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966. (修回:2010-09-08)
翻白草中齐墩果酸和熊果酸测定的不确定度分析＊
张冬冬 1　赵博鑫 2　杜　慧 3　王佳祥 4　孟令云 1
(1哈尔滨市职工医学院·哈尔滨 150080　 2黑龙江省卫生学校·哈尔滨 150036　3湛江海洋大学·湛江 524028　4黑龙江省质量监督检测研究院·哈尔滨 150050)
＊哈尔滨市科技攻关计划项目 No.2005AA9CS116-36
1　翻白草中齐墩果酸和熊果酸含量测定的方法和结果
采用高效液相色谱法 [ 1 , 2] 。翻白草干品用 85%乙醇浸渍 , 超声
波提取 ,重复 8次后定容 ,至Wateers-600高效液相色谱仪分析 ,测
得结果是齐墩果酸回收率为 2.24%,熊果酸回收率为 2.33%。齐敦
果酸含量 544.70mg/kg,熊果酸含量为 427.08mg/kg。
2　不确定度分量的分析和评定 [ 3]
2.1　称量所引起的不确定度　由于天平精度很高 , 数显非常稳定 ,
称量重复性引入的不确定度忽略不计。该准确级的天平在 0.1mg～
200g称量范围的最大允许误差(使用中)为 ±0.1mg, 由称量误差导
致的不确定度按矩形分布计算(B类评定),则样品称量引起的不确
定度为:(1)天平的校准:天平的最小分度值为 0.01g, 所以 u(m0)1
=0.01g/ 3=0.0058g;天平的最小分度值为 0.1mg,所以 u(m0)2 =
0.1mg/ 3=0.058mg。 (2)样品称量引起的不确定度:准确称量样品
10.00g(即 m),所用 u(m1)=u(m0)1 /m=0.0058g/10g=0.00058。
(3)标样称量 、配置 、稀释引起的不确定度:准确称取标准品齐墩果
酸 0.0526g(即 m1),含量大于 99%(X1), 分散区间 ,用甲醇溶解并
定容到 100ml(V1),浓度为 526μg/ml标准齐墩果酸储备液。齐墩果
酸在稀释的过程中 ,用到了 5ml移液管(5ml移液管 20℃时的标准偏
差为 ±0.020ml,其标准不确定度也按矩形分布),转移到 100ml容量
瓶中定容(100ml容量瓶 20℃时标准偏差为 ±0.05ml,按矩形分布)
所以:u(m2)1 =u(m0)1 /m1 =0.0058g×10-3 /0.0526g=0.00110;u
(c1)=1%/ 3=0.00577;u(V移)=0.02/ 3 =0.01154;u(V容)=
0.05 / 3 = 0.02887; u ( B1 ) =
u(m2)21 +u(c1)2 +u(V移)2 +u(V容 )2 =0.03164。
准确称取标准品熊果酸 0.0179g即(m2 ), 含量大于 99.5%
(x2),用甲群溶解并定容到 100ml(V2),浓度为 179μg/ml标准熊果
酸储备液。熊果酸在稀释的过程中 ,用到了 10ml移液管(5ml移液
管 20℃时的标准偏差为 ±0.040ml, 其标准不确定度也按矩形分
布),转移到 100ml容量瓶中定容(100ml容量瓶 20℃时标准偏差为
±0.05ml,按矩形分布)所以:u(m2)2 =u(m0)2 /m2 =0.0058mg×
10-3 /0.0179g=0.00324;u(c2)=1%/ 3=0.00577;u(V移)=0.04 /
3 = 0.02309;u(V容 ) = 0.05/ 3 = 0.02887;u(B2 ) =
u(m2)22 +u(c1)2 +u(V移)2 +u(V容 )2 =0.03756。
2.2　样品萃取等处理引起的不确定度　主要表现为加标回收率上 ,
由于样品前处理不完全或处理过程中导致齐墩果酸和熊果酸的损失
或污染等 ,将使样品中的齐墩果酸和熊果酸不能 100%进入到测定
液中。从表 2的结果可查证:本法齐墩果酸的加标回收率为
96.23% ～ 101.86%,熊果酸的加标回收率为 95.35% ～ 101.32%,样
品回收率的不确定度按 -JJF1059-1999第 5.8节计算。不确定度
为: 齐 墩 果 酸 , u (R1 ) = a+-a-)2 /12 =
(96.23%-101.86%)2 /12 = 0.01625;熊 果 酸 , u(R2 )=
a+-a-)2 /12= (96.35%-101.32%)2 /12=0.01723。
2.3　峰面积所引起的不确定度　精密吸取齐墩果酸(10.52μl/ml)
和熊果酸(14.32μg/ml),对照品溶液 20μl, 按上述色谱条件连续进
样 6次进行测定 ,齐墩果酸和熊果酸峰面积积分值的相对标准偏差
u(S1)=RSD=0.00891和 u(S2)=RSD=0.00992。
2.4 　 合 成 不 确 定 度 　 齐 墩 果 酸 , u(x1)/x1 =
u(m1)2 +u(B1)2 +u(R1)2 +u(S1)2 = 0.03667;熊 果酸 ,
u(x2)/x2 = u(m1)2 +u(B2)2 +u(R2)2 +u(S2)2 =0.04250。
2.5　扩展不确定度 　齐墩果酸, U =ku(x1)/x1[其中取 k= 2,
U(P = 95%)] , 则 U= 2 × 0.03667 = 0.07334;熊果酸 , U =
ku(x
2
)/x
2
[其中取 k= 2, U(P = 95%)] , 则 U= 2 × 0.04250:
0.08500。
3　讨论
用高效液相色谱法测定翻白草中齐墩果酸和熊果酸的浓度 ,置
信概率 P=95%,则相对不确定度分别为 7.33%和 8.50%, 测定结
果分别为(544.70±39.92)和(427.08±36.30)。 由以上各种不确
定度的计算分析发现 ,样品浓度的不确定度由标准使用液的不确定
度 、峰面积测量重复性的不确定度 、最终定容体积 、取样量及齐墩果
酸和熊果酸回收率的不确定度 5部分组成。其中齐墩果酸和熊果酸
回收率引起的不确定度分量占主要部分 ,标准使用液的影响其次 ,称
量引起的不确定分量影响很小 ,可以忽略不计。 提示在测定翻白草
或其他中药的测定过程中回收率的操作要特别认真。
参考文献
1　张庆合.高效液相色谱实用手册.北京:化学工业出版社 , 2008:
199.
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·558· 中国中医药科技 2010年 11月第 17卷第 6期 Dec.2010 Vol.17 No.6