˉAオ （4）
1.3.7 乙酰胆碱酯酶抑制活性的测定
参照刘海元等[17]的方法，用PBS将大果榕多果实酚
配制成12.5、10、7.5、5、2.5 mg/mL的溶液，在96 孔
板中加入pH 7.4的PBS 50 μL、各质量浓度样品25 μL，
1.0 μg/mL乙酰胆碱酯酶25 μL。在4 ℃保持20 min。加入
0.30 mg/mL ATCI 25 μL、0.59 mg/mL DTNB 125 μL（整
个反应体系体积为250 μL），37 ℃恒温孵育20 min，用
酶标仪在405 nm波长处测定吸光度（A样），以石杉碱甲
为阳性对照，重复3 次取平均值。҉䞠㛶⻡䞟䞦⍫ᙗᣁࡦ⦷/%＝ ×100˄AオˉAオᓅ˅ˉ˄AṧˉAṧᓅ˅
AオˉAオᓅ  （5）
式中：A样底为样品本底组（用pH 7.4的PBS替代酶溶
液）的吸光度；A空为空白组（用含1% DMSO的pH 7.4的
PBS替代样品）的吸光度；A空底为空白本底组（用pH 7.4
的PBS替代空白组中的酶溶液）的吸光度。
2 结果与分析
2.1 总酚含量测定结果
采用Folin-酚比色法测定总酚含量，没食子酸对照
品在20～100 μg的范围内线性良好，标准曲线方程为
Y=0.000 7X＋0.059（R2=0.999 2），测定得到大果榕整果
多酚的多酚含量为1.92 mg/g（以干质量计）。
2.2 DPPH自由基清除能力 ໻ᵰὩᵰᅲ໮䜮
VC
0
0
20
40
60
80
100
120
100 200䋼䞣⌧ᑺ/˄µg/mL˅300 400 500DPPH 自由基⏙䰸⥛/%
图 1 大果榕果实多酚的DPPH自由基清除活性
Fig. 1 DPPH radical scavenging activity of polyphenols from Ficus
auriculata fruits
如图1所示，大果榕果实多酚质量浓度为2.5～25 µg/mL
时，其清除 DPPH自由基的能力较弱，与VC相比差异显
著（P＜0.05），然而随着质量浓度的增大，大果榕果实
酚对DPPH自由基的清除能力逐渐增强，当大果榕果实多
酚质量浓度达到500 µg/mL时，其对DPPH自由基清除率
达到了（71.2±2.2）%，大果榕果实多酚清除DPPH自由
基的IC50值为141.25 µg/mL。
2.3 •OH清除能力 ໻ᵰὩᵰᅲ໮䜮
VC
0
0
20
40
60
80
100
120
200䋼䞣⌧ᑺ/˄µg/mL˅600400 800噝OH ⏙䰸⥛/%
图 2 大果榕果实多酚的•OH清除活性
Fig. 2 Hydroxyl radical scavenging activity of polyphenols from Ficus
auriculata fruits
如图2所示，大果榕果实多酚质量浓度为50 µg/mL
时，已具有一定的•OH清除活性，其清除能力与对照VC
差异不大（P＞0.05），随着大果榕果实多酚质量浓度
的增大，其对•OH的清除率呈上升趋势，当质量浓度达
到600 µg/mL时，大果榕果实多酚对•OH的清除率达到
（96.61±1.28）%，比VC的•OH清除率更高（P＜0.05），
大果榕果实多酚清除•OH的IC50值为45.71 µg/mL。
80 2016, Vol.37, No.13 食品科学 ※基础研究
2.4 ABTS＋•清除能力 ໻ᵰὩᵰᅲ໮䜮
VC
0
0
20
40
60
80
100
120
200100 䋼䞣⌧ᑺ/˄µg/mL˅ 400300 500ABTSˇ 噝⏙䰸⥛/%
图 3 大果榕果实多酚ABTS＋• 清除活性
Fig. 3 ABTS radical scavenging activity of polyphenols from Ficus
auriculata fruits
如图3所示，大果榕果实多酚质量浓度为50 µg/mL
时，对ABTS＋•的清除能力较弱，与VC的ABTS＋•清
除能力有显著差异（P＜0.05），但是随着质量浓度的
增大，其ABTS＋•清除能力显著增强，当质量浓度为
200 µg/mL时，大果榕果实多酚对ABTS＋•的清除率达
（97.17±1.37）%，并趋于饱和，大果榕果实多酚清除
ABTS＋•的IC50值为91.20 µg/mL。
2.5 α-葡萄糖苷酶抑制活性 བྷ᷌῅᷌ᇎཊ䞊䱯঑⌒㌆
0
0
20
40
60
80
100
120
800400 600200 䍘䟿⎃ᓖ/˄µg/mL˅ 1 2001 000 1 400α- 葡萄㌆㤧䞦⍫ᙗᣁࡦ⦷/%
图 4 大果榕果实多酚对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用
Fig. 4 Inhibitory activity of polyphenols from Ficus auriculata fruits
against α-glucosidase
如图 4 所示，大果榕果实多酚在低质量浓度
（62 .5 µg /mL）时，抑制α -葡萄糖苷酶的活性较低
（30.5%），但随着其质量浓度的增加，抑制活性显著
增强，并且比阳性对照阿卡波糖表现出更强的抑制活性
（P＜0 . 0 5），当质量浓度为1 0 0 0 µ g / m L时，大
果榕果实多酚对 α -葡萄糖苷酶活性的抑制率达到
（94.56±1.77）%，之后趋于饱和，大果榕果实多酚抑
制α-葡萄糖苷酶活性IC50值为102.33 µg/mL。
2.6 乙酰胆碱酯酶抑制活性
如图5所示，大果榕果实多酚具有一定的乙酰胆碱
酯酶抑制活性，当其质量浓度为1 mg/mL时，对乙酰胆
碱酯酶活性的抑制率达到（32.45±1.50）%。在一定
质量浓度范围内，大果榕果实多酚对乙酰胆碱酯酶活
性的抑制率呈现质量浓度依赖性，但活性不高（IC50值
为4.9 mg/mL），与阳性对照石杉碱甲相比有显著差异
（P＜0.05）。
བྷ᷌῅᷌ᇎཊ䞊⸣ᵹ⻡⭢
0.25
0
20
40
60
80
100
120
1.000.50 0.75䍘䟿⎃ᓖ/˄mg/mL˅ 1.25҉䞠㛶⻡䞟䞦⍫ᙗᣁࡦ⦷/%
图 5 大果榕果实多酚对乙酰胆碱酯酶抑制活性
Fig. 5 Inhibitory activity of polyphenols from Ficus auriculata fruits
against acetylcholine esterase
3 讨 论
本研究以体积分数65%的乙醇提取了大果榕果实多
酚，Folin-酚法测定其总酚含量为1.92 mg/g。获得的大果
榕果实多酚对DPPH自由基、ABTS＋•和•OH均具有显著
的清除活性，并且随着多酚质量浓度的增加，其清除能力
也随之增强，IC50值分别为141.25、91.20、45.71 µg/mL。
Shi Yinxian等[18]报道了大果榕叶提取物的抗氧化性，其
清除DPPH自由基的IC50值为290 µg/mL，清除ABTS＋•的
IC50值为250 µg/mL，这也表明大果榕果实乙醇提取物较
大果榕叶片乙醇提取物具有更强的抗氧化活性。
α-葡萄糖苷酶抑制剂可竞争性抑制小肠内各种α-葡萄
糖苷酶，减慢淀粉类分解为葡萄糖的速率，从而减缓肠
道内葡萄糖的吸收，降低餐后血糖水平的升高，目前已
广泛应用于糖尿病及其并发症的防治[19]。化学合成药物
常常存在一定的毒副作用，因此有必要从天然产物中寻
找具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的物质[20]。本研究测定了
大果榕果实多酚的α-葡萄糖苷酶抑制活性，发现其活性
比阳性对照阿卡波糖更高，这与常美芳等[19]得到的研究
结果一致。但大果榕果实多酚中究竟是哪种化学成分在
发挥α-葡萄糖苷酶抑制活性，尚有待进一步研究。
乙酰胆碱与学习和记忆有着密切关系，乙酰胆碱酯
酶抑制剂可以抑制乙酰胆碱酯酶对乙酰胆碱的分解而提
高乙酰胆碱的水平，从而被广泛应用于阿尔茨海默症的
治疗[21]。目前临床使用的乙酰胆碱酯酶抑制剂多奈哌齐
存在引起心血管疾病、诱发病人狂躁等副作用[22-23]，利斯
的明则会引起恶心、呕吐、头疼等症状[24]，还存在引起
心血管疾病的风险[25]。因此，寻找具有乙酰胆碱酯酶抑
制活性的天然产物对于阿尔茨海默症的预防和治疗具有
重要意义。本研究结果显示，大果榕果实多酚具有一定
的乙酰胆碱酯酶抑制活性，这为其用于开发增强记忆力
的保健产品奠定了理论基础。
※基础研究 食品科学 2016, Vol.37, No.13 81
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