全 文 ：药 物 生 物 技 术
Pharmaceutical Biotechnology 2014，21(3) :250 ～ 252
翻白草及属间药用植物中黄酮化合物的 HPLC分析
罗玥佶，李 妍，粟 敏，王 琳，汤 婷，曾 杰
*
(长沙医学院 基础医学系，湖南 长沙 410219)
摘 要 建立了翻白草及属间两种药用植物黄酮类化合物的 HPLC 指纹图谱。本文色谱条件为:色谱柱为
Atlantis C18(250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ，流动相为甲醇-水(40∶ 60) ，体积流量为 1. 0 mL /min，柱温为 25 ℃，检测波
长:368 nm，进样量 20 μL。结果检测出 10 个分离度良好的共有指纹峰，计算了共有峰的相对保留时间和相对峰
面积。结果表明该方法可作为科学评价及有效控制中药质量的可行的定性方法。
关键词 翻白草;委陵菜属;高效液相色谱;指纹图谱
中图分类号 Q949. 751. 8 文献标志码 A 文章编号 1005-8915(2014)03-0250-03
翻白草别名天青地白，鸡腿儿，为蔷薇科委陵菜属多
年生草本植物，该属植物大部分都有药用价值。翻白草的
根部或干燥带根全草均可入药，其资源丰富，全国各地均
有分布，为我国传统中药。翻白草有抗菌、止泻和免疫增
强作用，目前临床上一般用于治疗细菌性痢疾、溃疡性结
肠炎，有效率达 95%以上［1］，是一种较好的抗菌药物。近
年来，其更多的药用价值被发现，邵长平［2］等观察翻白草
合剂治疗气阴两虚证 2 型糖尿病患者的疗效。翻白草乙
酸乙酯萃取物具有较强的降血糖、降血脂、清除自由基、抑
菌等作用，且毒性极小，其主要的药理活性成分为黄酮类
物质［3］。
蛇含委陵菜又名蛇含、蛇衔、五爪龙等，全草入药，性味
甘辛、凉，能清热解毒、止咳化痰，主治疟疾、咳嗽、喉痛、丹
毒、癣疮、蛇虫咬伤等。经 ISSＲ 标记分析表明蛇含委陵菜
与翻白草有较近的亲缘关系。
委陵菜异名翻白草、黄州白头翁、天青地白、虎爪草等。
多年生草本，全株被白色柔毛。根或全草入药，性味苦、平，
对祛风湿、解毒、治痢疾、风湿筋骨疼痛、瘫痪、癫痫有疗效。
由于和翻白草形态相似，很多地区将两种药用植物混用，由
此会影响临床用药的安全和疗效。从其所含的有效成分
看，委陵菜主要含有抗坏血酸、蛋白质、脂肪类等成分，而翻
白草主要含鞣质和黄酮类成分。
黄酮类化合物是植物界分布广泛的天然酚类化合物，
植物中的黄酮大体上可分为“黄酮类”与“黄烷酮类”两大
类物质，已知化学结构的黄酮类物质至少有 4 000 余种。
黄酮类化合物［4］具有广泛的生理功能，是许多中草药的有
效成分，具有很高的药用价值，如有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血
管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌
抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用。用高效液相色谱
(HPLC)法可快速、有效的分析不同地区翻白草、蛇含委陵
菜、委陵菜中黄酮类化合物的含量，为提高药品质量，研究
降血糖、抗炎的药理作用提供科学依据，同时为中药指纹图
谱的建立打定基础。
1 实验材料与仪器
1. 1 植物材料
供试材料为取自 5 个不同地区的翻白草以及取自湖南
浏阳大围山的蛇含委陵菜和取自山东临沂的委陵菜。材料
经干燥后放置干燥箱内备用。室内实验在怀化学院生物系
中药成分分析实验室进行。各材料基本情况见表 1。
Tab 1 Sources of medicinal plants in Potentilla L.
No． Sample Source
1 Poterntilla discolor Bge Hubei
2 Poterntilla discolor Bge Hunan Shaoyang
3 Poterntilla discolor Bge Hunan Tongdao
4 Poterntilla discolor Bge Hunan Xupu
5 Poterntilla discolor Bge Hunan Youxian
6 Poterntilla Kleiniana Hunan Liuyang
7 Poterntilla L Shandong Linyi
1. 2 实验试剂
色谱甲醇:天津市科密欧化学试剂开发公司;水:二次
蒸馏水;乙醇、甲醇:均为国产分析纯。
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* 收稿日期:2013-07-27 修回日期:2014-03-17
基金项目:湘西地区委陵菜属药用植物的 ISSＲ分析及 HPLC指纹图谱分析(湘财教指［2010］75 号 10C0442)。
作者简介:罗玥佶(1983-) ，女，讲师，湖南株洲人，研究方向为药用植物分子标记和成分的研究及基因克隆。
* 通讯作者:曾杰，E-mail:179198310@ qq. com。
罗玥佶，等:翻白草及属间药用植物中黄酮化合物的 HPLC分析
1. 3 实验仪器
高效液相色谱仪:北京凯奥 LC3600 型;色谱数据处理
系统:CXTH-3000。
2 实验方法
2. 1 黄酮类化合物的提取与纯化
将供试样品干燥后粉碎混匀后准确称取 5. 0 g，加入
70%的乙醇 200 mL，混匀后加热回流至回流液无色，将提
取液抽滤浓缩，最后将其转移至 100 mL 容量瓶中，用 70%
的乙醇稀释至刻度。
2. 2 制备型液相色谱条件
色谱柱为 Atlantis C18(250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ，流动
相为甲醇-水(40∶ 60) ，流速为 1. 0 mL /min，柱温为 25 ℃，检
测波长:368 nm，进样量 20 μL。
3 结 果
3. 1 色谱条件的确立
在相同的色谱柱 Atlantis C18 (250 mm × 4. 6 mm，
5 μm) ;检测波长为 368 nm;柱温为 25 ℃;体积流量为
1. 0 mL / min;进样量 20 μL 下，分别用不同的流动相:甲
醇∶水∶甲酸(体积比 50 ∶ 48 ∶ 2) ;甲醇 ∶ 水(0. 5%磷酸二氢
钠)∶甲酸(体积比 50∶ 48∶ 2) ;甲醇∶水(0. 5%磷酸二氢钠)
(体积比 70∶ 30) ;甲醇∶水(0. 5%磷酸二氢钠) (体积比 60∶
40) ;甲醇∶水(0. 5%磷酸二氢钠) (体积比 55∶ 45) ;甲醇∶水
(0. 5%磷酸二氢钠) (体积比 40∶ 60) ;甲醇∶水(体积比 70∶
30) ;甲醇∶水(体积比 60∶ 40) ;甲醇∶水(体积比 55∶ 45) ;甲
醇∶水(体积比 45∶ 55) ;甲醇∶水(体积比 40∶ 60)进行了试
验，结果表明流动相为:甲醇∶水(体积比 40∶ 60) ，样品能较
好的分离。
3. 2 精密度、稳定性及重复性试验
取同一产地供试品溶液连续重复进样 5 次，检测指纹
图谱，考察精密度;另取同一产地供试品溶液分别在 0，2，4，
8，10，16 h进样，检测指纹图谱考察稳定性;另分别取同一
产地供试品 5 份，按供试品溶液的制备方法制备供试品，检
测指纹图谱，考察重复性。结果表明，其主要共有峰的相对
保留时间和相对峰面积相对标准偏差(ＲSD%)均小于
3%，符合指纹图谱技术要求。仪器精密度、供试品溶液稳
定性及方法重复性较好。
3. 3 HPLC指纹图谱的分析
3. 3. 1 HPLC指纹图谱 对 7 种材料进行 HPLC指纹图谱
的建立，分别吸取 7 种供试品溶液 20 μL，注入高效液相色
谱仪，记录 25 min的色谱图，以芦丁作为对照(图 1)。
A:Hubei area samples;B:Hunan Shaoyang area samples;C:Hunan Tongdao area samples;D:Hunan Xupu area samples;E:Hunan
Youxian area samples;F:Hunan Liuyang area samples;G:Shandong Linyi area samples;H:Ｒutin
Fig 1 HPLC fingerprint chromatogram of sample (The abscissa graph represented
in peak time and the ordinate represents the absorbance)
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药 物 生 物 技 术 第 21 卷第 3 期
3. 3. 2 共有指纹峰的标定 采用相对保留时间标定共有
指纹峰，按峰面积大小，选取 10 个共有峰作为指纹图谱的
强峰，分别以图谱中 4 号峰(芦丁色谱峰)的保留时间和峰
面积为参照，将各色谱峰与其比值，计算供试样品指纹图谱
中共有峰的相对保留时间和相对峰面积(表 2，表 3)。
Tab 2 Ｒelative retention time in characteristic common peaks
No． Peak1 Peak2 Peak3 Peak4 Peak5 Peak6 Peak7 Peak8 Peak9 Peak10
1 0. 68 0. 83 0. 91 1. 00 1. 35 1. 98 1. 90 2. 16 2. 34 4. 93
2 0. 69 0. 77 0. 87 1. 00 1. 35 1. 53 1. 70 1. 90 2. 20 4. 69
3 0. 63 0. 78 0. 87 1. 00 1. 33 1. 53 1. 69 1. 82 2. 22 4. 75
4 0. 68 0. 85 0. 93 1. 00 1. 10 1. 42 1. 63 1. 80 2. 34 4. 97
5 0. 63 0. 78 0. 91 1. 00 1. 30 1. 45 1. 62 1. 84 2. 12 4. 51
6 0. 59 0. 65 0. 81 1. 00 1. 12 1. 26 1. 41 1. 61 1. 86 3. 95
7 0. 66 0. 79 0. 91 1. 00 － － 1. 73 2. 27 2. 52 4. 21
Tab 3 Ｒelative retention aera in characteristic common peaks
No． Peak1 Peak2 Peak3 Peak4 Peak5 Peak6 Peak7 Peak8 Peak9 Peak10
1 0. 61 0. 66 0. 52 1. 00 0. 744 0. 26 0. 20 0. 05 0. 11 0. 07
2 0. 85 0. 94 1. 12 1. 00 1. 07 0. 23 0. 21 0. 06 0. 16 0. 12
3 1. 36 1. 02 0. 60 1. 00 1. 96 0. 78 0. 39 0. 07 0. 17 0. 15
4 0. 44 0. 45 0. 22 1. 00 0. 80 0. 20 0. 19 0. 03 0. 11 0. 05
5 0. 79 0. 45 0. 79 1. 00 1. 32 0. 31 0. 10 0. 14 0. 12 0. 10
6 1. 56 3. 17 2. 24 1. 00 3. 38 0. 42 1. 49 0. 19 0. 41 0. 69
7 0. 43 0. 34 0. 08 1. 00 － － 0. 06 0. 42 0. 12 0. 10
由表 3 可看出，10 个共有指纹峰的相对峰面积值都有
一定的差异，可见，不同的生长环境对翻白草的质量有一定
的影响。同时，还可看出同属间的药用植物蛇含委陵菜和
委陵菜跟翻白草之间存在明显的差异，反应了化学成分和
含量的差异。
参 考 文 献
［1］ 刘艳南，苏世文，朱延儒．翻白草抗菌活性成分研究［J］．沈阳
药学院学报，1983，6(1) :17.
［2］ 邵长平，尹旭斌，武德会，等． 翻白草合剂治疗 2 型糖尿病临
床研究［J］．山东中医杂志，2001，20(10) :588.
［3］ 王琦，周玲仙，罗晓东，等． 翻白草不同方法提取物对小鼠降
血糖作用［J］．中国公共卫生，2007，2(23) :225.
［4］ 黄锁义，黎海妮，余美料．益母草总黄酮的提取及鉴别［J］．时
珍国医国药，2005，16(5) :398.
The HPLC Chromatogram of Discolor Cinquefoil Herb and Medicinal
Plants in Potentilla L
LUO Yue-ji1，LI Yan1，SU Ming1，WANG Lin1，TANG Ting1，ZENG Jie*
(Department of Basic Medical Sciences Changsha Medical University，Changsha 410219，China)
Abstract HPLC fingerprints，a sensitive and specific method is an enssential way to study the herb fingerprint． Atlantis
C18(250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ，flow rate:1． 0 mL / min ，detecting wavelength:368 nm and the column temperature:25 ℃ ． The
samples collected from different areas were determined． The samples quality was assessed by similarity evaluation system for chroma-
tographic fingerprint and this method had a good repeatability and reproducibility． The method can be used to identify and evaluate
the quality of Poterntilla discolor Bge conveniently.
Key words Poterntilla discolor Bge，Potentilla L，HPLC，Fingerprints
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