全 文 ：牡丹江医学院学报　　 2007年　　第 28卷　　第 5期
翻白草对 2型糖尿病大鼠脂联素基因表达的影响
郭新民　王桂云　董　琦
(牡丹江医学院　黑龙江　牡丹江　　157011)
【摘　要】　目的:观察翻白草水提液(HPD)对高脂膳食加小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导的 2型糖尿病(2 - DM)大鼠胰岛素
抵抗指数及肾周脂肪组织脂联素基因 mRNA表达的影响。方法:选用高脂饲料加小剂量 STZ建立 2 -DM 大鼠模型 , 将 2 -
DM大鼠随机分为模型对照组(水)和三个 H PD组(3g /kg、6g /kg、12g /kg), 每组各 10只 ,另选 10只大鼠为正常对照组 ,各组灌
胃 8周后 , 空腹取材 , RT— PCR法检测肾周白色脂肪组织脂联素(adiponection)基因 mRNA水平 , 放免法测定空腹胰岛素并计
算胰岛素抵抗指数( insulin resistant index, IR I)。结果:与 2 -DM模型组比较 , H PD高 、中剂量组能显著升高 2 - DM 大鼠肾周
脂肪组织脂联素基因 mRNA表达 ,降低 IR I。结论:翻白草水提液可增加 2 -DM大鼠脂联素基因 mRNA表达。
【关键词】　翻白草;2型糖尿病;逆转录聚合酶链反应;脂联素基因
【中图分类号】　R　34　　　【文献标识码】　A
EFFECT OF HERBA POTEN ILLAE DISCOLORISON GENE
ESPRESSION OF AD IPONECTION IN TYPE 2 DIABET ICMELL ITUSRATS
Guo X inm in e tal
(Mudanjiang medical co llege　He ilong jiang　Mudanjiang　　157011)
[ Abstrac t] 　Objective:To exp lo re the Effect ofHerba Poten illae Discolo ris decotion on adiponec tion genemRNA
expre ssion in w hite ad ipose tissue and insu lin re sistant index o f 2 -DM induced by high t— fat diat and strep tozo to-
cin (STZ), M ethods:To build mode l o f type 2 -DM rats induced by h ight— fat d iet and STZ。The 2 -DM mode l
ra ts we re div ided in to four groups at random :model g roups and low、m idd le、hight do ses ofHPD groupsw ith 10 in
each g roup, ano ther 10 ra ts we re se lec ted as normo l group, A fter 8 w eeks, FINS w ere detected by rad io immunoas-
say and w as ca lcula ted insulin resistan t index (IRI), mRNA exp ression of adiponection gene w as de term inded by
RT— PCR . Results:Compa red w ith the 2 -DM model g roup, themRNA exp ression o f ad iponection gene w as high-
er in the m iddle and h igh doses ofHPD , IRIw as low er. Conclusion:HPD can increase mRNA expression o f adi-
ponec tion gene in 2 -DM rats.
[ Key words] 　Herba Po tenillae D isco lo ris;2 diabetic me llitus;Reverse— T ranscrip tion po lym erase cha in reac-
tion;adiponection gene
　　脂联素(adiponec tion)是近年发现的由脂肪细胞分泌的
因子。人类脂联素是由 244个氨基酸组成的多肽 [ 1] 。研究
发现脂联素能明显提高肝脏 、肌肉对胰岛素的敏感性促进糖
和脂肪的代谢。脂联素还能抑制炎症反应 , 降低动脉硬化的
危险性 [ 2] 。 A rita等的研究发现 , 脂联素的表达下降与肥胖
及糖尿病的发生有密切关系。在一项对日本人的前瞻性研
究发现 , 脂联素是 2型糖尿病的独立危险因素。目前 , 脂联
素与 2型糖尿病的发生及与胰岛素抵抗的关系成为生物医
学研究的热点之一。
翻白草是蔷薇科植物翻白草的带根全草 , 味甘 、微苦。
根含黄酮类 , 全草含鞣质 , 已分离得到延胡索酸 、苹果酸 、等
9个单体化合物及 Mg、 Ca等微量元素。民间应用翻白草泡
水治疗 2 -DM ,我们的前期实验证实翻白草水提液具有降血
糖 、降血脂等作用。但翻白草水提液对 2 - DM脂联素基因
表达的影响尚未见报道。本实验观察 HPD对 2 -DM大鼠肾
周脂肪组织脂联素基因 mRNA表达的影响 , 以探讨 HPD降
血糖 , 改善胰岛素抵抗的机制。
1　材料与方法
1. 1　试剂与仪器 　T rizo l( Invitrogen), STZ(S igm a), RNA
PCR K it(AMV)Ver2. 1\DNA M arke rDL 2. 000(宝生物工程大
连有限公司 ), PCR引物 (上海博亚生物技术有限公司合
成),胰岛素试剂盒(中国人民解放军总医院科技开发中心放
　　[基金项目 ]黑龙江省教育厅科学技术研究项目 (10553110)。
[作者简介 ]郭新民 , (1946 - ),女 , 教授 ,硕士生导师 , 研究方向:2 -DM的生化与分生机制。
3 JOURNAL　OF　MUDANJIANG　M EDICAL　COLLEGE　Vo.l 28　NO. 5　 2007
DOI牶牨牥牣牨牫牱牴牴牤j牣cnki牣mdjyxyxb牣牪牥牥牱牣牥牭牣牥牥牰
牡丹江医学院学报　　 2007年　　第 28卷　　第 5期
免研究所)2400型 PCR扩增仪(GeneAmp PCR System 2400)
BIO— BEST凝胶成像分析系统 , 756型分光光度计 , GC - 400
型放免 r -计数器。 B IO - BEST凝胶成像分析系统。 HPD
由牡丹江益寿堂药店提供 ,黑龙江普通高校医学与药物开发
重点实验室鉴定 , 符合药典规定标准。
1. 2　实验动物　200±20g清洁级W ista r大鼠 80只 , 适应性
喂养 1周后 , 随机分为普通饲料组(正常组 10只)和高脂饲
料组(70只)。自由饮水和摄食 2月后检测两组大鼠的空腹
血糖与胰岛素( fa sting insulins, F INS)水平 ,计算胰岛素抵抗
指数( insu lin resistant index, IR I)。将判定为 IR的 55只大鼠
参照张芳林的 2 -DM 大鼠模型尾静脉注射 STZ20mg /kg, 两
天后 , 以 11. 1mmo l /L≤空腹血糖 <30 mmo l /L为 2 - DM 大
鼠模型成功。将造模成功的 40只 2 -DM 大鼠随机分为 4
组:模型对照组(水灌胃)及 HPD高 、中 、低剂量组(灌胃 12g /
kg、6g /kg、3g /kg),各模型组继续喂以高脂饮食 , 自由饮水 ,自
然光照 , 饲养温度 18 ～ 20℃, 相对湿度 50% ～ 60%, 给药 8周
后 , 空腹取材后处死。
1. 3　血糖及胰岛素检测　血糖采用邻甲苯胺法 , 胰岛素测
定采用放射免疫法。
1. 4　胰岛素抵抗指数计算　 IR I=FBG×F INS /22. 5
1. 5　脂联素 mRNA水平检测　采用半定量 RT— PCR法。
取大鼠肾周白色脂肪组织 100m g加入 1mLTrizo l按组织 总
RNA提取方法提取总 RNA。根据 260nm与 280nm的 OD比
值及琼脂糖凝胶电泳检测总 RNA的纯度。 A260:A280≥1.
8, 表明 RNA 的纯度高。 取大鼠肾周白色脂肪组织总
RNA1μL, 以 O ligo dT— Adap to r prime为引物 , 按照 RT— PCR
试剂盒操作说明在 PCR仪上进行逆转录 , 合成第一条 cDNA
链 , 总反应体积为 20μL,以 20μL逆转录反应产物为模板 ,以
脂联素特异性引物序列为引物 , 按 RT— PCR试剂盒程序合
成并扩增脂联素的 cDNA。脂联素上游引物的序列:5 / - -
ATC TGA TTA CAC CAA AAG T - -3 /, 下游引物的序列:5 /
- - TCA GTT GGT ATC ATG GTA G - - - 3 /, 产物长度
767bp, β— actin上游引物的序列:5 / - - TCT ACA ATG AGC
TGC GTG TG - - - 3 /, 下游引物的序列:5 / - -GGT CAG
GAT CTT CAT GAG GT - - 3 /, 产物长度 314bp。取逆转录
产物 20μl,M g2+6μl, 10×RNA PCR缓冲液 8μL, 脂联素上 、
下游引物各 1μL, 内参照上下游引物各 1μL, Taq酶 0. 5μL,
无菌蒸馏水 61. 5μL,总反应体积 80μL, 离心混匀后 , 按下列
条件扩增:94℃变性 30S, 58℃退火 30S, 72℃延伸 1m in, 35个
循环 , 循环后 72℃10m in。 4℃保存 PCR产物 , 取 5μLPCR扩
增产物 , 加 1μL上样缓冲液混匀 ,在 1%琼脂糖凝胶电泳 (电
压 70V、时间 2h)。以 DNA M arker 2. 000为 M arke r, 结果用
BIO— BEST凝胶成像系统成像并用密度扫描仪分析 PCR产
物带 , 为消除系统及定量误差 , 脂联素 mRNA表达水平以相
对 OD表达量即 adiponec tion /β - action比率计算。
2　结　果
2. 1　HPD对 2 -DM 大鼠胰岛素抵抗指数( IR I)的影响　与
正常对照组比较 , 2 -DM模型组 IR I显著升高(P<0. 01);与
2 -DM模型组比较 , HPD高 、中剂量组 IR I显著降低(P<0.
01);HPD低剂量组无统计学意义。结果见表 1。
表 1 HPD对 2 -DM大鼠 IR I的影响(n=10)
Group IR I
No rm al 1. 12±3. 80
2 -DM　M od-
el
2. 56±6. 72*
HPD　Low 2. 38±6. 45*
HPD　M idd le 1. 64±5. 69#
HPD　H igh 1. 48±5. 13#
　　No te:Compared w ith norm a l g roup, *m eans(P<0. 01)
Com pa red w ith 2 -DM m ode l, #m eans(P<0. 01)
2. 2　HPD对 2 -DM大鼠脂联素基因 mRNA表达的影响　
各组大鼠肾周脂肪组织脂联素基因 mRNA经 RT - PCR扩增
得到 ad iponec tion 767 bp和 β - ac tion 314 bp两个片段 。 β -
action为内参照与 adiponec tion扩增条件完全一致。其琼脂
糖凝胶电泳结果如图 1所示。图像分析结果显示:与正常对
照组相比 , 2 - DM 组大鼠 ad iponection基因 mRNA表达减少
(P<0. 01);HPD高 、中剂量组与 2 - DM 模型组比较 adi-
ponec tion基因 mRNA表达增加(P<0. 01),低剂量组无统计
学意义。结果见表 2、图 1。
HPD对 2 -DM大鼠脂联素基因 mRNA表达的影响
图 1　大鼠肾周脂肪组织 ad iponection基因 mRNA表达产物电泳结果
表 2　各组大鼠肾周脂肪组织 adiponec tion
基因 mRNA表达(n=10)
G roup n adiponec tion /β— ac tin
No rm al 10 0. 79±0. 05
2 -DM　M ode l 10 0. 47±0. 06*
HPD　H igh 10 0. 74±0. 03#
HPD　M idd le 10 0. 69±0. 04#
HPD　Low 10 0. 49±0. 05
　　Com pared w ith norm a l group, *means(P<0. 01)Com pa red
w ith 2 -DM m ode l, #m eans(P<0. 01)
3　讨　论
自 1994年以来 , 人们陆续发现脂肪细胞分泌的多种活
性因子参与了神经内分泌—免疫网络的调节 ,脂肪组织有可
能成为机体最大的内分泌器官 ,脂肪细胞内分泌功能失调在
IR相关疾病的发病中起重要作用 [ 3] 。脂联素是脂肪细胞分
4 JOURNAL　OF　MUDANJIANG　M EDICAL　COLLEGE　Vo.l 28　NO. 5　 2007
牡丹江医学院学报　　 2007年　　第 28卷　　第 5期
泌的重要活性因子 , Kissebah[ 4]等在对糖尿病易感基因的扫
描中发现 , 胰岛素抵抗易感基因位于 3q27, 也就是脂联素基
因编码处 , 进一步证明了脂联素与胰岛素抵抗及 2 - DM的
发生关系。本实验结果显示:2 -DM 大鼠脂联素基因 mRNA
表达明显下降 , IR上升 , 与文献报道一致。 HPD大 、中剂量
组可显著增强脂联素基因 mRNA表达 ,并减轻 IR,这可能是
HPD降低 2 - DM 大鼠血糖机理之一。
参考文献
1　王胜芳 ,韩佩珍.小鼠脂肪组织脂联素基因编码区的克隆及序列
分析 [ J] .天津医药 , 2006, 34(4):253 -255.
2　李晓南 ,陈荣华.人类皮下和网膜脂肪组织脂联素基因表达和调
控研究 [ J] .南京医科大学学报(自然科学板), 2006, 26(1):6 -
9.
3　张芳林. 2型糖尿病大鼠模型的建立及其糖代谢分析 [ J] .中国实
验动物学报 , 2002, 10(1):16 - 20.
4　E len a Z, V in cenzo DF, G loriaM , eta.l A dipocytok ines, fat distribu-
tion, and in su lin resistance in elderly m en ad women [ J] Geron tol,
2004, 59:935 - 939.
收稿日期:2007 -05 -18
CD40配体对套细胞淋巴瘤细胞系增殖的影响
金在顺 1　金秀东 1　寺本典弘 2　李志强 1　安锦丹 1　曹　永 1　吉野正 2
(1.牡丹江医学院病理教研室　黑龙江　牡丹江　　157011;
2.冈山大学医学部病理学教研室　日本　冈山 )
【摘　要】　套细胞淋巴瘤(MCL)是一种表达 CD5的非霍奇金 B细胞淋巴瘤 , 以中等大小 B细胞侵入外套层为特征。 CD40L
与 CD40间的相互作用对 B细胞的增殖与分化有重要意义。对于不同阶段的 B细胞 , CD40L的刺激可产生抑制或诱导分化的
作用。在本次研究中 , 利用 SP49和 SP53这两个套细胞淋巴瘤细胞系对 CD40L反应作了研究。与表达 CD40L的鼠淋巴细胞
混合培养后 , B rdU结合的 SP49及 SP53细胞减少了 1 /2 ～ 1 /3,而 B rdU结合的对照细胞系 (包括 Ram os, BJAB and BALL - 1)
无反应或增加。抗 CD40L抗体在 0 ～ 20 ng /m l时能封闭 CD40L对 SP49细胞增殖的抑制作用。 这些结果提示 CD40L在活体
内可能对 MCL增殖有抑制作用。
【关键词】　套细胞淋巴瘤;CD40;CD40配体
【中图分类号】　R　R733. 4 　　　【文献标识码】　A
THE PROL IFERATION EFFECTOF CD40 L IGAND
ONMANTLE CELL LYMPHOMA LINES
Jin Za ishun　et a l
(Deparmen t o f Pa thology, Mudan jiangM edicalco llege　He ilong jiang　Mudan jiang　　157011)
[ Abstract] 　Man tle ce ll lymphoma (MCL) is a CD5+non -Hodgk in’ s B - ce ll lymphoma characterized by the
in filtration of intermediate sized B - ce lls in to the mantle zones. Inte raction be tw een CD40L and CD40 is impo rtan t
for B ce ll proliferation and diffe rentiation. CD40L stimu lation can induce to their differentiation sta te. Prev ious re-
ports exam ining the effect of stimu lation v ia the CD40 cascade on ex vivoMCL ce lls have p rov ided conflicting re-
su lts. In this study, tw o MCL lines, SP49 and sp53 , were exam ined fo r response to CD40L. Co - cultivation
w ith CD40L - expre ssing mouse L cells reduced the B rdU incorpo ration of SP49 and SP53ce lls by ha lf to one -
th ird, while B rdU inco rpora tion of contro l ce ll lines, including Ramos, BJAB and BALL - 1 , w as not affected o r
increased. An ti -CD40L antibody b locked the CD40L inh ib ition o f SP49 cell pro liferation in dose - dependent
　　[基金项目 ]教育部留学回国人员科研启动基金 (No. 2007 - 1108);黑龙江省科技厅留学归国人员攻关计划项目(No. LC 06C25);黑
龙江省教育厅海外学人重点科研资助项目(No. 1152hz36)。
[作者简介 ]金在顺 , (1962 -),女 , 教授 ,研究生导师 ,从事病理学教学与科研工作。
5 JOURNAL　OF　MUDANJIANG　M EDICAL　COLLEGE　Vo.l 28　NO. 5　 2007