全 文 ： 万方数据
生态科学 23卷
表l不同区域三种抗菌素抗性细菌在细菌总数中的比例髓blel耵地mteof3锄问)iotic聪sist锄髓ba触iIItotalb嗣触
抗氨卞青霉素菌数／细菌总数％ 抗卡那霉素菌数 占细菌总数比例 抗氯霉素菌数占绷l菌总数比例Numl埘of
NumI埘ofbacteria、ⅣithADr，瞰aln叫由erN1I耐财0fbacI鲥a、Ⅳithl(mr，TotalnumI财bact舐a、讥mCmr，Tocalnuml埘
生活区 0．00233％ O．00283％ 0．00000％
些塑墨g堡垂竺
对照区 O．00207％ 0．00216％ 0．00000％
Pa．=o．986；Pl卸675。P值均火于O．05。显不Ij9j种抗性细菌比
例没有显著性差异。
实验表明在所检测地区尚未发生明显的上述基因的转
移。实验米检出氯霉素抗性细菌，提示氯霉素抗性细菌在
七壤中的数量较低，可能不适合于作基因转移实验的标志。
2．2抗菌素抗性细菌的分子生物学性质
2．2．1抗菌素抗性细菌中含质粒数的测定
纽菌的抗菌素抗性是由基因编码的，如抗氨苄青霉素
基冈编码D_内酰胺酶能将氨苄青霉素在进入细胞前降解；
抗卡那霉素基因编码氨基糖苷磷酸转移酶可使卡那霉素失
活；抗氯霉素基因编码氯霉素乙酰转移酶可灭活氯霉素。
这3种基因可位于染色体或质粒上。目前基因工程上使用
的重要质粒(载体)经常利用这些基因作为选择和筛选标 图2抗卡那霉素质粒电泳图
记，因此这些基因的存在和分布可以作为基因水平转移的袭罨≤选黯雾羚簇襞筹案篙尝要毒：：；昌‰．
模式标记。为检测实验中分离的抗氨苄青霉素、卡那霉素u啦“：pla锄妇．md娅咖t虹tI-e嘣0f醢嗽∞pIa曩Ilid．
菌株的基因位置利相关性质，将分离的菌株进行质粒制备。竺算菌黧性鬯堡随型整．·!)擀!簟壁：鬯竺菌靶黧黜燃鼍鬻‰蛔一m础一有质粒，如图1所示，具有不同火小分子量的质粒。含质 鬲．淼⋯一⋯⋯一⋯⋯‘一。～⋯⋯一一一～～～⋯
粒比例见表2，对不同区域的卡那霉素和氯霉素抗性菌株 项目 抗氨卞青霉索含质粒抗卡那霉素含质粒菌
的含质粒比例用确切概率法进行显著性统计学数据计算， №m 芦鏊，Pla竺唧n!?粤婺Plas唑n!!岬访
前者PaI=0．324；后者Pl却1．518。均大于o．05。故没有显著至话茵丽面面鬲面巷葛尝塑塑婴垡L{器等塑坚匦堡塑—一
性差异。由于氨苄青霉素和卡那霉素抗性基因己被广泛应对照区c∞凶re赫18．2％ 18．2％
用于基因工程质粒载体中，而载体所携带的基因水平转移
远高于染色体携带的基因¨Ⅲ，质粒比例的改变显示基因工 后，进行常用的限制性内切酶Eco对酶切，图谱见图3，
程对环境造成了一定的干扰作用，但实验结果初步表明所 质粒被酶切出多个片段，显示出质粒具有E．coRI酶的多
检测地区的质粒比例未发生显著性改变，因而基因工程菌个位点。所以所检测的质粒可能均为自然质粒，不是基因
抗菌素抗性基因污染程度还未引起有影响的改变。 工程菌质粒，表明所检测的区域被基因工程菌污染的程度
2．2质粒转化与酶切鉴定 可能性较低。
为进一步鉴定抗菌素抗性基因是否存在于质粒上，将Davis∞等嘲研究指出，基因在自然环境中可在不同的
制备的抗氨苄青霉素质粒和抗卡那霉素质粒进行了枯草杆 细菌中发生水平转移，特别是抗菌素抗性基因由于抗菌素
茵的转化实验，质粒经转化后均将抗菌素敏感的枯草杆菌的滥用和基因工程中标记基因的使用，而使水平转移的速
BRl5表现出抗氨苄青霉素和抗卡那霉素性质，实验结果 度加剧。人们关注抗菌素抗性基因的传递可能对抗菌素治
证实部分抗氨苄青霉素和抗卡那霉素基因存在于质粒匕。 疗产生的影响，更关注基因工程的特异外源基因在自然界
由于基因：工程所用的质粒载体通常是通过人工构建的，人 中的污染，抗菌素抗性基因的传递则可以作为这个污染检
工构建载体与自然质粒通常的不同之处，一是常用的限制 测的重要模式指标。本文检测的土壤匾定菌系抗菌素抗性
性内切酶位点数量有所不同，如常用的E．coRI酶在自然 细菌及其所含有的质粒数在不同区域的比别，经统计学处
质粒中经常为多位点。而人工构建的基因1l-踬粒通常为理无显著性差异。但两者比较居民区比对照区还是升高的，
单—位点，对其中3个质粒pHⅡ(1，皿埘Q和p}IⅨ4纯化所以有必要进行跟踪实验。 (下转第191页)
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2期 李爱芬，等：信息时代生态学本科专业微生物学实验课教学浅析 19l
码摄象机、照相机将老师的规范动作和实验要求制作
成DVD光碟或幻灯片，实验前给学生集中演示或由
学生通过网络下载进行预习，这样往往会达到事半功
倍的效果。
4建立实验课考核制度
新世纪生态学的发展需要火批应用型的人才，实
验教学是培养应用型人才极其重要的形式。同时，随
着高校教学改革的不断发展，实验课的教学越来越受
到重视，各高校的《微生物学实验课》已成为一门独
立的课程⋯，这就需要建立一个科学可行的考核办法。
学生的考核成绩由两部分组成，包括平时的实验课成
绩和学期末考试成绩。平时成绩根据学生的实验报告
二}s写情况、实验结果以及平时对实验课的态度等确定
瞪l：期末考试又包括实验操作和口答两部分，选择具
有代表性的实验进行考试，如细胞型微生物的制片观
察、无菌操作规范、微生物的接种与纯培养操作、微
生物细胞火小的测量与群体计数等。通过这些基础实
(上接第18R页)
图3 pHJKl、pHJK2和pHJK4质粒EcoRI酶切图谱
Fi93H躯lIlidspIIJKl，pIIJl【2aIIdp哪搿byE∞m
1．DNA标记：2．pⅢKl质牧EcoRl酶切；3．pHJKI质粒；4．pⅢK2质粒
EcoRI酶切；5．pHJK2质粒：6．pⅢK4质粒EcoRI酶切：7．pⅢK4质粒
1．DNA啪rker(1kbIadd盯)；2．pⅢKlbyEcoRI3．plasIIlidpⅢKI；4．
pHJK2byEcoRI：5．plaslTlidpHJK2：6．pHJK4byEcoRI3．plasmidpⅢ-“
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究中的操作技术规范。
上述认识和体会，意向微生物学教学同行求教与
探讨。
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万方数据
Ap、Km和Cm抗性细菌在土壤中的差异分布及成因
作者： 李蔚， 钟慧斌， 刘桦， 董鸣鸣， 夏涛， 张欣， 周天鸿
作者单位： 李蔚,钟慧斌,刘桦,董鸣鸣,夏涛(华南师范大学附属中学,广州)， 张欣,周天鸿(暨南大学生
物工程系,广州,510632)
刊名： 生态科学
英文刊名： ECOLOGIC SCIENCE
年，卷(期)： 2004,23(2)

参考文献(11条)
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