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(收稿日期:2011-03-02)
＊基金项目:教育部科技研究重点项目(编号:209116);国家民委-教育部共建民族药资源化学重点实验室开放基金(编号:20090213)
　作者简介:梁辉(1985～ ), 男, 硕士 , 主要从事药物分离与分析工作。
　通讯作者:黄相中(1974～),男 ,教授 ,硕士研究生导师, 研究方向:天然药物化学。 E-mail:xiangzhonghuang@yahoo.com.cn.
蒌叶提取物的抗氧化与抑菌活性研究＊
梁　辉 , 尹　燕 , 杨青睐 , 王　超 , 赵吉寿 , 黄相中
(云南民族大学化学与生物技术学院 , 云南 昆明 650031)
　　摘　要:目的:观察蒌叶各部分提取物的抗氧化及抗菌实
验效果。方法:采用滤纸片法对 6 种常见细菌的生长抑制活
性进行测定 ,用 DPPH 法及连苯三酚红褪色法进行抗氧化研
究。结果:蒌叶提取物对藤黄球菌 、大肠杆菌 、普通变形杆菌 、
金黄色葡萄球菌 、绿脓杆菌 、佛氏痢疾杆菌均有抑杀作用;蒌
叶提取物均具有抗氧化作用。结论:蒌叶果实部分乙醇提取
物具有更强的抗菌作用;蒌叶叶子部分乙醇提取物具有较强
的抗氧化活性。
关键词:蒌叶;抗氧化;抑菌活性
中图分类号:R285.5 文献标识码:A
文章编号:1007-2349(2011)05-0057-03
蒌叶(P iper betle L inn.)别名蒟酱 、青蒟 、芦子 、大芦子 、
槟榔蒟 、槟榔 , 属胡椒科胡椒属植物[ 1] 。蒌叶在我国古代曾是
有名的栽培植物和野生药用植物 , 以全株或茎 、叶入药 , 味辛 、
微甘 ,温。全株及茎叶全年可采为药用。具有祛风散寒 , 行气
化痰 ,消肿止痒的功效。主要用于治疗风寒咳嗽 , 支气管哮
喘 ,风湿骨痛 , 胃寒痛 , 妊娠水肿;外用可治皮肤湿疹 , 脚癣等
皮肤疾病[ 2] 。因为蒌叶的抗病抗虫性强 , 长期咀嚼蒌叶还有
护齿作用。研究发现蒌叶的提取物对老鼠的可逆性节育有一
定作用[ 3] 。 蒌叶中的主要成分是生物碱 、木脂素 、黄酮
类[ 4 ～ 5] 。本文采用 DPPH 法及连苯三酚红法对蒌叶提取物进
行了抗氧化活性研究 , 并分别采用蒌叶的多种提取物对多种
菌株进行抑菌了实验 ,拟观察蒌叶体外的抗氧化及抑菌效果 ,
为中药蒌叶的开发和应用提供基础理论依据。
1　材料与方法
1.1　实验材料
1.1.1　材料与试剂　蒌叶(Piper betle Linn.)采自云南保
山。标本经云南大学生物系马绍宾教授鉴定后保存于云南民
族大学生物技术实验室。 DPPH(1 , 1-diphenyl-2-picry l-
hydrazyl二苯代苦味肼基自由基),日本东京化成株式会社生
产;连苯三酚红 , LEADM AN 公司生产;没食子酸 , 实验室自
制;其它试剂均为国产分析纯。
1.1.2　供试菌种　藤黄球菌(Micrococcus luteus)、大肠杆菌
(Esche richia coli)、普通变形杆菌(P ro teus mirabilis)、金黄色
葡萄球菌(Staphy lococcus aureus)、 绿脓 杆菌(Pseudom
onasaeraginosa)、佛氏痢疾杆菌(Valsalva dysentery bacillus)
购置于云南大学微生物实验室以牛肉膏蛋白胨琼脂培养基培
养[6]备用。
1.2　仪器与设备(只标注主要的)　旋转蒸发仪 , 上海亚荣生
化仪器厂;循环水式真空水泵 , 河南巩义市英峪华仪器厂;
7200 型分光光度计 , 上海精密科学仪器有限公司;恒温箱 , 上
海实验仪器厂;手提式压力蒸汽灭菌锅 , 广州市化南医疗器械
厂;超净工作台 , 苏州净化集团安泰设备公司。
1.3　方法
1.3.1　蒌叶提取物浸膏的制备　称取晒干切碎的蒌叶茎 、叶
和果实各 100 g , 分别用 95%的酒精和 70%的丙酮直接回流
3 h , 重复 4 次 ,馏分用旋转蒸发器减压浓缩 , 蒸干溶剂 , 得膏
状提取物 ,称重。置于小瓶子中保存备用。
1.3.2　蒌叶提取物的抑菌活性研究　取蒌叶的各种提取物
0.1 g ,各加入 1 mL 95%的乙醇使其完全溶解 ,得浓度为 10%的
溶液 ,再依次稀释为 5%、2.5%的浓度梯度。灭菌后放置备用。
利用滤纸片琼脂扩散法[7 ～ 8]对蒌叶提取物进行抑菌活性测定。
572011 年第 32 卷第 5 期　　　　　　　　　　云 南 中 医 中 药 杂志
1.3.3　蒌叶提取物的抗氧化活性研究　取蒌叶各种提取物
按质量浓度均为 1.05 g/ L 配制成抗氧化剂溶液。 按以下方
法进行抗氧化活性研究。
1.3.3.1　DPPH 自由基捕获分光光度法[9] 　往 10 mL 比色
管中依次加入 4 mL pH 6.88 标准磷酸盐缓冲溶液 , 4 mL
0.177 7 mmol/ L DPPH 溶液 , 混匀 , 再加入一定量抗氧剂溶
液 ,蒸馏水补充体积至 10 m L 刻度 , 充分混匀 , 10 min 后在
520 nm 处测量吸光度。对 DPPH 自由基的清除率的计算
K P(%)=[ 1-(A i -A j)/ Ac] ×100
式中:A i=加抗氧剂反应后 DPPH 溶液吸光度;A j =不
加 DPPH , 只加抗氧剂及水的溶液的吸光度;Ac =未加抗氧
剂 ,只加 DPPH 及水的溶液的吸光度。
1.3.3.2　连苯三酚红褪色光度法[ 9] 　往 10 m L 具塞比色管
中 ,依次加入 2 mL pH 9.1 的 Na2CO 3 —NaHCO3 缓冲溶液 ,
0.7 m L 0.003 8 mol/ L EDTA - Fe2 + 溶 液 , 3.5 mL
0.0001 mo l/ L连苯三酚红溶液 , 0.7 m L 体积分数 0.6 %
H2O2 溶液 ,蒸馏水补充至刻度后在 25 ℃保温反应 30 min(上
面每加一次均需摇匀), 测 544 nm 处的吸光度。设不加 H2O2
时的吸光度为 A 0 , 加入 H2O 2后的吸光度为 Ab , 则羟自由基
产生量可用 ΔA = A0 -A b来表征。 在体系中加 H2O2 之前
加入一定量的抗氧剂样品 ,测定其吸光度 As 。则抗羟自由基
氧化率 S 的计算
S P(%)=(A s-Ab)/(A0 -Ab)×100
2　结果与分析
2.1　蒌叶提取物对 6 种病原菌的抑菌活性　见表 1。
表 1　5种蒌叶提取物对 6种病原菌的抑菌活性
样品 浓度/
g·mL-1
藤黄球
菌/ cm
大肠杆
菌/cm
普通变形
杆菌/cm
金黄色葡
萄球菌/ cm
绿脓杆
菌/cm
佛氏痢疾
杆菌/cm
蒌叶茎 0.100 1.40 1.20 1.20 1.30 1.20 1.20
95%乙醇 0.050 1.15 1.00 1.10 1.20 1.10 1.05
提取物 0.025 1.10 1.00 1.05 1.20 1.05 1.05
蒌叶叶子 0.100 1.30 1.40 1.30 1.10 1.15 1.30
95%乙醇 0.050 1.15 1.20 1.30 1.05 1.10 1.20
提取物 0.025 1.10 1.10 1.10 1.05 1.10 1.05
蒌叶叶子 0.100 1.30 1.20 1.20 1.20 1.10 1.10
70%丙酮 0.050 1.05 1.20 1.10 1.15 1.05 1.05
提取物 0.025 1.10 1.05 1.05 1.10 1.05 1.00
蒌叶果实 0.100 1.40 1.25 1.30 1.40 1.35 1.20
70%丙酮 0.050 1.30 1.10 1.20 1.15 1.20 1.05
提取物 0.025 1.20 1.00 1.15 1.05 1.10 1.00
蒌叶果实 0.100 1.50 1.30 1.75 1.65 1.30 1.25
95%乙醇 0.050 1.20 1.20 1.30 1.45 1.20 1.10
提取物 0.025 1.00 1.15 1.20 1.10 1.10 1.00
　　注:滤纸直径为 1.0 cm
由表 1 可知 ,萎叶提取物对藤黄球菌 , 普通变形杆菌的抑
菌效果较明显 ,而对绿脓杆菌的抑菌效果相对较差;抑菌效果
与浓度呈正相关系;不同溶剂提取物对各种病原菌的抑菌程
度存在差异 ,乙醇提取物比丙酮提物的抑菌效果好;蒌叶不同
部位的抑菌活性不一样 , 蒌叶果实部分的抑菌活性相对较强。
2.2　蒌叶提取物抗氧化活性测定
2.2.1　DPPH 自由基捕获分光光度法研究　按实验方法加
入不同体积的 DPPH(质量浓度均为 1.05 g/ L), 测出 A i , A j ,
Ac ,计算出 A i -A j值 , 据此再计算出其相应的自由基清除率
K 。结果见图 1。
2.2.2　连苯三酚红褪色法对羟自由基的研究　按实验方法
加入不同体积的抗氧剂(质量浓度均为 1.05 g/ L , 测出 A s ,
A b , A 0 , 计算出(As – A b)/(A 0 – A b)值 ,据此再计算出其相
应的抗羟自由基氧化率。结果见图 2。
图 1　抗氧剂性能分析结果
1.蒌叶叶子 95%乙醇提取物;2.没食子酸;3.蒌叶果实 95%
乙醇提取物;4.蒌叶叶子 70%丙酮提取物;5.蒌叶果实 70%
丙酮提取物;6.蒌叶茎 95%乙醇提取物
图 2　抗氧剂用量表观抗羟自由基 S的影响
从图 1 、2 可知:随着抗氧剂用量的增加 , 其捕获的 DPPH
自由基和羟自由基也越多 , 抑制率上升 , 逐渐达到饱和状态。
所做的各抗氧化剂样品捕捉 DPPH 自由基和羟自由基的能力
次序为:蒌叶的叶子提取物>蒌叶果实提取物>蒌叶茎提取
物乙醇提取物 >丙酮提取物。
蒌叶果实乙醇提取物对 DPPH 自由基有很强的清除作
58 云 南 中 医 中 药 杂 志　　　　　　　　　　2011 年第 32 卷第 5 期
　　　　
用。其 IC50比茶叶的抗氧化性略高[ 10] 。由于身体在生命活动
的氧化代谢过程中会不断产生各种自由基 , 对人体造成不同
程度的损害 ,导致疾病的发生。而人工合成的抗氧化剂具有
一定的毒害作用[ 11] , 所以研究天然的抗氧化剂已成为必然
要求。
3　结论
采用 DPPH 自由基捕获法和联苯三酚红褪色法对蒌叶的
各种提取物进行了抗氧化研究结果表明蒌叶叶子部分乙醇提
取物具有较强的抗氧化活性;采用滤纸片琼脂扩散法进行抗
菌研究 ,结果表明蒌叶果实部分乙醇提取物具有更强的抗菌
作用。蒌叶物质资源丰富 , 有很大的发展潜力 , 这对于研究蒌
叶提取物在食品及医药行业的应用具有重要的意义 , 有望开
发成为天然防腐剂及药物。
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(收稿日期:2010-12-30)
＊基金项目:云南少数民族医药单方验方整理研究项目资助(编号:2007C0010Z)
　作者简介:代蓉(1976～ ), 女, 实验师 ,主要从事中药药理与应用研究工作。
芪花降糖方对四氧嘧啶致小鼠糖尿病模型的影响＊
代　蓉 , 段小花 , 李相融 , 林　青 , 淤泽溥
(云南中医学院 , 云南 昆明 650500)
　　摘　要:目的:研究民族药芪花降糖方对四氧嘧啶小鼠糖
尿病模型的影响。方法:小鼠尾静脉注射四氧嘧啶复制糖尿
病小鼠模型 ,以二甲双胍为阳性对照 ,研究芪花降糖方灌胃给
药对糖尿病小鼠血糖的影响。结果:芪花降糖方对糖尿病小
鼠有明显降血糖作用 , 与模型组比较差异有显著性意
义(P<0.05)。结论:芪花降糖方能降低糖尿病小鼠的血糖 ,
值得进一步深入研究。
关键词:芪花降糖方;糖尿病;血糖
中图分类号:R285 文献标识码:A
文章编号:1007-2349(2011)05-0059-02
芪花降糖方是本项目组在对云南民族药进行整理研究工
作中 ,收集到的治疗糖尿病的有效验方 ,由云南苗族药三七等
药物组成 ,为考察该方对糖尿病的作用 ,笔者复制了四氧嘧啶
糖尿病小鼠动物模型 , 并用该模型观察了该药的抗糖尿病作
用。现将实验结果报告如下。
1　实验材料
1.1　动物　健康昆明种小鼠 ,雄性 , 体重 18～ 22 g , 四川省医
学科学研究院动物研究所提供 , 生产许可证号:SCXK(川)
2008-24。生产批号:Dossy2010-7。
1.2　药品与试剂　芪花降糖方药物煎剂 , 由云南中医学院民
族医药研究中心提供 , 是由云南产三七等药组成的复方 ,按常
规方法制备供试药 , 临用前用蒸馏水配成所需浓度;二甲双胍
片 ,北京双鹤药业股份有限公司 , 090809;四氧嘧啶(Allox an),
Sigma-Aldrich 公司 , 1437801;葡萄糖氧化酶法测定试剂盒 ,
上海荣盛生物技术有限公司 , 20100501。
1.3　仪器　UV2250-紫外分光光度计 , 岛津公司(日本);
CF16 RXⅡ series 冷冻离心机 , HITACH I公司(日本)。
2　实验方法
2.1　四氧嘧啶致糖尿病小鼠模型复制　参照文献[ 1] 选用健
康雄性昆明种小鼠 , 禁食 6 h ,自由饮水 ,实验前测定正常小鼠
血糖值为 7.30 ～ 9.99 mmol/ L ,自尾静脉按 70 mg/kg 注入四
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