全 文 ：毒范畴;黄芪具有补气固表 、利尿 、托毒排脓 、敛疮生肌之功能 ,降
低 UC患者血清 MDA的水平 ,升高血清 SOD的水平 ,说明黄芪具
有消除炎症反应 、清除 OFR, 促进溃疡愈合的作用 [ 7] ;丹参可以
扩张血管 、降低血黏度 、清除氧自由基 [ 8] 。两者配伍可以使病情
得到控制 , 取得良好治疗效果的时间大为缩短 , 减少了糖皮质激
素的剂量 , 减少了并发症发生的可能 , 值得在临床进一步推广。
参考文献:
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收稿日期:2006-11-07;　修订日期:2007-02-14
作者简介:陈瑞娇 (1969-),女(汉族),广东南雄人 ,现任韶关学院英东生
物工程学院讲师 ,硕士学位 ,主要从事植物活性成分的研究工作.
辣木叶中多糖含量的测定
陈瑞娇 , 彭珊珊 , 王玉珍 , 梁汉球
(韶关学院 英东生物工程学院 ,广东 韶关　512005)
摘要:目的 测定辣木叶中多糖的含量。方法 采用精制辣木叶多糖测得辣木叶多糖对葡萄糖的换算因子后 , 采用蒽酮
-硫酸比色法测定 , 测定波长为 620 nm。结果 韶关新丰引种栽培辣木中多糖含量为 4. 85%,供试液在 4 h内显色稳定 ,
平均回收率为 98. 72%, RSD =1. 88%(n=4)。结论 此测定方法简便可行 , 可作为辣木叶中多糖的含量测定方法。
关键词:辣木叶;　多糖;　蒽酮-硫酸法
中图分类号:R284. 1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)07-1770-02
Determ ination of Polysaccharide in Leaves ofM oringa oleifera
CHEN Rui-jiao , PENG S han-shan, WANG Yu-zhen, LIANG H an-qiu
(Y ingdong College of B ioeng ineering , Shaoguan University , Shaoguan Guangdong , 512005, China)
Abstract:Objective To dete rm ine the conten ts of polysaccha ride in leaves ofMoringa oleifera. M ethods A fte r the conversion
coe fficien t o fMoringa oleifera po ly saccharide s to g lucose w as obtained, contents w ere de te rm ined by an throne -H2 SO4 color im e-
try. W aveleng th fo rm easurem en t w as 620nm. Resu lts The contents of Po ly saccharide in leaves ofMoringa oleifera planted in
Shaoguan County o fGuangdong P rovince was 4. 85%, the co lo r o f the trea ted sam plew as stable in 4h and ave rage va lue of the re-
covery fo rPo lysaccharide mea surem ent was 98. 72% w ith 1. 88% o fRSD(n =4). Conc lu sion The m ethod used in this paper is
simp le. I t can be used for de te rm ina tion o f the po ly saccharide in leaves o fMoringa oleifera.
Key words:Leave s ofMoringa oleifera;　Polysaccha rides;　An throne - su lfu ricac id me thod
　　辣木 Moringa oleifera为辣木科辣木属植物 ,原产于印度北部
喜马拉雅区域 [ 1] , 全株均可利用 , 叶 、花 、豆荚富含蛋白质 、维生
素 A、维生素 B
6
、维生素 C、维生素 E、叶酸 、泛酸及钙 、钾 、铁等营
养成分 , 不仅是发达国家素食者的理想食物 , 还是贫穷地区妇女
和儿童的天然营养库 。印度传统医学认为 ,辣木叶有护肝 、利尿 、
消炎 、止痛 、降压 、强心 、催乳等功效。常用来预防和治疗糖尿病 、
高血压病 、皮肤病 、免疫力弱 、贫血 、坏血病 、肥胖症 、关节炎 、消化
器官肿瘤等疾病 [ 2] 。
植物多糖是由许多相同或不同的单糖以 α-或 β-糖苷键所组
成的化合物 , 普遍存在于自然界植物体中 , 大量研究表明多糖除
了有调节免疫功能 、抗肿瘤的生物学效应外 , 还具有降血糖 、降血
脂和降胆固醇等生理功能。近年来 , 辣木在我国广东 、云南和海
南等都有引种栽培 , 其活性成分研究和产品的开发成为热点。本
文用精制辣木叶多糖测得辣木叶多糖对葡萄糖的换算因子 ,然后
将经 90%乙醇处理脱杂后的辣木叶用水提取多糖 , 蒽酮 -硫酸
法比色测定 , 该法准确性好 、简便可行。为辣木的合理开发和利
用提供了科学依据。
1　材料
1. 1 　原料 辣木叶采自韶关市新丰县东林农业开发有限公司种
植场。 50℃干燥后 , 粉碎 ,过 40目筛 , 备用。
1. 2　试剂 蒽酮 、浓硫酸 、无水乙醇 、丙酮等均为国产分析纯;葡
萄糖对照品为分析纯;AB -8型大孔树脂购于天津南开大学。
1. 3　仪器 HH -W 420数显三用恒温水浴锅 (江苏省金坛市荣
华仪器制造有限公司);R201旋转蒸发器 (上海申生科技有限公
司);SHZ - 3循环水真空泵(上海华光仪器仪表厂);3K18超速
冷冻离心机(美国 Sigm a公司);U ltrospec 2000紫外 /可见分光光
度计(Am ersham Pha rmac ia B io tech公司)。
2　方法
2. 1　辣木叶多糖的提取与精制 称取辣木叶粉 60 g,分别加 20,
15, 10倍蒸馏水(w /w)于 80℃水浴上提取 3次 , 1. 5 h /次 ,过滤 ,
合并滤液 ,离心分离(4 000 r /m in, 4℃, 10 m in),上清液浓缩至一
定体积后 , Sevage法除蛋白 , 反复进行 8次至无蛋白层 , 采用
H2O 2氧化法去色素 。然后逆流水透析 48 h, 蒸馏水透析 24 h, 透
析液浓缩 , 上 AB - 8型大孔吸附树脂柱 ,以蒸馏水洗脱 , 洗脱至
洗脱液加入 95%乙醇无沉淀为止。将洗脱液浓缩至小体积后加
入无水乙醇使含醇量达到 80%,于 4℃冰箱中过夜醇沉 , 再离心
分离(4 000 r /m in, 4℃, 10 m in),沉淀依次用无水乙醇 、丙酮反复
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时珍国医国药 2007年第 18卷第 7期 LISH IZHEN MED IC INE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2007 VOL. 18 NO. 7　
洗涤多次 , 50℃低温干燥至恒重 ,即得精制辣木叶多糖。称重 ,计
算得率 , 备用。
2. 2　标准曲线的绘制 [ 3]
2. 2. 1 　标准溶液的配制 精密称取干燥至恒重的葡萄糖 0. 100
0 g,以蒸馏水定容至 100 m l的容量瓶中 , 摇匀 , 精密吸取该溶液
10 m l于 100 m l容量瓶中 ,用蒸馏水定容 ,摇匀 , 即得葡萄糖标准
液 , 浓度为 0. 1 mg /m l。分别精密吸取储备液 1, 2, 3, 4, 5 m l置 10
m l容量瓶中 ,以蒸馏水稀释定容摇匀 , 得系列对照品溶液。
2. 2. 2　蒽酮 -硫酸试液的配制 取 0. 2 g蒽酮 , 加 100 m l浓硫
酸 , 置于棕色瓶中 ,混合摇匀置于冰箱中(现配现用)。
2. 2. 3　标准曲线的绘制 精密吸取上述系列对照品溶液 1 m l ,
置于 10 m l具塞试管中 ,冰水浴 5 m in, 加入 0. 2%硫酸蒽酮试液
4m l摇匀 ,立即置于沸水浴加热 10 m in, 取出用冷水冷却至室温 ,
室温放置 10 m in左右 , 于 620 nm处测定吸收度 ,另精密吸取蒸
馏水 1 m l,同法操作 , 作为空白对照。以吸光度 (A)为纵坐标 ,葡
萄糖对照品浓度(C)为横坐标 , 得葡萄糖标准曲线 (见图 1), 线
性回归得回归方程 A = 5. 811 4C + 0. 002 4, 相关系数 r
=0. 999 0。
图 1　葡萄糖标准曲线
2. 3　换算因子的测定 精密称取干燥至恒重的精制辣木叶多糖
0. 010 0 g,用水溶解于 100 m l容量瓶中 , 用蒸馏水稀释至刻度 ,
摇匀得精制辣木叶多糖贮备液 , 精密吸取精制多糖贮备液 1m l,
蒽酮 -硫酸法测定其吸光度(A), 从回归方程求出精制辣木叶多
糖贮备液中葡萄糖浓度 ,按下式计算换算因子。
换算因子 f =W /(C D)
式中:W为称取多糖的重量(m g), C为精制辣木叶多糖贮备
液中葡萄糖浓度(m g /m l),D 为多糖的稀释倍数。
2. 4　样品中辣木叶多糖的含量测定
2. 4. 1　样品溶液的制备 准确称取 40目辣木叶粉末 1. 000 g,置
索氏提取器中 , 加入 90%乙醇回流提取 7 h,药渣挥尽乙醇 , 连同
滤纸于烧瓶中 , 加蒸馏水 250 m l, 80℃水浴加热提取 1. 5 h, 趁热
过滤 , 残渣用 80℃热蒸馏水洗涤 3次 , 洗液并入滤液中 , 冷却后
移入 500 m l容量瓶定容。
2. 4. 2　样品溶液中辣木叶多糖含量测定 精密吸取 2. 4. 1所得
样品溶液 1 m l,用蒽酮 -硫酸法测吸光度(A)。由回归方程计算
供试液中葡萄糖浓度 (C),按下式计算样品中辣木叶多糖含量。
辣木叶多糖含量 (%)=C×D ×f
W ×1000×100%
式中:C为样品溶液中葡萄糖浓度(mg /m l), D 为样品溶液
的稀释倍数 , f为换算因子 ,W 为供试辣木叶的重量(g)。
2. 5　稳定性实验 精密吸取按 2. 4. 1项下方法制备的样品溶液
1 m l, 按照 2. 2. 3项下的方法测定吸光度(A),每隔 1 h测定 1次 ,
连续 4 h考察其稳定性。
2. 6 　加样回收率测定 精密吸取同批 4份已知含量的辣木叶粉
末(过 40目筛)各 1 g, 精密加入精制多糖样品 5 mg, 然后按
2. 4. 1项样品液的制备和 2. 2. 3标准曲线项下方法测定吸收度
(A), 根据 2. 4. 2 项中得出的结果辣木叶中多糖的含量为
4. 85%,计算回收率。
3　结果
3. 1　精制辣木叶多糖的得率 60 g干燥的辣木叶粉末制得精制
辣木叶多糖(1. 505±0. 088)g,得率为 (2. 508±0. 147)%(n=4)。
3. 2　换算因子 f =3. 13。
3. 3　辣木叶多糖含量的测定结果 测得该辣木叶样品中多糖含
量为 4. 85%。
3. 4　稳定性实验 测定结果见表 1。结果表明样品溶液在 4 h
内显色基本稳定 ,其吸光度相对标准偏差 RSD =4. 31%。
3. 5 　加样回收率 结果见表 2。
4　讨论
蒽酮-硫酸法是测定多糖含量的经典方法 , 本实验首先用
90%乙醇回流以除去单糖 、低聚糖 、生物碱 、苷类及其它醇溶性的
干扰成分 ,再用水提取多糖成分。蒽酮 -硫酸法测定辣木叶多糖
的原理是辣木叶多糖在浓硫酸的作用下 , 先水解为单糖 , 迅速脱
水形成糠醛衍生物 ,其与蒽酮缩合为蓝色化合物 , 该化合物颜色
深浅与糖的浓度成正比。在 620 nm 处有特征吸收。本法简单 ,
且供试液在 4h内显色稳定 , 灵敏度高。
表 1　辣木叶多糖含量测定稳定性实验结果
时间 t /h 吸光度(A)
0 0. 741
1 0. 71
2 0. 786
3 0. 71
4 0. 752
表 2　加样回收率测定结果
取样量
m /g
原含量
m /mg
加样量
m /mg
测得量
m /mg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1 48. 5 10. 04 58. 21 96. 71
1 48. 5 10. 13 58. 75 101. 18 98. 72 1. 88
1 48. 5 10. 34 58. 66 98. 26
1 48. 5 10. 27 58. 64 98. 73
在多糖含量测定中 ,得到相应多糖对照品较困难 ,因多糖组
成比较复杂 , 往往采用单糖如葡萄糖代替对照品 , 测定样品多糖
的相对含量。本实验中采用 Sevage法除蛋白 , H2O2氧化法去色
素 , 利用 AB-8型大孔吸附树脂柱对多糖进行纯化 , 获得比较纯净
的多糖 。然后用精制多糖计算葡萄糖与辣木叶多糖的换算因子 ,
这样可避免用葡萄糖做标准引起的系统误差 ,结果准确真实 。
研究结果表明 , 韶关新丰引种栽培的辣木中多糖含量为
4. 85%。张涛等 [ 5]采用苯酚 -硫酸分光光度法测定辣木中多糖
含量为 15. 36%,其测定结果与本研究有较大差异 , 原因可能与
测定方法 、辣木产地 、辣木叶采集时间 、采集部位等因素有关。
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LISH IZHEN M EDIC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2007 VOL. 18 NO. 7 时珍国医国药 2007年第 18卷第 7期