全 文 ：中国药房 2011年第22卷第11期 China Pharmacy 2011 Vol. 22 No. 11
翻白草（Potentilla discolor Bunge）为蔷薇科多年生草本植
物，又名鸡腿儿、鸡脚草、天青地白等，始载于《救荒本草》，干
燥全草均可入药。翻白草性平、味甘、微苦，具有止血止痢、清
热解毒、消肿之功效，常用于治疗赤痢腹痛、久痢不止、咳血、
崩漏、肺痈、痈肿及结核等[1]。现代研究表明，翻白草具有抗
菌、止泻、抗肿瘤、免疫抑制和降血糖的作用[2]。有研究表明，
翻白草所含成分有石竹皂苷元、d-儿茶素、鞣质、原儿茶酸、槲
皮黄素和熊果酸等[3]。鞣质又称单宁，是一类水溶性含多酚羟
基结构的化合物，主要存在于植物的干、皮、根、叶或果实中，
其表现出较强的化学和生理活性，如抗氧化、止血、抗病毒、抗
衰老作用等[4]。笔者对翻白草鞣质（PT）清除羟自由基（HO·）、
超氧阴离子自由基（O2-1）和二苯代苦味酰基（DPPH·）及抑制
鼠肝脂质过氧化方面进行研究，以为翻白草鞣质的开发利用
提供理论依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器
752型紫外-可见分光光度计（上海菁华科学仪器有限公
司）；KH-500B型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公
司）；RE-52A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；XW-80A
型旋涡混合器（上海青浦沪西仪器厂）。
1.2 试药
翻白草药材购自南京市药材公司，由中国药科大学药材
标本室曹佩琴实验师鉴定为真品；DPPH·（美国Sigma公司）；
硫代巴比妥酸（TBA）、鞣酸、干酪素、茶多酚（TP，含量：99％）
由南京泽朗医药科技公司提供；1，1，3，3-四乙氧基丙烷、邻苯
三酚、邻二氮菲、铬黑T、乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）及其
余试剂均为国产分析纯。
1.3 动物
清洁级小鼠，♀♂不限，体重（20±2）g，由中国药科大学
实验动物中心提供（生产许可证号：SYXK（苏）2007-0025）。
2 方法与结果
2.1 PT的提取和含量测定[5，6]
2.1.1 提取 称取100 g干燥翻白草，粉碎。在翻白草干粉中
加入 50％乙醇作溶剂，60 ℃超声波提取 2 h，过滤，滤液于
50℃旋转浓缩真空干燥6 h，得浅黄色鞣质粉末。
2.1.2 含量测定 配制5％（mg·mL-1）的鞣酸标准液和一定浓
度的PT溶液。精密量取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL鞣酸标准液，
分别置于25 mL具塞试管中，各加入磷钼酸试剂1 mL，再分别
加水11、10、9、8、7 mL，用29％碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀。
以相应的试剂为空白对照，放置30 min，760 nm波长处测定吸
光度（A）。以浓度（c）为横坐标，A为纵坐标，进行线性回归，得
回归方程为A＝2.441 7c+0.002 6（r＝0.999 3）。结果表明，溶
液浓度在 3.75～20.85 μg·mL-1范围内与吸光度线性关系良
好。5份样品测得含量平均值为7.62％，RSD＝2.45％。
2.2 抗氧化性试验
首先配制系列浓度的 PT供试溶液和其他相关试剂。
2.2.1 对HO·的清除作用[7] 利用H2O2和Fe2+混合发生Fenton
反应，生成具有很高反应活性的HO·。在体系内加入水杨酸＊副主任药师。研究方向：药学与临床。电话：025-52313471。E-mail：yrzhang126@126.com
翻白草鞣质的体外抗氧化作用研究
张远荣 1＊，王 锋 2（1.南京市秦淮医院，南京市 210001；2.中国药科大学，南京市 210009）
中图分类号 R285.5 文献标识码 A 文章编号 1001-0408（2011）11-0983-03
摘 要 目的：研究翻白草鞣质的体外抗氧化作用。方法：运用超声技术提取翻白草中的鞣质成分，将其配制成系列不同浓度供
试样品，测定其对羟自由基（HO·）、超氧阴离子自由基（O2-1）、二苯代苦味酰基（DPPH·）自由基的清除能力以及抑制小鼠肝组织
自发性脂质过氧化物的作用。结果：翻白草鞣质在0.50 mg·mL-1浓度时对HO·和 O2-1的清除率分别为81.7％和85.4％，0.75 mg·
mL-1浓度时对DPPH·的清除率达到91.6％，对丙二醛（MDA）的抑制率为90.2％，其抗氧化作用在一定范围内随浓度增加而加
强。结论：翻白草鞣质具有较强的抗氧化作用，可以作为一种天然抗氧剂加以研发；本试验对筛选新型天然抗氧剂具有实用价值。
关键词 翻白草；鞣质；自由基；丙二醛；抗氧化
Antioxidant Effect of Tannins from Potentilla discolor in Vitro
ZHANG Yuan-rong（Nanjing Qinhuai Hospital，Nanjing 210001，China）
WANG Feng（China Pharmaceutical University，Nanjing 210009，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the antioxidant effect of tannins from Potentilla discolor in vitro. METHODS：Tannins was
extracted from P. discolor using supersonic technology and was prepared into test sample with different concentrations. Scavenging
ability of samples to hydroxyl free radical（HO·），superoxide anion free radicals（O2-1），DPPH free radicals（DPPH·）and inhabi-
tation effect on spontaneous lipid peroxides in mice liver were detected. RESULTS：Scavenging rates of 0.50 mg·mL-1 tannins from
P. discolor to HO· and O2-1 were 81.7％ and 85.4％，respectively，while 0.75 mg·mL-1 tannins from P. discolor to DPPH· and
MDA were 91.6％ and 90.2％ . Antioxidant effect of tannins from P. discolor increased as long as the concentration of tannins in-
creased. CONCLUSION：Tannins from P. discolor has antioxidation effect and can be used as a natural oxidation inhibitor. The
study is valuable for the selection of new oxidation inhibitor.
KEY WORDS Potentilla discolor；Tannins；Free radical；Malonaldehyde；Antioxidation
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China Pharmacy 2011 Vol. 22 No. 11 中国药房 2011年第22卷第11期
捕捉HO·并产生有色物质，该物质在 510 nm波长处有最大吸
收。但若加入具有清除作用的物质，便会与水杨酸竞争，从而
使有色产物生成量减少。在试管中依次加入 6 mmol·L-1
FeSO4溶液2 mL、不同浓度PT溶液2 mL，1.6 mmol·L-1 H2O2溶
液 2 mL摇匀，静置 10 min，再加入 6 mmol·L-1水杨酸溶液 2
mL摇匀，静置 30 min后于 510 nm波长处测定不同PT浓度下
的吸光度（Ai）；用水代替水杨酸测定某浓度PT的本底对照吸
光度（Aj）；以纯净水代替抗氧化剂测定空白吸光度（A0）。按下
式计算抗氧化剂对HO·的清除率（S％）：
S％＝ [1－ ]（Ai－Aj）Ao ×100％
2.2.2 对O2-1的清除作用[8] 取 25 mL干净具塞试管 1支，吸
取 5 mL 50 mmol·L-1 Tris-HCl缓冲液（pH8.2）、2 mL纯净水，
混匀后在 25℃水浴中保温20 min，立即加入在25℃预热过的
3 mmol·L-1邻苯三酚0.5 mL（以10 mmol·L-1 HCl配制，空白
管以10 mmol·L-1 HCl代替邻苯三酚的 HCl溶液），迅速摇匀
后在420 nm波长处测定A。在加入邻苯三酚前先加入一定体
积的鞣质提取液，纯净水补足至量，然后按采用邻苯三酚自
氧化法测定的方法操作。按下式计算抗氧化剂对O2-1的清除
率（S％）：
S％＝[1－ ]（A3－A4）（A1－A2）×100％
式中：A1为不含样品的吸光度值；A2为不含样品和邻苯三
酚的吸光度值；A3为含有样品的吸光度值；A4为含样品，但不含
邻苯三酚的吸光度值。抗氧化剂对HO·的清除能力（Sa）和
O2-1的清除能力（Sb）见表1。
表1 抗氧化剂的Sa和Sb（x±s，n＝5）
Tab 1 Scavenging ability of antioxidants on HO· and O2-1
（x±s，n＝5）
抗氧化剂及其浓度
c/mg·mL-1
TP 0.15
PT 0.05
PT 0.10
PT 0.50
Sa/％
74.6
18.3
39.5
81.7
RSD/％
1.09
2.13
1.84
1.57
抗氧化剂及其浓度
c/mg·mL-1
TP 0.15
PT 0.05
PT 0.15
PT 0.50
Sb/％
80.2
13.7
32.5
85.4
RSD/％
1.21
2.28
2.17
1.93
由表1可知，PT对HO·和O2-1有较好的清除能力，清除效
果与供试品浓度在一定范围内呈正相关（r＝0.999 4）；TP0.15
mg·mL-1和PT0.50 mg·mL-1对 2种被检测自由基的清除能力
接近。
2.2.3 对DPPH·的清除作用[9] 取 3组 25 mL干净具塞试管，
于第1组中加入2×10-4 mol·L-1的DPPH·乙醇溶液2 mL，再分
别加入 2 mL不同浓度（0.05、0.15、0.75 mg·mL-1）的 PT溶液，
摇匀，室温下避光反应30 min，在517 nm波长处测定吸光度值
（Ai）；第 2组中加入 2×10-4 mol·L-1的DPPH·乙醇溶液 2 mL与
无水乙醇 2 mL摇匀，测定吸光度值（A0）；第 3组中分别加入 2
mL上述不同浓度的 PT溶液，与2 mL无水乙醇摇匀，测定吸光
度值（Aj）。按下式计算抗氧化剂对DPPH·自由基的清除率
（S％）：
S％＝[1－ ]（Ai－Aj）A0 ×100％
抗氧化剂对 DPPH·的清除能力见表2。
由表 2可知，PT对 DPPH·的清除能力比较明显，且清除
能力随 PT浓度增加而加强（r＝0.999 9）；TP0.25 mg·mL-1和
PT0.75 mg·mL-1对DPPH·的清除能力相当。
2.2.4 对小鼠肝组织自发性脂质过氧化的抑制作用[10] 丙二
醛（MDA）是过氧化脂质的二级分解产物，研究采用TBA法测
定MDA含量，并由此计算出供试品对脂质过氧化的抑制率。
精密量取四乙氧基丙烷标准液，制备标准曲线，肝脂质过氧化
物水平以MDA浓度表示。小鼠（禁食12 h后）脱颈处死，立即
取出肝脏，用 0.15 mol·L-1冰KCl溶液洗至无血渍，滤纸吸干
后称取 0.4 g，加入 4 mL冰冷生理盐水（0.9％NaCl），用玻璃匀
浆器在冰浴条件下制成10％肝匀浆生理盐水液，3 000 r·min-1
冷冻离心10 min。每鼠的肝匀浆0.2 mL分别加入待试液或生
理盐水 0.1 mL，除生理盐水对照组外，各管加入 2％CCl4液体
石蜡油液0.1 mL，全部摇匀后置于恒温水浴锅中37℃保温1 h
取出，加0.025 mol·L-1硫酸、TBA试剂各1.0 mL摇匀，沸水浴
加热 30 min，自来水冷却，加正丁醇 4.0 mL，涡旋混合器混合
10 s，3 000 r·min-1离心10 min，取上清在一定条件下作荧光检
测，结果以每克湿重组织所含MDA的nmol数表示。按下式计
算抗氧化剂对小鼠肝组织自发性脂质过氧化的抑制率
（Ⅰ％）：
I％＝ [1－ ]（A1－A2）A0 ×100％
式中：A0为不加样品只加组织匀浆的吸光度值；A1为加样
品和组织匀浆的吸光度值；A2为没有组织匀浆时样品的吸光度
值。抗氧化剂对小鼠肝组织自发性脂质过氧化的抑制作用见
表3。
表 3 抗氧化剂对小鼠肝组织自发性脂质过氧化的抑制作用
（x±s，n＝5）
Tab 3 Inhibition effect of antioxidants on spontaneous lipid
peroxides in mice liver（x±s，n＝5）
抗氧化剂及其浓度c/mg·mL-1
TP 0.20
PT 0.05
PT 0.15
PT 0.75
I /％
82.5
12.1
30.5
90.2
RSD/％
1.36
2.15
1.48
1.93
由表 3可知，PT对因CCl4而造成的小鼠肝组织自发性脂
质过氧化损伤有明显的抑制作用，且抑制作用随PT剂量增加
而增加（r＝0.996 3）；0.75 mg·mL-1的PT与0.20 mg·mL-1的TP
的抑制作用较接近。
3 讨论
自由基是生物体在正常代谢中形成的，它们与老化、各种炎
症疾病、致癌作用以及难治病的关系早已引起人们的关注[11]。目
前各国已将抗氧化检测实验用于抗衰功能食品、药物的评价，
筛选天然、安全的抗氧化物是今后一项很重要的科研任务。
体外抗氧试验可以判断一种供试物是否具有抗氧化能力，然
后通过体内实验进一步验证。本研究以HO·、O2-1、DPPH·自
由基清除率和脂质过氧化抑制率等项目来考察PT的体外抗氧
化作用，结果表明，PT对DPPH·、HO·、O2-1和脂质过氧化都有
表2 抗氧化剂对DPPH·的清除能力（x±s，n＝5）
Tab 2 Scavenging ability of antioxidants on DPPH·（ x±s，
n＝5）
抗氧化剂及其浓度c/mg·mL-1
TP 0.25
PT 0.05
PT 0.15
PT 0.75
S/％
84.2
11.4
23.7
91.6
RSD/％
1.74
2.59
2.32
1.96
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中国药房 2011年第22卷第11期 China Pharmacy 2011 Vol. 22 No. 11
较强的清除或抑制作用，供试品在一定浓度范围内其抗氧化
效果与浓度呈现正相关，可为PT后续的体内抗氧化研究奠定
良好基础。此外，植物鞣质属于多羟基酚类化合物，遇热、见
光易氧化变色、变性，故提取和抗氧化试验均必须注意低温、
避光操作，方能取得可靠的试验结果。
参考文献
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（收稿日期：2010-05-15 修回日期：2010-09-12）
滋肾降糖丸对小鼠骨髓基质干细胞成脂分化的影响
郭 彬 1＊，刘志承 1，曾 斌 1，凌英蓉 1，肖永平 1，陈智伟 1，谢伟东 2 #（1.深圳市中医院药学部，深圳市 518020；2.
清华大学深圳研究生院生命科学学部健康科学与技术重点实验室，深圳市 518055）
中图分类号 R285；R97 文献标识码 A 文章编号 1001-0408（2011）11-0985-03
摘 要 目的：研究滋肾降糖丸对小鼠骨髓基质干细胞（MSC）模型成脂分化的影响。方法：小鼠灌胃滋肾降糖丸（1.5 g·kg-1），每
天1次，连续7 d，最后一天在灌胃2 h后收集含药血清。随后用油红O染色法检测上述含药血清对MSC成脂诱导分化的影响。最
后用实时荧光定量聚合酶链式反应（Q-RT-PCR）方法进一步测定含药血清对MSC成脂诱导过程中相关关键基因过氧化物酶体增
殖物激活γ2受体（PPARγ2）与人脂肪酸结合蛋白4（FABP4）表达的影响。结果：含药血清可显著抑制MSC的成脂分化，显著抑制
MSC成脂诱导分化第3、6天后关键基因PPARγ与FABP4的表达。结论：滋肾降糖丸具有抑制MSC成脂分化的作用，其作用机制
可能与抑制MSC上PPARγ2与FABP4的表达有关。
关键词 滋肾降糖丸；骨髓基质干细胞；成脂分化；过氧化物酶体增殖物激活γ2受体；人脂肪酸结合蛋白4
Effect of Zishen Jiangtang Pills on Adipogenic Differentiation of Mice MSC and Its Mechanisms
GUO Bin，LIU Zhi-cheng，ZENG Bin，LING Ying-rong，XIAO Yong-ping，CHEN Zhi-wei（Dept. of Pharma-
cy，Shenzhen Hospital of Traditional Chinese Medicine，Shenzhen 518020，China）
XIE Wei-dong（Key Laboratory of Health Science and Technology，Life Science Department，Shenzhen Gradu-
ate School of Tsinghua University，Shenzhen 518055，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To investigate the effect of Zishen jiangtang pills on adipogenic differentiation of mice mesenchymal
stem cells（MSC）and its mechanisms. METHODS：Mice were given Zishen jiangtang pill via i.g. gtt at a dose of 1.5 g·kg-1once a
day for a continuous week. Serum sample was collected 2 h after last administration. Then，effects of serum containing active com-
ponents on adipogenic differentiation of MSC were investigated by means of oil red O staining. The expressions of PPARγ2 and
FABP4 were determined by real-time Q-RT-PCR method during adipogenic differentiation of MSC. RESULTS：The serum contain-
ing active components inhibited the adipogenic differentiation of MSC significantly. The expressions of PPARγ2 and FABP4 were
significantly decreased after 3 and 6 days of adipogenesis induction. CONCLUSION：Zishen jiangtang pills can inhibit adipogenic
differentiation of MSC，which might related to the expressions inhibition of PPARγ2 and FABP4.
KEY WORDS Zishen jiangtang pills；Mesenchymal stem cells；Adipogenic differentiation；PPARγ2；FABP4
＊副主任药师。研究方向：医院药学、临床药学。电话：0755-
88359666-3138。E-mail：binbin-mail@163.com
# 通讯作者：副教授。研究方向：内分泌药理学。电话：0755-
26036086。E-mail：xiewd@sz.tsinghua.edu.cn
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