全 文 ：• 626 • 中华中医药杂志(原中国医药学报)2010年 4 月第25 卷第 4 期 CJTCMP, April 2010, Vol . 25, No.4
·研究报告·
不同产地狗肝菜中多糖的含量测定
傅鹏1，2，朱华3，杨世联4，严会文1
（1桂林医学院药学院生药学教研室，桂林 541004；2成都中医药大学药学院，成都 610075；3广西中医学院
药学院中药鉴定学教研室，南宁 530001；4南宁富莱欣生物科技有限公司，南宁 530003）
摘要：目的：考察不同产地狗肝菜中多糖的含量。方法：采用蒽酮-硫酸比色法测定不同产地狗肝菜中
多糖的含量。结果：在15-105μg范围内，葡萄糖μg数与吸光度A值线性关系良好，平均回收率为99.52%，
RSD=2.12%，R2=0.9997。不同产地的狗肝菜中多糖含量为5.77%-31.49%。结论：各产地狗肝菜中多糖含量差异较
大;野生品多糖含量高于栽培品；以广西桂林产狗肝菜中多糖含量为最高。
关键词：狗肝菜；蒽酮-硫酸法；多糖含量；不同产地
基金资助：国家自然科学基金资助项目（No.30860393）
Determination of polysaccharides in Dicliptera chinensis (L.) Nees from
various cultivation locations
FU Peng1,2, ZHU Hua3, YAGN Shi-lian4, YAN Hui-wen1
(1Teaching and Research Section of Pharmacognosy, Department of Pharmacy, Guilin Medical University, Guilin 541004, China;
2Department of Pharmacy, Chengdu University of TCM, Chengdu 610075,China; 3Teaching and Research Section of TCM,
Identifi cation Department of Pharmacy, GuangXi TCM University, Nanning 530001,China;
4Nanning Rich Leisching Bio-Technology Co., Ltd. , Nanning 530003,China)
Abstract: Objective: To explore the determine method of polysaccharides in Dicliptera chinensis (L.) Nees from various
cultivation locations. Methods: The content of polysaccharides in Dicliptera chinensis (L.) Nees was measured by Anthrone-H2SO4
colorimetry. Results: The mass of glucose (ug) and Abs were linear in the range of 15-105µg. The average recovery was 99.52%,
RSD=2.12%,R2=0.9997. The contents of polysaccharides in Dicliptera chinensi (L.)Nees from various cultivation locations varied
from 5.77%-31.49%. Conclusions: There was great different in polysaccharides content in Dicliptera chinensis (L.)Ness from
various cultivation locations. The content of polysaccharides in Dicliptera chinensi (L.)Nees of wild species was higher than
cultivated. The content of polysaccharides in Dicliptera chinensi (L.)Nees which were collected at Guilin City in Guangxi was the
highest.
Key words: Dicliptera chinensis (L.) Nees; Anthrone-H2SO4 colorimetry; Determination of polysaccharides; Various
cultivation locations
Fund assistance: National Natural Science Foundation (No.30860393)
通讯作者：朱华，广西中医学院药学院中药鉴定学教研室，邮编：530001，电话(传真)：0771-3922518，E-mail：zhuhua@glmc.edu.cn
狗肝菜为爵床科植物狗肝菜Dicliptera chinensi (L.)Nees的
干燥全草，其味苦、性寒，具有清热、凉血、利尿、解毒等功效，
临床常用于治疗热病斑疹、便血、溺血、小便小利、肿毒疔疮等
证[1]，主产于广西、广东、云南等地。据文献报道[2-3]，狗肝菜主
要含有多糖、有机酸、氨基酸等物质。相关研究发现[4-5]狗肝菜
多糖能使肝损伤动物血清活性显著降低，显示狗肝菜多糖具有
保肝作用。狗肝菜虽为单一品种，但分布较广，各产地药材之间
品质差异较大。本文采用了蒽酮-硫酸比色法[6-8]检测比较了3
省12个产地狗肝菜中多糖的含量，为更好地控制狗肝菜的质量
提供了实验依据。
材料
1. 药材 生药狗肝菜分别采自于广西（桂林、南宁、北
海、梧州、百色）、广东（广州、佛山、江门）、云南（易门、归
朝、剥隘），经朱华教授鉴定为爵床科植物狗肝菜Dicliptera
chinensis (L.)Ness.。粉碎成粗粉，按中国药典的要求，过5-6号
筛（80-100目）。
2 . 仪器与试剂 紫外-可见分光光度计（日本岛津
公司UV-2401PC）；95%乙醇（天津市大茂化学试剂厂，批
号：20080813），无水乙醇（天津市大茂化学试剂厂，批号：
20090917），氯仿（广东汕头市西陇化工厂，批号：0903012），
• 627 •中华中医药杂志(原中国医药学报)2010年 4 月第25 卷第 4 期 CJTCMP , April 2010, Vol . 25, No. 4
序号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
不同产地
桂林(野生)
南宁(野生)
梧州(野生)
南宁(栽培)
北海(野生)
百色(野生)
归朝(野生)
剥隘(野生)
易门(野生)
广州(野生)
江门(野生)
佛山(野生)
A
0.75
0.69
0.70
0.57
0.55
0.54
0.55
0.51
0.52
0.43
0.41
0.44
0.36
0.33
0.33
0.27
0.27
0.27
0.57
0.60
0.59
0.29
0.25
0.28
0.14
0.13
0.14
0.32
0.31
0.32
0.22
0.21
0.22
0.15
0.14
0.15
C(μg/mL)
17.32
15.90
16.16
13.06
12.77
12.52
12.68
11.74
12.09
9.915
9.486
10.18
8.33
7.55
7.59
6.08
6.12
6.22
13.19
13.91
13.63
6.65
5. 74
6.31
3.03
2.87
3.06
7.30
7.08
7.25
4.85
4.74
5.03
3.26
3.11
3.23
W(μg)
1 018 000
1 008 000
1 000 000
1 003 000
1 008 000
1 006 000
1 012 000
1 007 000
1 009 000
1 010 000
1 007 000
1 011 000
多糖含量
33.13%
30.42%
30.93%
25.23%
24.68%
24.19%
24.70%
22.88%
23.55%
19.26%
18.42%
19.77%
16.10%
14.58%
14.67%
11.78%
11.84%
12.04%
25.40%
26.77%
26.24%
12.86%
11.10%
12.21%
5.86%
5.54%
5.90%
14.08%
13.64%
13.99%
9.39%
9.16%
9.74%
6.28%
5.99%
6.22%
多糖平均含量
(31.49±1.44)%
(24.70±0.52)%
(23.71±0.92)%
(19.15±0.68)%
(15.12±0.85)%
(11.89±0.14)%
(26.14±0.69)%
(12.06±0.89)%
（5.77±0.20）%
(13.90±0.23)%
（9.43±0.29）%
（6.16±0.15）%
表1 不同产地狗肝菜中多糖的含量（n=3,%,x-±s）
正丁醇（天津市大茂化学试剂厂，批号：20090723），乙醇（天
津市大茂化学试剂厂，批号：20080910），丙酮（成都市科龙试
剂化工厂，批号：20081018），蒽酮（国药集团化学有限公司，
批号：20080506），浓硫酸（广东汕头市西陇化工厂，批号：
20070913），均为分析纯。
方法与结果
1. 狗肝菜多糖的提取与精制 称取狗肝菜粗粉50g，置圆
底烧瓶中，加石油醚(60-90℃)100mL，浸泡2h，回流提取1h，滤
过，滤渣挥干溶媒，以无水乙醇100mL回流提取2次，每次1h，滤
过，滤渣置圆底烧瓶中，加蒸馏水100mL回流提取2次，每次2h，
合并滤液，浓缩至50mL，Sevag法（氯仿:正丁醇=4:1）除蛋白后
加95%乙醇使含醇80%，静置过夜，抽滤，滤渣以乙醚、无水乙
醇、丙酮依次洗涤多次，得精制多糖，60℃烘干备用。
2. 溶液的配制
2.1 标准液的配制 精密称取105℃干燥至恒重的250mg，
蒸馏水溶解后定容至100mL。精确吸取此溶液1mL，置于25mL
葡萄糖标准品容量瓶中，稀释至刻度摇匀（含葡萄糖100μg/
mL），备用。
2.2 0.2%蒽酮－浓硫酸溶液的配制 取蒽酮0.4g，用浓硫酸
溶解并定容至200mL，置棕色瓶内放冰箱中备用。
3. 最大吸收波长的选定 精密吸取葡萄糖溶液0.5mL，置
10mL具塞试管中，用蒸馏水补充至2mL，加入4mL 0.2%蒽酮－
浓硫酸溶液，摇匀，置沸水浴中加热10min，取出置冰水浴中
冷却至室温。另以蒸馏水2mL同法操作，为空白对照。用分光
光度计在550-700nm波长处测定吸光度，确定最大吸收波长为
625nm。
4. 标准曲线的绘制 分别准确吸取标准溶液0.15、0.3、0.45、
0.6、0.75、0.9、1.05mL于具塞试管中 ，用蒸馏水补充至2mL，以蒸
馏水作空白，每管加入4mL 0.2%蒽酮－浓硫酸溶液，摇匀，沸水加
热 10min，取出置冰水浴中冷却至室温，于625nm处测定吸光度
值(A)，经计算得回归方程:A=0.0426C+0.0098，R2=0.9997。结果显
示，葡萄糖对照品在15-105μg内线性关系良好。
5. 方法学考察
5.1 稳定性 取精制多糖溶液2.0mL，照“4”标准曲线制
备项下方法，采用蒽酮－硫酸比色法分别于0、10、20、30、
40、60、70、80、90、100min测定吸收度，吸收度平均值为0.51，
RSD=0.906%，表明本法在100min内具有良好的稳定性。
5.2 精密度 取标准品溶液，照“4”标准曲线制备项下方
法，重复测定6次，吸收度平均值为0.53，RSD=0.0407%，表明
仪器精密度良好。
5.3 重现性 取同一批药材粉末6份，精密称定，按样品溶液
的配制项下操作，从200mL中取0.25mL样品液于具塞试管中，用
蒸馏水补充至2mL，采用蒽酮－硫酸比色法测定吸收度，测得吸
收度平均值为0.55，RSD=2.06%，表明本法重现性良好。
5.4 加样回收率 取狗肝菜粗粉6份，每份约1g，精密称
定，精密加入对照品葡萄糖70mg，按样品测定项下操作，测定
吸收度，计算回收率＝（测出量－样品含量）/对照品量×100%。
平均回收率为99.52%，RSD=2.12%。
• 628 • 中华中医药杂志(原中国医药学报)2010年 4 月第25 卷第 4 期 CJTCMP, April 2010, Vol . 25, No.4
6. 换算因子的测定 精密称取多糖10mg，溶于200mL容
量瓶中，稀释至刻度，摇匀。精密吸取此溶液2mL于具塞试管
中，按照 4项下的方法分别测定吸光度，根据回归方程计算多
糖溶液中葡萄糖的浓度，按下式计算出换算因子f =W/（C•D）
=4.058。式中，W为多糖质量 (μg)；C为样品液中葡萄糖的浓度
(μg/mL)；D为稀释倍数。
7. 不同产地狗肝菜多糖含量测定
7.1 样品溶液的配制 精密称取不同产地样品1g，每个产地
平行称取3次，置圆底烧瓶中，加石油醚(60-90℃)20mL，浸泡
2h，回流提取1h，滤过，滤渣挥干溶媒，以无水乙醇20mL回流提
取2次，每次1h，滤过，滤渣置圆底烧瓶中，加蒸馏水100mL回流
提取2次，每次2h，合并滤液，然后定容至 200mL，制成样品液。
7.2 多糖含量的测定 精密吸取各样品溶液0.25mL于具塞
试管中，按照“4”项下的方法分别测定吸光度，由回归方程计
算样品液中葡萄糖浓度，按公式：含量(%) = (C·D·f/W)×100%，
计算各产地样品中狗肝菜多糖的含量。其中，C为样品液中葡萄
糖的浓度；D为稀释倍数；f为换算因子；W为样品质量（μg）。
各产地狗肝菜中多糖含量差异见表1。
讨论
据文献[4]报道，狗肝菜多糖能使肝损伤大鼠血清丙氨酸转
氨酶(ALT)及天冬氨酸转氨酶(AST)活性显著降低，具有保肝作
用。本研究对我国不同主产地的狗肝菜进行了多糖含量比较
研究，将狗肝菜多糖的含量作为评价狗肝菜药材质量的指标之
一，对于筛选优良的狗肝菜种质资源和种植区划研究具有实际
意义，促进狗肝菜药用资源的综合开发与利用。
为提供多糖含量测定的稳定性和重复性，一方面要进行
测定方法的比较研究，如本研究采用苯酚－浓硫酸法和蒽酮－
浓硫酸法比较后表明，狗肝菜含量测定以蒽酮－浓硫酸法为
佳；另一方面，在进行紫外测定多糖含量时，应尽量调节多糖
浓度，使吸收度A值落在0.2-0.7范围内，以减少误差。此外，
在狗肝菜多糖的含量测定中，因难以得到相应的多糖对照品，
而常以葡萄糖代替对照品来表示多糖的相对含量，故应注意
运用单糖和多糖的换算因子计算药材中多糖。
参 考 文 献
[1] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草(7).上海:
上海科学技术出版社,1999:457-458
State Administration of Traditional Chinese Medicine Editorial
Board in Chinese Materia Medica. Chinese Materia Medica
(7).Shanghai:Shanghai Scientific and Technical Publishers,
1999:457-458
[2] 江苏新医学院.中药大辞典.上海:上海人民出版社,1977:1424
Jiangshu New Medical College.Chinese Materia Medica Dictionary.
Shanghai: Shanghai People,s Publishers,1977:1424
[3] 高毓涛,杨秀伟,艾铁民.狗肝菜的化学成分研究.中草
药,2007,38(1):14-17
GAO Yu-tao,YANG Xiu-wei,AI Tie-min.Chemical constituents of
Dicliptera chinensis (Linn.) Nees. Chinese Traditional and Herbal
Drugs, 2007,38(1):14-17
[4] 李 海 燕 , 王 旭 深 . 狗 肝 菜 多 糖 保 肝 作 用 研 究 . 中 药
材,2006,29(8):833-834
LI Hai-yan,WANG Xu-shen.Studies on liver protection of
polysaccharide of Dicliptera chinensis(L.).Journal of Chinese
Medicinal Materials,2006,29(8):833-834
[5] 冯小映,周诚,黄恩,等.狗肝菜多糖含量的测定.中药
材,2003,26(9):643-644
FENG Xiao-ying,ZHOU Cheng,HUANG En,et al.Determination of
contents of polysaccharide of Dicliptera chinensis (L.). Journal of
Chinese Medicinal Materials, 2003,26(9):643-644
[6] 孙磊,乔善义,赵毅民.黑骨藤多糖含量测定方法研究.中国中
药杂志,2009,34(10):1241-1244
SUN Lei,QIAO Shan-yi,ZHAO Yi-min.Studies on content
determination methods of polysaccharides in Periploca calophylla.
Chinese Archives of TCM, 2009,34(10):1241-1244
[7] 苗艳艳. 库拉索芦荟多糖的提取纯化及含量测定. 中华中医
药学刊,2009,27(10):2173
MIAO Yan-yan.Extraction,purification and determination of the
polysaccharide of Aloe barbadensis.Chinese Archives of TCM,
2009,27(10):2173
[8] 林慧彬,路俊仙,陈兵,等. 我国不同种质黄芩多糖含量的比较
研究,2010,25(1):149-151
LIN Hui-bin,LU Jun-xian,CHEN Bin,et al.Quality comparative
study on different germplasm of baicalin in China. China Journal of
TCM and Pharmacy, 2010,25(1):149-151
（收稿日期：2009年9月6日）