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江西野桂花蜂蜜对动物免疫力及降血脂功能的影响



全 文 :江西野桂花蜂蜜对动物免疫力及降血脂功能的影响
张丽珍 颜伟玉 王子龙 曾志将 *
(江西农业大学蜜蜂研究所 南昌 330045)
摘要 探讨野桂花蜂蜜对小鼠免疫力及大鼠降血脂功能的影响。 设计高、中、低 3 个剂量组,对雌性小鼠、雄性
大鼠每天灌胃野桂花蜂蜜。对照组给予同量的超纯水。每周同一时间观察和称重。41 d 后分别检测小鼠的体重、
脏器比重、脾淋巴细胞转化及 NK 细胞活性以及大鼠的体重、食物利用率、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及
高密度脂蛋白(HDL-C)。 试验结果表明:高剂量组[8 400 mg/(kg bw·d))的小鼠 NK 细胞活性显著高于对照组
(P<0.05),而体重、脏器比重及脾淋巴细胞转化各剂量组均无显著差异(P>0.05)。 高剂量组、中剂量组及低剂量
组与对照组相比,大鼠血清 TC、TG 均有所下降,且差异不显著;体重、食物利用率及 HDL-C 也无显著差异。
关键词 野桂花蜂蜜; 雌性小鼠; 雄性大鼠; 免疫力; 降血脂功能
文章编号 1009-7848(2013)04-0028-05
蜂蜜是工蜂采集植物的花蜜或分泌物, 经过
充分酿造而贮藏在巢脾内的甜物质 [1]。 据记载有
“安五脏,益气补中,止痛解毒,除众病,和白药,久
服轻身延年”的功效[2]。现代研究表明,蜂蜜具有多
种医疗功效,如 Gheldof等发现蜂蜜中的酚类化合
物具有一定的抗氧化能力[3];Hamzaoglu等报道,蜂
蜜能使植入大鼠的肿瘤细胞明显下降, 可以防止
肿瘤细胞扩增 [4];蜂蜜还可以增加机体免疫能力,
肿瘤患者服用蜂蜜制剂后, 血清中 IgG 水平与对
照组相比明显提高[5]。
野桂花属于于山茶科、柃属(Eurya spp.),又
名山桂,广泛分布在江西铜鼓、分宜、修水、吉安、
遂川、赣州、上饶、萍乡等山区,是江西省一种富有
特色且重要的蜜源植物[6-8]。 野桂花蜂蜜呈水白透
明,结晶洁白,颗粒很细。 质地纯净,味极清香,色
味具佳,属于特等蜂蜜,被称为“蜜中之王”,具有
很好的经济效益。
目前, 对野桂花蜂蜜的特殊功能及作用机制
尚未深入的研究。本文依照《保健食品检验与评价
技术规范》,研究江西野桂花蜂蜜对雌性小鼠免疫
力及雄性大鼠降血脂功能的影响, 为深入开发与
利用野桂花蜂蜜资源提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 实验动物 ICR 小鼠 56 只,雌性,SPF 级,
体重 20.8~25.6 g;SD 大鼠 48 只,雄性,SPF 级,体
重 189~217 g,湖南斯莱克景达实验动物有限公司
提供。
1.1.2 剂量与分组 免疫力实验小鼠按体重随机
分组。 设 3 个剂量组和 1 个阴性对照组,每组 14
只。 以人体推荐量 25g /人 / d 的 10 倍为中间剂量
组,各组剂量如下:高剂量组 8 400 mg/(kg bw·d),
中剂量组 4 200 mg/(kg bw·d), 低剂量组 2 100
mg/(kg bw·d)。 对照组在喂饲相同饲料的同时,经
口给予同量的超纯水。
降血脂实验设 3 个剂量组和 1 个阴性对照
组, 根据血清总胆固醇 TC 值随机分组, 每组 12
只,以人体推荐量 25g/人/d 的 5 倍为中间剂量组,
各组剂量如下: 高剂量组 4 200 mg/(kg bw·d)、中
剂量组 2 100 mg/(kg bw·d)、 低剂量组 1 050 mg/
(kg bw·d)。 对照组在喂饲相同饲料的同时,经口
给予同量的超纯水。
1.1.3 主要材料与仪器 NK 细胞活性测定靶细
胞:YAC-1 细胞, 由中国科学院上海细胞生物研
究所提供。 培养液:1640 培养基(北京 Solarbio 生
收稿日期: 2012-04-25
基金项目: 江西省主要学科学术和技术带头人培养计划
作者简介: 张丽珍,女,1982 年出生,硕士
通信作者: 曾志将
Vol. 13 No. 4
Apr. 2 0 1 3Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology
中 国 食 品 学 报第 13 卷 第 4 期
2 0 1 3 年 4 月
第 13 卷 第 4 期
物技术)、四季青胎牛血清。 LDH 基质液:0.2 mol/
L Tris-HCl 缓冲液中含以下终浓度物质: 乳酸锂
5×10-2 mol/L、硝基氯化四氮唑 6.6×10-4 mol/L、吩嗪
二甲酯硫酸盐 2.8×10-4 mol/L、 氧化型辅酶Ⅰ1.3×
10-3 mol/L,临用前配制。 MTT、ConA 均由 Solarbio
公司生产。 灭菌饲料由北京科澳协力饲料有限公
司提供。
主要仪器:细胞培养箱、酶标仪、显微镜、低温
离心机等。
1.2 实验方法
1.2.1 给药途径 免疫力和降血脂实验: 各剂量
组每天经口给予受试样品 1 次,灌胃量 0.2 mL/10
g bw,受试样品时间 41 d。 对照组给予同量的超纯
水。
1.2.2 日常观察 每日观察小鼠和大鼠的活动、
进食及饮水情况。 每周称量体重。
1.2.3 脾淋巴细胞转化实验 将制备好的脾细胞
悬液调整为 3×108个/mL,将每份细胞悬液加入 24
孔培养板中,每孔 1 mL,加 2孔。 每份细胞悬液的
1 个孔中加入 75 μL CoflA 液 (终质量浓度 7.5
μg/mL),另一孔为对照。 置 5% CO2、37 ℃细胞培
养箱中培养 68 h。每孔轻轻吸去上清液 0.7 mL,加
入同量不含小牛血清的细胞培养液,同时加入 50
μL MTT(5mg/mL),继续培养 4 h。 72 h 培养结束
后,每孔加入 1 mL 酸性异丙醇,吹打混匀,溶解紫
色结晶。 将反应后的每孔溶液分 3 个平行样加入
96 孔板中, 用酶标仪在波长 570 nm 处测定光密
度值(OD)。以加 ConA孔 OD值减去不加 ConA孔
OD值差值代表增殖反应强弱。
1.2.4 NK 细胞活性测定 取靶细胞和效应细胞
各 100 μL(效靶比 50∶1),加入 96 孔板,即:靶细
胞自然释放孔加靶细胞和培养液各 100 μL,靶细
胞最大释放孔加靶细胞和 2.5% Triton 各 100
μL。 各设 3 个平行孔,于 5% CO2、37 ℃细胞培养
箱中培养 4 h。 将 96 孔板以 1 500 r/min 离心 5
min,每孔吸取上清 100 μL,置另一 96 孔板中,同
时加入 LDH基质液 100 μL,反应 8 min,每孔加入
30 μL 1 mol/L HCL 中止反应, 用酶标仪在波长
490 nm处测定光密度值(OD)。
NK 细胞活性= 反应孔 OD-自然释放孔 OD
最大释放孔 OD-自然释放孔 OD ×
100%
1.2.5 降血脂功能实验 试验结束前 16 h 禁食,
处死前称大鼠体重并取腹股动脉血测定血清 TC,
TG,HDL-C水平。
1.3 数据分析
用 Dunnett t(2-sided)统计方法,3 个剂量组
个指标均数均与对照组的均数进行两两比较,检
验统计学差异。
1.4 检测单位
委托江西省职业病防治研究院检测。
2 结果
2.1 小鼠周平均体重变化
日常观察记录,试验期间,各组动物生长情况
良好,无异常行为。试验中,对照组死亡 1只,经尸
检未见器质性病变,可能是灌胃等实验操作所致。
由表 1 可知,各组小鼠体重稳步增长,经统计,各
周及处死前空腹体重(终体重)在组间均无显著性
差异(P>0.05)。
组别 初体重/g 第 1 周体重/g 第 2 周体重/g 第 3 周体重/g 第 4 周体重/g 第 5 周体重/g 终体重/g
对照组 23.05 25.62 27.27 28.40 29.76 29.54 28.41
低剂量组 22.79 25.09 26.75 27.48 29.31 30.06 27.51
中剂量组 23.01 25.56 26.76 27.55 28.81 29.78 27.29
高剂量组 22.82 25.57 26.34 27.44 29.28 29.34 27.51
表 1 小鼠平均体重变化
Table 1 The changing results of the average body weights of mouse
2.2 小鼠主要脏器比重
统计表 2 中数据,3 个试验组和对照组的小
鼠胸腺体重比和脾脏体重比都差异不显著。
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中 国 食 品 学 报 2013 年第 4 期
组别 样本数 OD 差值 P 值
对照组 13 0.0113 ± 0.0043 -
低剂量组 12 0.0141 ± 0.0051 0.231
中剂量组 13 0.0136 ± 0.0034 0.37
高剂量组 13 0.0137 ± 0.0041 0.329
表 2 小鼠主要脏器比重
Table 2 The results of the main organ proportion
of mouse
2.3 小鼠脾淋巴细胞转化
本试验过程中低剂量组 1个样本被污染。高、
中、低剂量组各 1 个样本,在细胞计数时细胞存活
率小于 95%。 各剂量组剩余样本量均在 10~15 只
之间,符合实验样本数要求。 从表 3 可见,各剂量
组的均值均高于对照组, 但与对照组比较均无统
计学意义(P>0.05)。
2.4 小鼠 NK细胞活性
本试验过程中低剂量组 3 个样本、 中剂量组
2 个样本和高剂量组 1 个样本, 在细胞计数时细
胞存活率小于 95%, 各剂量组剩余样本量均在
10~15 之间,符合实验样本数要求。 由表 4 可知,
各剂量组 NK 活性值都高于对照组, 且呈线性升
高趋势。 高剂量组与对照组比较具有显著性差异
(P<0.05)。
组别 动物数/只 胸腺体重比 脾脏体重比
对照组 13 2.68 ± 0.68 3.36 ± 0.81
低剂量组 14 2.85 ± 0.60 3.39 ± 0.73
中剂量组 14 2.43 ± 0.51 3.35 ± 0.75
高剂量组 14 2.75 ± 0.59 3.64 ± 0.92
表 3 小鼠淋巴细胞增殖活性(OD)差值
Table 3 The OD difference of lymphocyte proliferation
activity of mouse
组别 样本数 NK 细胞活性 P 值
对照组 13 50.01 ± 18.77 -
低剂量组 11 54.35 ± 15.80 0.849
中剂量组 12 61.85 ± 14.43 0.172
高剂量组 13 66.22 ± 14.3 0.035*
表 4 小鼠 NK 细胞活性
Table 4 The NK cell activity of mouse
2.5 大鼠周平均体重变化
试验期间,各组动物生长情况良好,无异常行
为。中剂量组及高剂量组各死亡 1只大鼠,经尸检
未见器质性病变,可能为灌胃操作所致。
由表 5 可知,各组大鼠体重稳步增长,统计表
明:每周平均体重均无显著性组间差异(P>0.05)。
试验终止前,禁食后各组间大鼠平均体重(终体重)
比较,也无显著性差异(P>0.05)。
组别 初体重/g 第 1 周体重/g 第 2 周体重/g 第 3 周体重/g 第 4 周体重/g 第 5 周体重/g 终体重/g
对照组 205.00 248.50 281.33 323.17 346.33 376.50 370.58
低剂量组 204.67 250.50 291.92 318.67 325.92 376.08 370.33
中剂量组 201.00 248.42 295.67 325.67 333.75 386.75 383.09
高剂量组 203.08 243.67 290.25 314.83 322.73 385.00 376.27
表 5 大鼠周平均体重
Table 5 The average body weights of rats in every week
2.6 大鼠食物利用率
表 6 可知,各组食物利用率中、高剂量组高于
对照组,低剂量组低于对照组,但差别不大。
2.7 大鼠血清总胆固醇 TC、 甘油三酯 TG 及高
密度脂蛋白 HDL-C
由表 7 可知, 对照组血清总胆固醇值在试验
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第 13 卷 第 4 期
结束后(终 TC)较试验分组时(初 TC)明显提高,
具有显著性差异(P<0.05),表明本次试验造模成
功。 试验结束时各剂量组与对照组比较总胆固醇
及血清甘油三酯均有所降低, 但未见显著性差异
(P>0.05)。 实验结束后各剂量组的高密度脂蛋白
呈线性上升趋势, 与对照组相比, 无显著性差异
(P>0.05)。
对照组 2 460 4 447 1 987 9 944 19.98
低剂量组 2 456 4 444 1 988 10 033 19.81
中剂量组 2 412 4 530 2 118 10 032 21.11
高剂量组 2 437 4 455 2 018 9 724 20.75
始重 终重 增重
组别
体重/g·组-1 饲料消耗量/
g·组-1
食物利用率/%
表 6 大鼠食物利用率
Table 6 The utilization ratio of food of rats
对照组 12 1.66 ± 0.28 3.30 ± 1.30* 0.61 ± 0.36 1.42 ± 0.3
低剂量组 12 1.64 ± 0.16 2.97 ± 0.99 0.57 ± 0.20 1.36 ± 0.25
中剂量组 11 1.65 ± 0.23 3.06 ± 0.61 0.46 ± 0.21 1.52 ± 0.19
高剂量组 11 1.67 ± 0.23 2.76 ± 0.84 0.52 ± 0.14 1.58 ± 0.16
初 终
组别 样本数
TC/mmol·L-1
TG/mmol·L-1 HDL-C/mmol·L-1
表 7 大鼠血清 TC、TG 及 HDL-C 浓度
Table 7 The concentration of serum TC, TG and HDL-C of rats
3 讨论
人体免疫力下降可导致多种疾病的发生。 利
用天然产物中的活性物质增强免疫力, 是人类所
希望的途径。 本研究通过检测小鼠 NK 细胞活性
和脾淋巴细胞转化来判断野桂花蜂蜜增强免疫力
功能。
NK 细胞(Natural Killer Cell)是一种杀伤细
胞,具有抗肿瘤、抗感染作用,参与自身免疫过程,
NK细胞活性高低代表了免疫力强弱。本试验中高
剂量组 [8 400 mg/(kg bw·d)]NK 细胞活性显著高
于对照组, 说明野桂花蜂蜜对小鼠有提高免疫力
效果。 各剂量组脾淋巴细胞增殖活性(OD)与对照
组差异不显著, 分析其原因, 可能是实验剂量偏
低,具体机理待查。
高血脂的发生与机体血清中高胆固醇含量和
脂质过氧化的损伤有关。 当机体氧化系统和抗氧
化系统失去平衡时,就会产生大量的自由基,形成
过氧化物损伤血管内皮细胞,导致胆固醇的堆积,
形成早期的高血脂[9]。 本研究表明野桂花蜂蜜高、
中及低剂量组与对照组相比, 大鼠总胆固醇及血
清甘油三酯均有所降低,但差异不显著。这表明野
桂花蜂蜜可以预防高血脂的发生, 可能是由于野
桂花蜂蜜含有丰富的酚类化合物, 而蜂蜜中的酚
类化合物有抗氧化能力,能消除阴离子自由基、亚
硝酸盐自由基、脂质过氧化自由基等 [10],进而降低
胆固醇的堆积; 也可能由于野桂花蜂蜜中的丰富
维生素,促进了肝脏的脂肪代谢,从而防止胆固醇
沉淀在血管壁上[11]。
参 考 文 献
[1] 曾志将. 养蜂学[M]. 2 版. 北京:中国农业出版社, 2009: 146.
[2] 李莉颖. 蜂蜜-天然的健康佳品[J]. 绿色中国, 2007, (10): 21-23.
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中 国 食 品 学 报 2013 年第 4 期
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【版权声明】
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[4] Hamzaoglu I, Saribeyoglu K, Durak H, et al. Protective covering of surgical wounds with honey impedes tumor
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Effect of Honey Eurya Spp. in Jiangxi on the Immunity and
Cholesterol-lowering Function of Animals
Zhang Lizhen Yan Weiyu Wang Zilong Zeng Zhijiang*
(Honeybee Research Institute, Jiangxi Agricultural University, Nanchang 330045)
Abstract The effects of honey Eurya spp. on the immunity of mouse and cholesterol-lowering function of rats was
explored in this study. Female mouse and male rats were intragastricaly administrated daily with honey Eurya spp. in the
high, low and moderate dosage group, respectively. Saline water was intragastricaly administrated with the same dosage in
the control group. The observation and weighting was performed on the same time weekly. After 41 days’ experiment,
the body weight, organ proportion, spleen lymphocyte transformation and the CK cell activity of female mouse, and the
body weight, utilization ratio of food, serum total cholesterol (TC), triglyceride (TG) and the high-density lipoprotein
(HDL-C) of male rats were detected, respectively. The experimental results showed that the CK cell activity of female
mouse detected in the high dosage group[8 400 mg/(kg bw·d)], is significantly higher than the control(P<0.05). However,
no significant difference is found on the body weight, organ proportion, spleen lymphocyte transformation among these
groups (P>0.05). Compared with the control group, the serum TC and TG of the male rats in the high, low and moder-
ate dosage groups are all found declined, however, the difference was not significant. Meanwhile, no significant differ-
ence is found in the body weight, the utilization of food and HDL-C in this study.
Key words honey Eurya spp.; female mouse; male rats; immunity; cholesterol-lowering function
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