全 文 ：收稿日期:2012 － 05 － 23
基金项目:教育部博士点基金(20093515120005) ;福建省自然基金资助项目(2012J01088) ;福建省科技厅重点项目
(2009N0016)。
作者简介:倪建成(1987 － ) ，男，硕士研究生。研究方向:天然产物化学。Email:827561933 @ qq． com。* 通讯作者
谭庆伟(1981 －) ，男，博士，讲师。研究方向:天然产物化学。Email:hotony@ 163． com。
小叶女贞叶片提取物药用活性研究
倪建成，吕述权，丁 骁，谭庆伟*
( 1．福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室，福建 福州 350002;
2．福建农林大学植物病毒研究所，福建 福州 350002)
摘要:对小叶女贞叶片提取物进行体外抗菌、细胞毒性以及抗氧化药用活性研究，结果表明，小叶女贞叶片提
取物对铜绿假单胞菌 PAO1 具有较强的抑制作用，最小抑制浓度(MIC)为 8． 0 mg /mL;对人肝癌细胞 BEL-
7404 体外增殖具有显著的抑制作用，浓度在 0．6 mg /mL时，抑制率达 94．2 %;同时具有较强的 DPPH 自由基
清除能力，浓度为 15．1 μg /mL时，清除率为 85．9%。活性跟踪测试表明，小叶女贞叶片提取物干柱层析得到
的各组分中，低极性组分 Fr．1 为活性部分。
关键词:小叶女贞;抑菌;细胞毒;抗氧化
中图分类号:Q946．8 R282．71 文献标识码:A 文章编号:1001 － 4276 －(2012)01 － 0128 － 05
Antibacterial，cytotoxic and antioxidant activity of leave extract
from Ligustrum quihoui Carr．
Jian-Cheng NI，Shu-Quan LV，Xiao DING，Qing-Wei TAN
(1． Key Laboratory of Biopesticide and Chemical Biology，Ministry of Education，Fujian Agriculture and Forestry
University，Fuzhou，Fujian 350002，China;2． Institute of Plant Virology，Fujian Agriculture and Forestry
University，Fuzhou，Fujian 350002，China)
Abstract:The aqueous extract of Ligustrum quihoui leaves was tested for antibacterial，cytotoxic and antioxidant ac-
tivities． The results indicated that the aqueous extract possessed a notable inhibitory effect toward Pseudomonas aerug-
inosa PAO1 with MIC 8．0 mg /mL． MTT assay showed that the aqueous extract presented significant inhibition on pro-
liferation of human hepatocellular carcinoma cell BEL-7404，with an inhibitory rate of 94．2% at the concentration of
0．6 mg /mL． And the results of antioxidant activity showed that the aqueous extract exhibited strong scavenging capac-
ity，with a DPPH clearance rate of 85．9% at the concentration of 15．1 g /mL．
Key words:Ligustrum quihoui Carr．;Antibacterial;Cytotoxicity;Antioxidant
小叶女贞(Ligustrum quihoui Carr．)又名小白蜡，为木犀科(Oleaceae)女贞属(Ligustrum)
植物，主要分布于我国华北、华中和西南地区。其叶入药，具清热解毒等功效，治烫伤、外伤，树
皮入药治烫伤。近年来的研究表明，小叶女贞提取物具有显著的增强机体免疫力、止咳平喘及
清除自由基等作用(韩兆东等，2008;邱世翠等，2003;杨肇亨等，1996;徐向田，2009;洪新，
1995)。
1 材料与方法
1．1 试验材料
小叶女贞叶采自福建农林大学校园，经福建农林大学植保学院欧阳明安研究员鉴定;铜绿
第 28 卷 武 夷 科 学 Vol． 28
2012 年 10 月 WUYI SCIENCE JOURNAL Oct． 2012
DOI:10.15914/j.cnki.wykx.2012.00.012
假单胞菌 PAO1 由中科院城市环境研究所馈赠;人肝癌细胞系 BEL-7404 由福建协和医院肝胆
研究所提供。
1．2 试验方法
1．2．1 小叶女贞叶片提取物的制备及初步分离 干燥小叶女贞叶片(5 kg) ，采用煎煮法，煮
沸 30 min，取煎煮液合并，减压浓缩得到粗提物。将粗提物用适量水溶解，采用大孔吸附树脂
D101 除糖后，通过干柱层析(100 － 200 目硅胶，氯仿 /甲醇 /水 = 8:2:0．2) ，TLC 检测合并相同
流分得到 Fr．1 － Fr．6 共 6 个组分。
1．2．2 抗菌活性检测 将小叶女贞叶片提取物用 MH培养基稀释成不同浓度的供试溶液，过
滤除菌后，4℃密封保存，备用。采用微量肉汤稀释法，参考 NCCLS 抗菌药物敏感性试验操作
标准，对小叶女贞叶提取物抗菌活性进行评价。以在孵育 24 h和 48 h小孔内完全抑制细菌生
长的最低药物浓度分别为 MIC和 MBC。
1．2．3 体外细胞毒性测定 采用 MTT法(Twentyman PR et al．，1989)测定样品对人肝癌细胞
系 BEL-7404 增殖的抑制作用。将小叶女贞叶片提取物用细胞培养液配制成不同浓度的溶
液，每样品 6 个重复，设置阳性对照(5-Fu，50 g /mL) ，阴性对照(单细胞悬液)和空白对照(细
胞培养液)。用酶标仪测定 570 nm波长下吸光值，并计算抑制率，参照如下公式:
抑制率% =［1 －(OD处理 － OD空白)/ (OD对照 － OD空白) ］× 100
其中 OD处理为处理组吸光度的平均值;OD对照为阴性对照组吸光度平均值;OD空白为
空白对照组吸光度平均值。
1．2．4 DPPH自由基清除作用的检测 DPPH 自由基是一种很稳定的以氮为中心的自由基，
其乙醇水溶液呈很深的蓝紫色，在 517 nm处有强吸收，其颜色的变化随被清除的程度而变化，
通过测量 517 nm处的吸光度可以动态监测 DPPH自由基被清除的效果。
根据 Jamila等方法(Jamila HS et al．，2011) ，称取 3．9 mg DPPH，加入 100 mL无水乙醇配
成 0．1 M DPPH溶液;取洁净的并作避光处理的 10 mL 离心管，样品组加入 1 mL 不同浓度的
样品溶液和 1 mL的 DPPH溶液，阴性对照为 2 mL的 DPPH溶液，空白对照为 2 mL的含样品
溶剂，以相同体积的抗坏血酸(VC)溶液代替待测样品阳性对照组，每样品 6 次重复;将离心管
置于恒温振荡培养箱避光振荡，然后通过酶标仪测定 517 nm处的吸光度。
DPPH清除率% =(1 － OD处理 / OD空白) × 100
其中 OD处理为不同浓度各组分处理吸光度的平均值;OD对照为阴性对照组吸光度的平
均值;OD空白为空白对照组吸光度的平均值。
2 结果与分析
2．1 抗菌活性
小叶女贞对铜绿假单胞菌 PAO1 有一定的抑制作用，12 h 内，5 mg /mL 即可抑制其生长;
24 h后，8 mg /mL浓度时，肉眼可见没有细菌的生长，可表明小叶女贞对铜绿假单胞菌 PAO1
的 MIC为 8 mg /mL。经过 36 h和 48 h的培养后，9 mg /mL时，细菌的生长继续受到抑制，由此
可以得出，小叶女贞粗提物溶液的 MBC为 9 mg /mL。
对小叶女贞叶片提取物初步分离得到的各组分 Fr． 1 － Fr． 6 进行抗菌活性检测，结果(表
·921·第 27 卷 倪建成等:小叶女贞叶片提取物药用活性研究
1)表明，培养 12 h，2 mg /mL 浓度处理下，Fr． 1 表现出抑菌活性，其余部分都有菌生长;培养
24 h，Fr．1 在 4 mg /mL时有抑菌活性，MIC为 4 mg /mL;培养 36 h，Fr．1 在 6 mg /mL表现出抑菌
活性，其余部分都丧失抑菌活性;培养 48 h，Fr．1 在 6 mg /mL仍表现出抑菌活性。由此确定了
小叶女贞对铜绿假单胞菌 PAO1 的抑制活性组分为低极性组分 Fr．1。
2．2 抗肿瘤活性
采用 MTT法测试小叶女贞叶粗
提物和以及初步分离得到的 6 个组
分 Fr．1 － Fr． 6 对人肝癌细胞 BEL －
7404 细胞毒活性。结果(图 1)表
明，粗提物对人肝癌细胞 BEL-7404
体外增殖具有明显的抑制作用，供试
浓度 0． 6 mg /mL 时，抑制率仍达到
94．2%，但在 0．4 mg /mL剂量下抑制
效果减弱，抑制率为 62．9%。
表 1 小叶女贞提取物各组分对铜绿假单胞菌 PAO1 抑菌作用
Table 1 Antibacterial effect of Fr．1 － Fr．6 against PAO1
组分 MIC(mg /mL) MBC(mg /mL)
Fr．1 4 6
Fr．2 10 10
Fr．3 10 10
Fr．4 8 8
Fr．5 8 8
Fr．6 8 8
Fr．1 显示出较高的活性(图 2) ，在 0．4 mg /mL剂量下，抑制率为 91． 3%，在 0． 2 mg /mL剂
量作用下，抑制率仍达到 87．8%，同等条件作用下，阳性对照(50 μg /mL 的 5＇－ Fu)抑制率为
95．1%。上述结果显示，小叶女贞叶片提取物具有显著的抑制肿瘤细胞增殖活性，对其活性组
分有必要进一步研究。
图 1 小叶女贞叶片粗提物细胞毒活性(BEL-7404)
Figure 1 Cytotoxicity of aqueous extract of Ligustrum quihoui leaves
图 2 小叶女贞不同组分细胞毒活性(BEL-7404)
Figure 2 Cytotoxicity of Fr．1 － Fr．6 against BEL-7404
2．3 抗氧化活性
设置浓度梯度，分别测定 VC、小叶女贞粗提物及各部分对 DPPH自由基的体外清除作用，
实验结果表明(图 3)小叶女贞粗提物具有较高的 DPPH 自由基清除能力，同阳性对照 VC 相
比，小叶女贞粗提物清除率略低于 VC，但随着浓度的增加，两者清除率几乎相当，在
500 μg /mL时，清除率在 96%左右(VC 为 96．6%，小叶女贞叶片提取物为 95．4%)。
干柱层析得到的小叶女贞各组分对 DPPH 自由基仍保持较高的清除活性(图 4) ，在
·031· 武 夷 科 学 第 28 卷
250 μg /mL时，Fr．1、Fr．2、Fr．3、Fr．5、Fr．6 清除率分别 89．5%、88．9%、92．7%、92．9%、93．6%;
在 50 μg /mL时，Fr．1、Fr．2、Fr．3、Fr．5、Fr．6 清除率分别 87．3%、84．3%、88．1%、85．0%、32．5%，
除了 Fr．6 清除率下降之外，其他组分基本上与同浓度的粗提物相当。结合相关文献以及上述
结果可推测，小叶女贞对 DPPH自由基具有清除作用的活性物质为多种化合物，一种可能是不
同结构类型的化合物，另一种是同种结构类型的不同衍生物，并且相互之间可能会有相互协同
作用。
图 3 小叶女贞粗提物和 VC清除 DPPH自由基作用
Figure 3 DPPH free radical scavenging activity of VC and leave
extract from Ligustrum quihoui
图 4 小叶女贞不同组分对 DPPH自由基清除能力
Figure 4 DPPH free radical scavenging activity of Fr．1 － Fr．6
3 小结与讨论
女贞属植物作为中药应用已有 2000 年的历史，实载于《神农本草经》我国民间常采其鲜
嫩枝叶捣烂敷于伤口上，以防止感染。现代诸多研究发现，女贞属植物多种次生代谢产物具有
不同的药用活性，如齐墩果酸、熊果酸(三萜类化合物)具有抗肿瘤活性，橄榄苦甙等具有利尿
作用，一些裂环环烯醚萜类和黄酮类具有抗氧化活性。
本研究证实小叶女贞叶片提取物具有抗菌、抗肿瘤以及抗氧化作用，有必要对其活性成分
进行分离鉴定;并且通过对粗提物粗分和活性跟踪测试初步确定了小叶女贞的药理活性组分，
这为我们进一步研究其活性成分提供了依据。
参考文献
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洪新，杨肇亨，周向东． 1995． 小叶女贞提取物 － M2 自由基清除剂作用的实验研究． 第三军医大学学报，17
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·131·第 27 卷 倪建成等:小叶女贞叶片提取物药用活性研究
邱世翠，孙丰润，韩兆东，张群，王志强． 2003． 小叶女贞对小鼠骨髓细胞增殖和 IL － 1 的影响． 中国中医药科
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杨肇亨，周向东，洪新，段绪伟，谢义霞，王志强． 1996．静脉注射小叶女贞提取物 M2 对 67 例慢性阻塞性肺疾
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Twentyman PR，Fox NE，Rees JK． 1989． Chemosensitivity testing of fresh leukemia cells using the MTT colorimetric
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·231· 武 夷 科 学 第 28 卷