全 文 ：翻白草对 2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠
抵抗素基因表达的调节作用
宗灿华 , 郭新民 , 董　崎　 (牡丹江医学院生化与分生教研室 , 牡丹江　157011)
摘　要:目的　观察翻白草水提液 (HPD)对高脂膳食加链尿佐菌素 (STZ) 诱导的 2型糖尿病 (2 - DM )胰岛素抵
抗大鼠血清胰岛素水平及白色脂肪组织抵抗素基因 mRNA表达的影响 , 探讨 H PD提高胰岛素敏感性的可能机制。方法　
选用高脂饲料诱导的W istar大鼠建立胰岛素抵抗模型后 , 继续用小剂量 STZ建立 2 -DM胰岛素抵抗模型。将造模大鼠随机
分为模型对照组 (水) 和 3个 HPD组 (3g /kg, 6g /kg, 12g /kg), 另选 10只大鼠为正常对照组。各组灌胃 8周后 , 空腹取
材 , 放射免疫法测定空腹血清胰岛素 , RT - PCR法检测肾周脂肪组织抵抗素 ( resistin) 基因 mRNA水平。结果　与模型对
照组比较 , HPD高 、 中剂量组能显著降低空腹血清胰岛素水平;HPD各组均能显著降低大鼠肾周脂肪组织抵抗素基因 mR-
NA表达。结论　HPD水提液具有改善 2 -DM 胰岛素抵抗大鼠的胰岛素抵抗作用。
关键词:翻白草;2型糖尿病;胰岛素抵抗;抵抗素基因;逆转录聚合酶链反应
中图分类号:R394. 3　　　文献标识码:A　　　文章编号:1006 - 9534 (2007) 08 - 0025 -03
Regu la to ry e ffec t o f he rba poten illae d isco lo ris on res istance gene express ion o f type 2 d iabe tes insu lin res istance
ra ts. ZONG Can -hua, GUO X in -m in , DONGQ i. (MudanjiangM edica lCollege, Mudanjiang 157011, China)
Abstract:Ob jec tive:To obse rve the effe cts of H erba Po ten illae D isco loris decoc tion on resistance genemRNA expre ssion o f se r-
um insu lin and wh ite adipo se tissue o f type 2 d iabetes insu lin resistance ra ts induced by high - fat diet and strep to zotoc in, to study pos-
sible mechanism o fHPD enhancing insulin sentiv ity. M e thods:To build m ode l o f type 2 diabe tes insulin resistance ra ts induced by
high - fa t d ie t and strep tozo tocin. Them ode l ra tsw ere div ided in to four g roups a t random:model g roup and low , m iddle, high dosage
o f HPD g roups w ith 10 in each group, ano ther 10 ra tsw e re se le cted as no rm al group. Se rum insulin w as de tected by radio imm unossay
and mRNA expression of insulin re sistanceGenew as de te rm ined by RT -PCR afte r rats w ere fed e igh tweeks. Results:Compared w ith
the m ode l g roup, m iddle, high dosage ofHPD disco loris can reduce the level of serum insu lin obv iously;low , m iddle, high dosage of
HPD can reduce re sistance gene mRNA expre ssion of adipo se tissue obv iously. Conclusion:Herba Po ten illae D isco lo ris decoc tion can
im prove insu lin resistance of type 2 d iabetes insu lin re sistance ra ts.
Key words:Herba potenillae disco lo ris;2 - diabe tes m e llitu s; Insu lin resistance;Resistance gene;Reve rse - T ranscrip tion
po lyme rase chain reac tion
　　胰岛素抵抗( insulin re sistance, IR)是指在胰岛素作用
的靶器官 、组织或部位对一定量的胰岛素的生物学效应低于
预计的正常水平 , 导致胰岛素介导的葡萄糖代谢等生物学效
应下降的状态。胰岛素典型的效应器官是肝脏 、骨骼肌和脂
肪组织。在早期与中期 ,机体为克服 IR, 往往代偿性分泌过
多的胰岛素 , 引起高胰岛素血症。而胰岛素抵抗是 2 -DM
的显著特征之一 [ 1] 。
抵抗素是 S teppan等在探讨肥胖与胰岛素抵抗之间关系
时发现的由脂肪细胞分泌的蛋白质 ,已成为胰岛素抵抗的中
介环节之一。抵抗素在动物中主要在白色脂肪组织中表达。
中药翻白草是蔷薇科植物翻白草的带根全草 , 味甘 、微
苦。根含黄酮类 , 全草含鞣质 , 已分离得到延胡索酸 、熊果
酸 、槲皮素等 9个单体化合物及 M g、Ca等微量元素 [ 2 - 4] 。民
间应用翻白草泡水治疗 2 -DM , 我们的前期实验证实翻白草
水提液具有降血糖 、降血脂等作用 , 但 HPD对 2 - DM 胰岛
素抵抗的影响尚未见报道。 本试验观察 H PD水提液对 2 -
DM胰岛素抵抗大鼠肾周脂肪组织抵抗素基因 mRNA的表
达 , 探讨 HPD调节胰岛素抵抗的作用及可能的作用机制。
基金项目:黑龙江省教育厅科学技术研究项目(10553110)
材料与方法
1. 材料　W istar大鼠 , 购自长春高等医学实验动物中
心。链尿佐菌素 (STZ)( sigma公司 ), T rizo l ( inv itrogen公
司), Tag酶(华美生物工程公司), 大鼠抵抗素及 β - actin引
物由上海博亚生物技术有限公司合成 ,胰岛素放免分析试剂
盒(中国人民解放军总医院科技开发中心放免研究所 ), Gc
- 400型放免 γ-计数器 , UVPGDS - 8000型凝胶成像分析
系统(美国)。
2. 实验动物　体重 200±20g清洁级W ista r大鼠 80只 ,
适应性喂养两周后 , 随机分为普通饲料组(正常组 10只)和
高脂饲料组(70只)。自由摄食 2月后检测两组大鼠的空腹
血糖与胰岛素( fa sting insu lin, F INS)水平 ,计算胰岛素抵抗
指数( insulin resistant index, IR I)。将判定为 IR的 55只大鼠
参照张芳林的 2 -DM大鼠模型尾静脉一次性注射 STZ注射
液 20m g /kg, 2天后 , 以 11. 1mm ol /L≤空腹血糖 <30mmo l /L
为 2 -DM大鼠模型成功。将造模成功的 40只 2 -DM 胰岛
素抵抗大鼠随机分为 4组:模型对照组(水灌胃)及 HPD高 、
中 、低剂量组(灌胃 12g /kg、6g /kg、 3g /kg), 各模型组继续喂
以高脂饮食 , 自由饮水 , 自然光照 , 饲养温度 18 ～ 20℃, 相对
25 中国优生与遗传杂志 2007年第 15卷第 8期DOI牶牨牥牣牨牫牬牥牬牤j牣cnki牣cjbhh牣牪牥牥牱牣牥牳牣牥牥牪
湿度 50% ～ 60%, 给药 8周后 ,空腹取材后处死。
3. 血糖及胰岛素检测　血糖采用邻甲苯胺法 , 胰岛素
测定采用放射免疫法 。
4. 胰岛素抵抗指数计算　 IR I=FBG ×F INS /22. 5, 以高
脂饲料喂养大鼠 IR I >普通饲料喂养大鼠均数 +1. 96个标
准差 , 判定其为 IR大鼠。
5. 逆转录 -聚合酶链反应(RT -PCR)检测大鼠肾周脂
肪组织抵抗素基因 mRNA的表达　取脂肪组织 100mg, 置于
含液氮研钵中 , 加入 1m lT rizol充分研磨 ,抽提匀浆后移入 1.
5m l Eppendo rf管中 , 冰上静置 5m in。每管加入 0. 2m l氯仿 ,
剧烈震荡 15s,冰上静置 2 ～ 3m in, 12000 r /m in, 4℃离心 5m in,
吸取上层水相 , 置于另一新 EP管中 , 加入 0. 5m l异丙醇 , 轻
摇混匀 , 冰上静置 10m in, 12000r /m in, 4℃离心 5m in。弃上
清 , 每管加入 75%乙醇(DEPC水配制), 4℃ 8000r /m in离心
5m in。弃乙醇 , 超净工作台上室温干燥 10m in, 加入 20μl
DEPC水 , 溶解 RNA。 RNA经琼脂糖凝胶电泳显示 28s、 18s 2
条带。紫外分光光度计检测 RNA样品纯度 , A
260
:A
280
>1. 8,
表明纯度高。 mRNA经逆转录为 cDNA, 并以此为模板进行
PCR扩增。 resistin上游引物为:5′CTGCCACGTACTTAACAG-
GATGAAG3′, 下游引物为:5′TCAGGAACCAACCCGCAGGG-
TACA3′,产物长度 364bp。 β - actin上游引物为:5′CCG-
CATCTTCTTGTGCA3′,下游引物为:5′GGCATGGACTGTGGT-
CA3′,产物长度为 577bp。 cDNA第一链合成按试剂盒说明
操作 , 反应结束后取逆转录产物 20μl, M g2+ 6μl, 10 ×缓冲液
8μl, resistin上下游引物各 1μl, 内参照上下游引物各 1μl,
Tag酶 2. 5u, 无菌水 63. 5μl。离心混匀后 , 按下列条件扩增:
94℃预变性 5 m in, 94℃ 30 s , 57℃ 1m in, 72℃ 1m in, 30个循
环后 72℃ 10m in。 4℃保存 PCR产物。取 PCR产物 5μl, 加
2μl上样缓冲液 , 在 90V电压下于 1. 5%琼脂糖凝胶电泳 , 电
泳缓冲液为 0. 5×TBE。电泳结束后用美国 UVPGDS - 8000
型凝胶成像系统成像并用密度扫描分析 PCR产物带 , 为消
除系统及定量误差 , resistin mRNA表达水平以相对光密度表
达量即 re sistin /β - ac tin比率来计算。
结 果
1. 实验大鼠空腹胰岛素含量(F INS)的变化
与正常对照组比较 , 2 - DM 胰岛素抵抗组 F INS含量明
显升高( P <0. 01), 与模型对照组比较 , HPD高 、中剂量组
F INS含量明显降低(P <0. 01)。
表 1　各组大鼠空腹胰岛素含量的比较
组　别 FINS(m IU /L)
正常对照组 20. 34±14. 48
2 - DM胰岛素抵抗组 40. 19±15. 35*
HPD高剂量组 30. 06±12. 42#
HPD中剂量组 28. 94±10. 62#
HPD低剂量组 38. 35±13. 56
　　与正常对照组比较 , *P <0. 01;与模型对照组比较 , #P <0. 01
2.各组大鼠肾周脂肪组织 re sistin基因 RT -PCR电泳结
果
扩增后得到 β - ac tin 577bp和 resistin364bp两个片段 , β
- actin为内参照 , 与 resistin扩增条件完全一致。 其琼脂糖
凝胶电泳结果如图 1所示。图像分析结果显示:与正常对照
组相比 , 2 -DM 胰岛素抵抗各组大鼠 resistin基因 mRNA表
达增加 (P <0. 01), HPD各组与模型组比较 , resistin基因
mRNA表达减少(P <0. 01),结果见表 2、图 1。
图 1　大鼠肾周脂肪组织 resistin基因
mRNA表达产物电泳结果
表 2　各组大鼠肾周脂肪组织 resistin
基因 mRNA表达(n=10)
组　别 resistin /β - actin
正常对照组 0. 39±0. 04
2 - DM胰岛素抵抗组 0. 83±0. 06*
HPD高剂量组 0. 56±0. 05#
HPD中剂量组 0. 59±0. 02#
HPD低剂量组 0. 60±0. 03#
　　与正常对照组比较 , *P <0. 01;与 2 -DM胰岛素抵抗组比较 ,
#P <0. 01
讨 论
胰岛素抵抗和胰岛素分泌缺陷是 2 -DM 发病机制的两
个基本环节和特征 , 以胰岛素抵抗为特征的 2 - DM 已成为
全球关注的健康问题。胰岛素抵抗是 2 -DM 临床过程中的
早期缺陷 , 此期患者的血清胰岛素水平可正常或高于正常 ,
但它与胰岛素受体的结合能力以及受体后的效应均减弱。
高脂饲料可诱导产生 IR,无论动物或人类短期或长期进食高
脂饮食均可致 IR[ 6] 。
本实验应用高脂饲料喂养W istar大鼠 , 并用小剂量 STZ
建立了 2 - DM 胰岛素抵抗模型 。通过检测大鼠空腹血清
F INS水平及抵抗素指数( IR I)来评价 IR的产生情况 ,喂养高
脂饲料的W istar大鼠两个月后大部分产生 IR, IR大鼠尾静
脉一次性小剂量注射 STZ后 , 产生 2 -DM 胰岛素抵抗大鼠
模型符合要求。
用翻白草水提液给 2 - DM 胰岛素抵抗大鼠灌胃 8周
后 , 各组大鼠的 IR均有改善 , 其中以高 、中剂量组显著 , 表明
其具有较好的改善胰岛素抵抗的作用。各组大鼠肾周脂肪
组织 resistin基因 mRNA表达产物电泳结果显示 , HPD水提
液高 、中 、低剂量组具有较好的降低 resistin基因 mRNA表达
的作用 , 这可能是 HPD水提液改善 2 -DM胰岛素抵抗大鼠
IR, 同时提高胰岛素敏感性的机理之一。
参 考 文 献
[ 1]邓尚平.临床糖尿病学 [M ] .四川科学技术出版社 , 2000. 31.
(下转第 31页)
26 中国优生与遗传杂志 2007年第 15卷第 8期
PreS1与 HBV血清学标志物的关系
高清萍 , 卢亚祖 , 李　军 , 陈　芳 , 张国良　 (湖北省荆州市中心医院检验医学部 , 434020)
摘　要:目的　探讨乙肝患者血清学标志物和 P reS1之间的相关性。方法　采用全自动酶免疫分析系统检测乙肝血清
学标志物和 P reS1, 并进行比较分析。结果　HBeAg阳性患者比 HBeAg阴性患者 P reS1阳性率极显著增高 (P <0. 001, χ2
=121.118);HBeAg阳性的两组患者间 P reS1阳性率无统计学差异 ( P =0.118, χ2 =2. 438);HBeAg阴性的两组患者间
P reS1阳性率无统计学差异 (P =0. 725, χ2 =0. 124)。结论　乙肝患者 P reS1表达与 HBeAg表达有很好的相关性 , 因
P reS1操作简易 , 适合在基层医院开展。
关键词:HBV血清学标志物;P reS1
中图分类号:R373. 21　　　文献标识码:A　　　文章编号:1006 - 9534 (2007) 08 -0031 - 01
　　乙肝目前仍是危害人类的主要病因之一 , 我国乙肝感染
率也是比较高的。 临床上常采用检测乙肝血清学标志物进
行乙肝的大批量筛查 , 但对于变异株的检测存在一些问
题 [ 1] 。为了进一步探讨乙肝血清学标志物与 P reS1的相关
性 , 我们对 378例血清同时进行了乙肝血清学标志物和
P reS1的检测 , 并对结果进行了比较和分析。现报道如下。
资料与方法
1. 标本来源　本院 2005年 10月开始随机连续统计了
门诊和住院的乙肝待检血清 378例 , 其中男性 282例 , 女性
96例 , 平均年龄为 26. 46±+9. 82岁。抽取患者空腹静脉血
3m l, 4小时内分离血清 , 对同一份血清样本同时进行乙肝血
清学标志物和 P reS1的检测。
2, 仪器和方法　乙肝血清学标志物和 P reS1采用美国
德灵第三代全自动酶标分析系统检测;乙肝血清学标志物试
剂为深圳华康生物医学工程有限公司生产 , P reS1试剂由上
海阿尔法生物技术有限公司生产 ,严格按说明书操作。
结 果
378例乙肝血清学标志物及 P reS1结果见下表。
表 1　378例乙肝血清学标志物及 P reS1结果
血清学标志物 总例数(例)
P reS 1阳性
例数(例) 检出率(%)
HB sAg+HB eAg+ 44 36 81. 8
HB sAg+HBeAg+HBcAb+ 146 132 90. 41
HB sAg+HBeAb+HB cAb+ 92 36 39. 13
HB sAg+HBcAb+ 28 12 42. 86
HB sAb+HB cAb+ 38 1 2. 63
全阴性 30 0 0
合计 378 217 57. 41
讨 论
表 1显示 HBeAg阳性患者(36+132 /44+146)(88. 42%)
比 HBeAg阴性患者(36+12+1 /92+28+38)(31. 01%)P reS1
阳性率极显著增高(P <0. 001, χ2 =121. 118);HBeAg阳性的
两组患者(36 /44 =81. 8%, 132 /146=90. 41%)间 P reS1阳性
率无统计学差异(P =0. 118, χ2 =2. 438);HBeAg阴性的两组
患者(36 /92=39. 13 %, 12 /28=42. 86%)间 P reS1阳性率无统
计学差异(P =0. 725, χ2 =0. 124)。因此认为 P reS1与 HBeAg
表达有较好的相关性 ,与文献 [ 2]报道相符。
HBV基因编码的病毒外壳蛋白 S区分为前 - S1(P reS1)、
前 -S2(P reS2)及 S区, 分别编码相应的蛋白 ,前 S1区位于病
毒颗粒表面, 是病毒外膜蛋白重要组成部分, 具有高度免疫原
性 ,介导宿主的免疫应答。HBV可能以 S1区的氨基酸 21 -47
片段作为结合部位结合肝细胞 , 该片段相当保守, 变异的病毒
只要这一段完好就有传染性 [ 3 , 4] 。文献报道 [ 5] HBVDNA检测
是直接反应病毒复制的可靠方法 ,而 P reS1与 HBVDNA符合
率高。但 HBVDNA检测价格较贵 , 操作复杂, 对实验室要求
高 ,限制了它在临床上的应用范围 , PreS1因其检测费用低 ,操
作简易 ,从而适合在基层医院开展。
参 考 文 献
[ 1]徐蓓 ,姚克弼.血清乙肝前 S1检测及其与病毒复制关系 [ J] .中
华实验与临床病毒学 , 1997, 2:17.
[ 2]袁青,徐瑞龙. HB sAg、血清中 S1抗原与 HBVM和 DNA相关性探
讨 [ J] .江西医学检验 , 2006, 24(4):361.
[ 3]何华 ,张大志.乙型肝炎 S1研究进展 [ J] .中华肝脏病杂志 , 2004,
12:765 -766.
[ 4]黄学忠 ,吴祥 ,黄秀琴. 乙型肝炎基因组 S1区编码产物的检测及
临床意义[ J] .临床肝胆病杂志 , 2002, 18:33 - 34.
[ 5]陶树高 ,秦诚 ,马静. 乙型肝炎前 S1与 HBVDNA及 HBVM关系
研究 [ J] .应用预防医学 , 2006, 12(3):171 - 172.
收稿日期:2006 - 12 - 28　收稿日期:2007 - 01 - 15
　　(上接第 26页)
[ 2]陈芳群.委陵菜化学成分的研究 [ J] .华西药学杂志 , 1989, 4(1):
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[ 3] 冯卫生.翻白草根中可水解丹宁的研究 [ J] . 天然产物研究与开
发 , 1996, 8(3):26 -30.
[ 4] 刘艳南 ,等.翻白草化学成分的研究 [ J] . 中草药 , 1984, 15(7):
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[ 5] 张芳林 ,等. 2型糖尿病大鼠模型的建立及其糖代谢特征分析
[ J] .中国实验动物学报 , 2002, 10(1):16 - 20.
[ 6] 李秀均 ,主编.胰岛素抵抗综合征 [M ] .北京:人民卫生出版社 ,
2001. 7 -20.
收稿日期:2007 - 04 - 26
31 中国优生与遗传杂志 2007年第 15卷第 8期