全 文 ：园 艺 学 报1 9 9 5, 22 ( 3 ) : 2 56一佗6 2
A e t a H o r t ic u l t u ar e S i n ic a
大 白菜和紫菜蔓 自交系染色体组 D N A 的
R A P D 分析 `
漆小泉 朱德蔚 沈 摘 张 智 孙 日飞
(中国农业科学院蔬菜花卉研究所 , 北京 100 08 1)
提 要 用 8个随机引物 ( 10b p ) 对 2个紫菜签 自交系的3个单株和 4个大白菜自交系的4个
单株的染色体组 D N A 进行 P C R 扩增 , 共有 40 条带分离清晰 、 明亮 , 其中 31 条带在 7 个单
株中表现出差异 , 可作为遗传标记 ( R A P D 标记 ) 。 4 个大白菜自交系之间的平均差异条带数
为 1 .2 3 , 2 个紫菜墓自交系之间为 9 . 5 , 大白菜与紫菜墓之间平均有 15 . 5 条带的差异 。 用 7 个
引物在 93 W 05 一 7 (紫菜茎 ) 和 93 W58 一5 ( 大白菜 ) 之间检测出 21 个 R A P D 标记 。 从同一 自
交系的不同单株抽提的染色体组 D N A 扩增出较一致的 D N A 谱带 , 而不同自交系间扩增出的
D N A 谱带差异很大 , 这表明此方法也可以象 R F L P 一样 , 用于大白菜和紫菜共的分子标记。
关键词 R A P D ; A P一 P C R ; 遗传多态性 ; 大白菜 ; 紫菜签
近年 , 在多聚酶链式反应 ( P C R , p o lym e r a s e C h a i n R e a e t io n ) 基础上发展起来的
R ^ P D ( R a n d o m ly A m p l i fl e d P o ly m o r p h i e o N A ) 〔 10〕 和 A P一 P e R ( A r b i t r a r i l犷 P r ime d
R c )R
〔9〕 技术 , 是使用单一的随机引物 (通常为十聚体 ) , 在耐热聚合酶存在下 , 进行基
因组 D N A 体外扩增 , 扩增产物通过琼脂糖凝胶或聚丙烯酞胺电泳分离 , 经 E B 染色来检
测扩增的 D N A 片段的多态性 。 与 R F L P 相比 , R A P D 具有方法简单 , 不需内切酶 、
D N A 探针及分子杂交和放射自显影等复杂技术 , 耗费少 , 效率高等优点 , 已应用于生物
学的各个领域 。 如 : M ia t in 等 〔 ’ 〕 通过比较番茄等基 因系的 R A P D 标记 , 分离了抗
P s e u d o m o n a s 的基因紧密连锁 o N A 片段 , K l e i n 一 la n k h o r t 等 〔 4〕 采用这一方法进行番茄
遗传标记 , P ar an 等 〔 ’ 〕 用 同样的方法定位了葛芭霜霉病抗性基因 , H u 和 Q iu r os 即 应用
R A P D 分析进行青菜花和花椰菜的品种鉴别 , 鲍晓明等 〔 `〕 用此方法鉴定了两个小冰麦易
位系 。
大 白菜 ( B ar s ic “ 二 n 切es t ir 、 L . ) 是原产我国的重要园艺作物 , 也是普遍栽培和食用
的主要蔬菜作物之 一 。 近年 , 收集保存的大 白菜种质资源多达 3 0 0 0 余份 , 具有各种植物
学性状和农艺性状的变异类型 。 本试验以大 白菜和紫菜荃 自交系单株为试材 , 研究染色体
组 D N A 的 R A P D , 旨在发挥我国这一重要原产作物的优势 , 为其演化 、 分类以及分子
遗传学等研究探索一种有效方法和技术 。
1 材料和方法
收稿日期 : 19 9 4一 0 8一2 9 ; 修回 日期 : 19 9 5一0 3一 2 0。
* 国家自然科学基金和农业部 “ 蔬菜生物学重点开放实验室 ” 资助项 目。 本研究得到中国科学院遗传所郑洪刚博
士 、 中国农科院生物技术中心郭三堆副研究员 、 华中农业大学园艺系晏儒来教授的大力支持 , 特致谢意 。
3期 漆小泉等 : 大白菜和紫菜荃 自交系染色体组 D NA 的 A P RD 分析
L l材料
2个紫菜蔓自交系编号为 9 3 W0 3和 9 3 W50的种子由华中农业大学园艺系晏儒来教授
提供 。 4个 大 白菜 自交系编号为 9 3 W5 8, 圆筒型 ; 93 W 59 , 平头 型 ; 93 W 6 0 , 卵圆型 ;
93 W 61
, 直筒型的种子为本所大 白菜育种组提供。
L Z 方法
1
.
2
.
1 D N A 抽提 将上述试材于 19 93 年冬季播种 , 定植于 日光温室 , 植物生长 10 片叶
后 , 从各单株上取其嫩叶 3一 5g , 用蒸馏水冲洗干净 , 吸去水分后剪碎 , 放人研钵 , 在液
氮中研成粉末 , 再将其转人 50 m L 的离心管中 , 加 25 m L 60 ℃预热的 D N A 提取缓冲液
( 4 2% 尿素 , 0 . 3 5 m o l / L N a C I , 0 . O5m o l / L T r i s 一H C I P H S . 0 , 0 . OZm o l / L E D T A ,
2% aS cr os y
,
1
.
5% 苯酚 ) , 用玻璃棒搅匀以防结团 , 加 0 ` 75 m L 20 % SD S , 倒转离心管数
次 , 使之混匀 , 在 60 ℃下保温 20 分钟 , 其间要倒转离心管数次 。 加 巧 m L 氯仿 / 异戊醇
( 2 4 : l )
, 倒转离心管 3 0 分钟 , 使之成乳状液 , 2 0O0 r / m i n 离心 15 分钟 , 再加氯仿抽提
两次 。 吸出含 D N A 的水相 , 转人另一 50 m L 的离心管中 , 加 2 / 3 体积或一倍体积的异
丙醇 , 倒转离心管数次 , 1 5 0 0 r / m in 离心 5 分钟 , 将沉淀的 D N A 用 70 % 的乙醇洗两
次 , 抽 干 , 转 到 20 m L 的离 心管 中 , 加 4m L T E , 在 60 ℃ 下溶解 1 小时 , 再 用
or 0 0
r
/ m in 离心 10 分钟 , 将上清液移人新管中 , 加去 D N A 酶的 R N A 酶 , 使终浓度
为 10 # g / m L 并在 37 ℃ 下保温半小时 。 然后加 1 / 10 体积的 3 m ol / L 的醋酸钠和二倍
体积的冷乙醇 , 挠出沉淀的 D N A , 用 70 % 乙醇洗两次 , 抽干后溶于 l m L 超纯灭菌水
中 。 测定 O D 26 0 和 O D 28 O 值 , 确定其浓度和纯度 , 即可用于 P C R 反应的模板。
1
.
2
.
2 引物及 P C R 反应 本实验应用了 8 个引物 , 均为美国 O pe or n 公司出品 , 购自中
国科学院遗传研究所 , 分别为 : O P A E 0 4、 O P A E 06 、 O P A E 0 7 、 O P A E 13 、 O P A E 14 、
O P A E 15
、
O P A E 17 和 ` o P A E z g , 长度均为 1 0 个 b p 。 扩增反应的总体积为 2 5拼L , 其中
包括 10 m m o l / L T r is 一H C I P H S . 3 , SOm m o l / L K C I, l . s m m o l / L M g C 12 , 4 种核昔
酸各为 1 00 # m o l / L , 0 . 3拜m o l / L 引物 , 5 0 n g 的染色体组 D N A , 2 . 5 单位的 T a q 聚合酶
(华美公司出品 ) 。 以上各组份按比例加到 O. s m L 的反应管中 , 加盖 1层石蜡油 , 按以下
程序进行 P C R 反应 : 94 ℃ 变性 1 分钟 , 35 ℃复性 1 分钟 , 72 ℃延伸 2 分钟 , 循环 45
次 , 最后在 72 ℃下保温 5 分钟 。 扩增产物在 2% 琼脂糖凝胶中电泳 4 小时 , 澳化乙锭染
色 , 紫外灯下观察结果并照像 。 不同引物扩增出的 D N A 电泳条带 , 据其分子量大小 (碱
基对长度 ) 进行命名 。 如 O P A E 04 一 440 意为用引物 O P A E 04 扩增出的 、 长度约为 4 4 0 b p
的 D N A 片段 。
2 结果与讨论
2
.
1 电泳分离谱带和扩增反应的适宜条件
扩增产物在 2 . 0%琼脂糖凝胶中采用 中电压 电泳能分离出清晰的带 ; 在 P C R 扩增
时 , 以采用 35 ℃的变性温度较合适 , 过低或过高的温度都不利于 D N A 片段的扩增 , 这
同 s o b r al 和 H o ne cy ut t 的结果相 一 致 〔 8〕 ; 多 次条件 优化试 验表 明 : 一 般采 用
10 拜m ol / L 的 d N T P 和 0 . 3 # m ol / L 的弓}物为较合适的反应浓度 , 如再增加浓度对扩增
反应增效不大 ; 而基因组 D N A 用量 和酶的用量对 D N A 扩增量影响较大 , 不同来源的
园 艺 学 报22 卷
T q a聚合酶的效能也不一样 , 要求的模板 D N A 用量和酶的用量也不尽相同 , 运用 15n g
的基因组 D N A , 均未能检测 出扩增的 D N A 片段 , 增加到 50 gn , 出现效果较好的扩增
带 , 用 2 . 5 单位的酶浓度得到较好的试验效果 ; 扩增反应缓冲液最好用与聚合酶配套的专
一缓冲液 , 运用 25 # L 的反应体积 , 能有效地节省试剂 , 循环 40 一 45 次 , 能扩增出足量
表 1 主要扩增产物电泳谱带表
T a b le 1 M
a i n E le e tr o帅 o er 6 e b a n d s o f P C R . m p lin e a -
t io n
谱带名称
N a l刀 e o f b a n d
大 白 菜
C h in e s e e a b b a ge
紫 菜 墓
P u r leP
e a i一 t a i
9 3 w 9 3 w 93 w 9 3 w 9 3 w 9 3 w 9 3W
6 1一 1 6 0一2 59一 4 5 8 - 5 0 5一 7 0 3一 3 0 3一2
十++++ +一十+十
++十++
+一十
+十+十+
+一+十+一十+
+十一+
+一++一+
+十
+十
+十+
+十一
+一
+一
+十+
+
+
+
+一十+一+十
的 D N A 片段 , 扩增产物的重演性好 , 扩
增出的谱带基本一致。
.2 2 扩增的电泳谱带分析
用 8 个随机引物共扩增出 72 条电泳谱
带 , 其中 O P A E06 扩增 的谱带最多 , 为
16 条 , 其次是 O P A E 0 4 , 1 2 条 , O P A E 0 7 、
O P A E 14 和 O P A E 15 均 为 10 条 , 而
O P A E 13 和 O P A E 19 分别 为 5 和 6 条 ,
O P A E 17 只扩增出 3 条谱带。 各条带的片
段大小在 2 5O0 b P一 30 0 b p 之间 , (图版 l ~
8 )
。
引物 O P A EO4 扩增出的电泳条带 , 最
大 片 段 为 1 4 0 0 b p 左 右 ( O P A E 0 4一
14 0 0 )
, 最小 的在 4 5 0 b P 处 ( O p A E 0 4一
4 5 0 )
,
O P A E 0 4一 1 4 0 0 、 1 3 0 0 、 10 0 0 和 6 2 0
为 7 个自交系单株共有 , 其余 8 条带具有
自交系的特异性 ( 图版 1 ) 。 引物 O P A E 06
扩增的电泳谱带 , 是 8 个引物中最多的一
个 , 共有 1 6 条带 , 最大 片段为 2 0 00b P,
最小的为 4 3 0 b P, 有 n 条带在 7 个自交系
单株中有差异 , 而其余 5 条为基本谱带 ,
为 7 个供试 材料共有 ( 图版 2) 。 引物
O P A E 17 扩增出的 D N A 电泳谱带 , 是 8
个引物中最少的一 个 , 只有 3 条带 , 即
O P A E 17一 13 0 0 、 O P A E 17一8 0 0 及 O P A E 17
一5 0 , 其 中 O P A E 1 7一 5 5 0 为 7 个供试材
所共有 , 而 O P A E 17一 13 0 0 和 O P A E 17一
80 0 虽然有变化 , 但条带微弱 , 不 稳定
(图版 7 ) 。
多次 P C R 和 电泳实验表明 , 那些在
紫外光下明亮 、 清晰的谱带受条件变化的
影响小 重演性较好 , 这样的谱带有 40 条
(表 l) 。 以这些稳定性较好的谱带 , 进行
亲缘关系分析 、 品种鉴别 以及遗传图谱构
O P A E 0 4一 14 0 * +
O P A E 0 4一 1 10 0 一
O P A E 0 4一 10 0 0 * +
O P A E 0 4一9 0 0 一
O P A E 0 4一6 20 * +
O P A E 0 4一5 4 0 +
O P A E 0 4一4 5 0 一
O P A E 0 6一 14 0 0 * +
O P A E 0 6一 1 25 0 * +
O P A E 0 6一 1 10 0 一
O P A E 0 6一 1 0 5 0 +
O P A E 0 6一 7 5 0 一
O P A E 0 6一 7 0 0 +
O P A E 0 7一 2 5 0 0 一
O P A E 0 7一 2 10 0 * +
O PA E 0 7一 1 8 0 0 一
O PA E 0 7一 1 0 5 0 * +
O P A E 0 7一 8 3 0 一
O P A E 0 7一 5 0 0 +
O P A E 13一 17 0 0 * +
O P A E 13一 9 0 0 一
O P A E 13一 8 0 0 一
O P A E 13一 4 5 0 一
O P A E 14一 16 5 0 一
O P A E 14一 12 5 0 一
O P A E 14一 10 0 0 +
O P A E 14一8 5 0 +
O P A E 14一4 3 0 +
O P A E 14一4 0 0 +
O P A E 15一 2 0 0 0 一
O P A E 1 5一 1 5 0 0 一
O P A E 1 5一 1 0 0 0 一
O P A E 1 5一 7 0 0 +
O P A E 15一 5 4 0 一
O P A E 15一 3 0 0 一
O P A E 17一 5 5 0 * +
O P A E 19一 12 5 0 +
O P A E 19一 6 0 0 一
O P A E 19一 5 4 0 一
O P A E 19一 4 0 0 一
* ; 无差异谱带 。
* : n o d ive r s i t y b a n d
.
3 期 漆小泉等: 大 1勺菜和紫菜墓自交系染色体组 N DA的 P R A D分析
建等研究将会得到较为可靠的结果 。0 4条带中9 条为各试材共有 , 余者在 7 个 自交系单
株 中 表 现 多 态 性 , 它 们 主 要 来 源 于
O P A E 1 4
、
O P A E 15 和 O P A E 19 七个引物 ,
不能有效地用于检测这 7 个材料的差异·
.2 3 大 白菜和 紫菜要 自交系染 色体组
D N A 的 R A P D 分析
由 表 1 和 图 版 1、 3 、 5 可 知 ,
O P A E 0 4一 4 5 0 、 O P A E 0 7一8 3 0 和 O P A E 14
一 1 2 5 0 为紫菜蔓特有的条带 , 4 个 大 白菜
自交系无此条带 , 它们可能为紫菜蔓的特
征带 ; 同样 , O P A E 14一8 5 0 和 O P A E 14
一4 3 0 是 4 个大 白菜自交系特有的条带 , 而
3 个紫菜墓 自交系单株没有这 2 条带 , 它
O P A E 0 4
、
分别 为 4 、
O P A E O6
、
4
、
4
、
3
、
6
、
O P A E 0 7
、
O P A E 13
、
6 和 4 条 。 O P A E 17
表 2 RA P D 标记差异带数对比表
T a b le 2 P a i r w i se d l f]兔r e n ce s o f R A P D nt a r ke r s
自交系单株 93W 9 3W 9 3W 9 3W
S e lif n g lin e s 03一 2 0 3一 3 0 5一 7 5 8一 5
9 3W
5 9一 4
9 3W 9 3W
6 0一 2 6 1一 l
一ō一一9 3W 0 3一 29 3W 0 3一 39 3W 0 5一 79 3W 5 8一 59 3W 5 9一 49 3W 6 0一 29 3W 6 1一 l们可能是大 白菜的特征带 。 据此可进行大白菜和紫菜蔓的品种划分和归类等研究 。3 个紫菜蔓单株中 93 W 03 一 2 和 93 W03 一3 为 同一自交系 ( 十月红 1号 ) 的两个单株 ,它们之间检测出 3 条带的差异 , 它们与另一紫菜蔓 自交系 93 W 05 一 7 (十月红 2 号 ) 之 间
分别有 9 和 10 条带的差异 。 4 个大白菜 自交系之间以及大白菜与紫菜蔓之间的差异比较
结果详见表 2 。 大 白菜自交系 93 W 58 一5 ( 圆筒型 ) 与 93 W60 一 2 (卵圆型 ) 之间的条带变
化表现较一致 , 只有 6 条带的差异 , 93 W 58 一5 同 93 W59 一 4 (平头型 ) 之间分别有 10 和 8
条带的差异 , 而 9 3W 5 8一 5 、 9 3W 5 9一4 和 9 3W 6 0一2 同 9 3 W 6 1一 l (直筒型 ) 之间分别存在
20
、
14 和 16 条带的差异 。 说明直筒类型的 93 W 6 1一 1 同另外 3 个类型 的相似性较小 , 而
差异较大 ; 平头型的 93 W59 一 4 同圆筒型和卵圆型的差异次之 ; 而圆筒型 ( 93 W58 一 5) 与
卵圆型 ( 93 w 6 0一 2) 差异最小 暗示两者之间关系较近 。 根据李家文的分类 〔“ 〕 , 直筒型
大白菜同平头 、 卵圆和圆筒型的形态差别较大 ; 平头型和卵圆型大白菜均为结球性较好的
类型 , 它们之间的形态差异也较小 ; 圆筒型大 白菜是卵圆型和直筒型杂交后 , 经定向选择
的结果 , 株型较高大 , 像直筒型 , 而其它大部分经济性状偏 向卵圆型大白菜 , 所以圆筒型
同卵圆型关系更近 。 这同上面的 R A P D 分析结果较吻合 。
.2 4 R A P D 标记的应用和特点
简单比较条带的有 、 无 , 可发现类型之内和类型之间的相互关系 。 2 个紫菜荃自交系
之间的差异带数平均为 .9 5 , 4 个大 白菜 自交系之间为 1 2 . 3, 大白菜与紫菜荃之 间的差异
带数为 15 .5 。 差异带数越多 , 差异越大 , 相似性越小 , 两者亲缘关系越远 ; 反之 , 差异
带数越少 , 差异越小 相似性越大 , 两者关系越近 。 本文简单分析的结果 , 也表明紫菜墓
和大 白菜 2 个分类单位 (变种或亚种 ) 内各自交系的差异较小 而它们之间的差异较大 ,
因为它们分属 2 个不同的亚种 〔 2〕 , 这同一般生态 、 形态分类及已知的亲缘关系结果较吻
合 。 说明用 R A P D 方法进行分类 、 亲缘关系分析等研究是非常有效的 。 如果进一步增加
引物数 , 检测出的变异会更多 , 由此得出的结果将更全面 、 准确 。
比较各品种 (或品种群 、 类型等 ) 的特异 (或特征 ) 条带的差异 , 可进行品种的归类
和鉴别 以及纯度分析 。 例如 , O P A E 04 一450 为紫菜墓特有的条带 , 而大 白菜不具有此
园 艺 学 报22 卷
带 , 据此可进行品种 的归类和鉴别 ; 又如 , O P A E 07 一 50 为 93 W 6 1一 1 自交系的特异条
带 , 而其它 6 个自交系单株无此条带 , 这样可将 93 W 6 1一 1 同其他自交系区分开 。 理论上
R A P D 分析能检测出无限多的变异 , 在进行品种鉴别和纯度分析等研究时 , 其效率及准
确性将大大超过同工酶分析方法 。
只用 7 个引物扩增 , 就能在 93 W 05 一7 ( 紫菜墓 ) 同 93 W 58 一5 (大 白菜 ) 之间发现
21 个 R A P D 标记 , 用此亲本构建连锁群体 , 进行 R A P D 标记连锁图的构建 , 效率高 、
方法简单 。 如 se d er o f 及其同事以松树为材料 , 在 2 个 月内构建了 一个具有 191 个
R A P D 标记的连锁图 〔“ , , 而相同工作用 R F L P 方法需耗时 20 个月 。
总之 , 大 白菜染色体组 D N A 的 R A P D 分析结果表明 二 同一 自交系中不 同单株基因
组 D N A 扩增出的谱带基本相似 , 说明植株生长 、 D N A 抽提 、 P C R 反应等过程中细微变
化对扩增反应的干扰较小 , 扩增出的 D N A 片段主要是由基因组 D N A 和引物决定 ; 不同
自交系的材料扩增的 D N A 片段有较大的差异 , 、这反应出不同 自交系染色体基因的差异 。
通过以上结果可知 , 在相同条件下 R A P D 分析结果稳定性较好 , 直接反应出 D N A 的差
异 , 也可以象 R F L P 一样 , 用于染色体组基因的分子标记和基因定位 ; 快速构建连锁
图 ; 进行亲缘关系分析和品种 (种 ) 分类 , 研究物种起源和演化 ; 还可用于品种鉴别和一
代杂种品种纯度的分析 , 其效果将大大超过同工酶分析方法 。
参 考 文 献
鲍晓明 、 黄百渠 、 李松涛 、 张忠廷 、 王 斌 , 19 93 , 用 R A P D 技术鉴定两个小冰麦易位系 。 遗传学报 , 20 ( l) :
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A P P I
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G e n e t 一 8 6 : 10 5一 1 1 2
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M 一 19 9 0 , F in g e r p r in t in g g e n o m e s u s in g PC R w i th a r b it r a r y P r ime r s
.
N u e le a r
A e id s R e s
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,
18 : 7 2 13一 7 2 1 8
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K u b e lik
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R一 L iv a k , K . J . , R a af ls k i , J . A . a n d T in g e y , 5 . V . , 19 9 0 , D N A
op ly m
o r Ph is m
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m P liife d b y
a r b i t r a r y P r ime
r s a r e u se fu l a s g e ne t i
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N u e le ic A e i d s R e s
.
,
18 : 6 5 3 1一 6 5 3 5
3 期 漆小泉等二 大白菜和紫菜墓自交系染色体组 D NA 的A R PD分析2 6 1
A R PDM a rk ero sfG eno mi c D NA i nC h i ns e eC a b ba ga e nd Pu r PI e
C a i一 ta i I nb r eL d i s n e
Q i i Xo a qa u n
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Z h u D e w e i
,
S h e n D i
,
Z h a n g Z h i
,
a n d S u n R i fe i
( nI s t i tu r e of V e ge r a ble s a n d lF o w e r s
,
C h i n e se A e a de 卿 of A岁ic u lt u r a l S e ie n e e s , B e ij n g 10 00 8 1 )
A b s tr a e t T he g e n o m i e D N A i s o l a t e d fr o m of u r i n b re d l in e s o f C h i n e s e e a b b a g e
( B ar
s s ic a e a呷 e s t r i s L . s s P . 尹 e k l’n e n e se ) a n d t w o i n b r e d l ine s o f P u r p le e a i一 t a i ( .B
e a 呷 e s t r i s L . v a r . 夕 u , u r e a ) w a s u s e d i n t h i s s t u d y t o g e n e r a t e t h e R A PD m a r k e r s b y e ig h t
a r b i t r a r y 10一 m e r P r im e r s . T he a m P l iif e d fr a gme n t s i
z e r a n g e d fr o m 3 0 0 t o 2 5 0 0 b P
.
F o u r t y
fr a g me
n t s s h o w e d e l e a r a n d r o b u s t b a n d s o n t h e g e l
.
A m o n g the m
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3 1 b a n d s a m Pl iife d b y
7 P r ime
r s P r o v id e d P o l y m o r P h i s m b e tw e e n 6 i n b r e d li n e
s , a n d e o u ld b e u s de a s m o le e u la
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m a r k e r s
.
B y u s i n g 7 p r im e
r s , i t a s s a y e d 2 1 R A p D m a r k e r s b e tw e e n 9 3W 0 5一7 ( P u r P le
e a i一 t a i ) a n d 9 4W 5 8一5 ( C h i n e s e c a b b a g e )
.
T h e a ve r a g e n u m b e r o f p o ly m o r p h ie m a r k e r s
b e tw e e n C h i n e s e e a b b a g e a n d P u r P le e a i一 t a i w a s 15 . 5 , b u t a m o n g t h e m w a s 12 . 3 a n d 9 . 5
er s pe
e t ive ly
.
T h e R A P D s o f t w o in d i v id u a l P la n t s fr o m o n e i n b er d l i n e s w e er ve r y s im i l ia r
.
R A P D m a r k e r s lik e R F L P m a r k e
r s e o u ld a l s o b e u s e d a s m o le e u la r m a
r k e r s i n B r a s ic a
.
K e y w o r d s
一
R A P D ; A P一 P C R ; M o le e u la r m a r k e r s ; D N A P o ly m o r P h i s m ; B r a s s卜
c a c a ” 切 e s t r is
图 版 说 明
1
. 引物 O P A E 0 4 ( C C A G C A C T T C ) 扩增的 D N A 带型 : 2 . 引物 O PA E 0 6 ( G G G G A AG A C A ) 扩增的 D N A 带
型 : 3 . 引物 O PA E 0 7 ( G T G T C A G T G G ) 扩增的 D N A 带型 : 4 . 引物 O PA E 1 3 ( T G T G G A C T G G ) 扩增的 D N A
带型 ; 5 . 引物 O PA E 14 ( G A G A G G C T C C ) 扩增的 D N A 带型 : 6 . 引物 O P A E 1 5 ( T G C C T G G A C C ) 扩增 的
D N A 带型 ; 7 . 引物 O P A E 1 7 ( G G C A G G T T C A ) 扩增的 D N A 带型 ; 8 . 引物 O P A E 1 9 ( G A C A G T C C C T ) 扩增
的 D N A 带型 : l一 7 为实验材料编号 , M I : D N A 标准分子量 1 ( L a m b d a D N A一 E e o R I / H in d l ) , M Z : D N A
标准分子量 V ( p B R 3 2 2 D N A 一H a e l ) 。
E x 川a n a如n of r p la te s
1 A m P li icf
a t io n o f g e n o m i
e D N A s u s in g p r ime
r O P A E 0 4 ( C C A G C A C T T C ) ; 2 A m p licf
a t io n o f g e on m ic D N A
s
us i n g P r ime
r O P A E 0 6 ( G G G G A A G A C A ) ; 3 A m P liif
e a t io n o f g e n o m i
e D N A
s u s in g P r ime
r O PA E 0 7
( G T G T e A G T G o ) ; 4 ^ m p li if
e a t io n o f g e n o m i
e n N ^ 5 u si n g p r im
e r o P ^ E 13 ( T e T o G A C T G G ) : 5 ^ m p li i-f
c a t io n o f g e n o m i
e
D N A
s u s in g P r ime
r 0 P A E 14 ( G A G A G G C T C C ) ; 6 A m P liif
e a t io n o f g e n o m i
e
D N A
s u s i n g
P r ime r O P A E 1 5 ( T G C C T G G A C C ) ; 7 A m P liif
e a t io n o f g e n o m i
e D N A
s u s in g P r im
e r O PA E 17 ( G G C A G G T T
-
C A ) ; 8 A m P I币e a t iO n o f g e n o m ic D N A s u s in g P r im e r O P A E l 9 ( G A C A G T C C C T ) ; l ~ 7 is the N o . o f m a t e r i a ls ,
M l
: D N A m o le e u al r w e ig h t m
a r
ke
r l ( L a m b d a D N A 一 E e o R I / H in d l ) , M Z : D N A m o le e u la r w e ig h t m a r ke r
V ( PB R 3 2 2 D N A一H a e l )
.