全 文 ：北方园艺 2010(8):147 ～ 148 ·生物技术 ·
　　
第一作者简介:薄涛(1983-),男 ,在读硕士, 现主要从事遗传学研
究工作。 E-mail:botao233@163.com。
通讯作者:王子成(1974-),男 ,博士 ,副教授,现主要从事表观遗传
学研究工作。 E-mail:wzc@henu.edu.cn。
基金项目:河南省科技发展技术研究资助项目(092102110160)。
收稿日期:2009-12-10
蛇莓的组织培养与快速繁殖
薄 　涛 , 王 子成
(河南大学生命科学学院,河南 开封 475001)
　　摘　要:以蛇莓茎尖为外植体 ,研究不同激素浓度
和组合对蛇莓组织培养的影响。结果表明:诱导培养基
为MS+6-BA 2.0 mg/ L时达到最佳效果;最佳增殖培
养基为 MS+6-BA 2.0 mg/L+IBA 0.01 mg/L;生根培
养基使用 MS时效果比较理想。
关键词:蛇莓;茎尖;组织培养
中图分类号:S 567.23+9　文献标识码:A
文章编号:1001-0009(2010)08-0147-02
　　蛇莓为蔷薇科蔷薇亚科蛇莓属多年生草本植物 ,全
株有柔毛。花期4月 、果期5月。蛇莓全草可入药 ,有一
定的药用价值 ,有清热 、凉血 、消肿 、解毒功效。对热病 、
惊痫 、咳嗽 、吐血 、咽喉肿痛 、痢疾 、痈肿、疔疮 、蛇虫咬伤 、
火伤均有一定疗效。近年发现该植物中含有酚酸和三
萜类等成分 ,具有显著的抗氧化和抗肿瘤等药理活性。
目前蛇莓的研究主要集中在药理药性 、药用价值 、毒理
毒性 、化学成分研究 ,园林应用及其组织快繁研究极少。
而各种研究均需大量供试材料 ,仅靠野生蛇莓不能满足
需求 ,并受到时间和地域等限制。现以蛇莓茎尖作为研
究对象 ,建立适当的组培体系 ,使其能在短期内获得大
量蛇莓幼苗 ,而解决野生蛇莓试验材料不足和受时间地
域限制的问题。
1　材料与方法
1.1　供试材料
取自河南宝天曼国家自然保护区野生蛇莓。
1.2　试验方法
1.2.1　外植体的处理与消毒　采集健壮匍匐茎 ,用洗洁
精清洗干净 ,流水下冲洗 1 h ,在超净台上 ,用 75%酒精
消毒 30 s ,再用升汞溶液消毒 7 min ,无菌水冲洗 5 ～ 6
次。用无菌滤纸吸干茎段表面的水分 ,选取含有茎尖部
分 ,并只留1个茎尖 ,接种到芽诱导培养基。
1.2.2　诱导培养　将灭菌成功的外植体分为7组 ,分别
接入加有 0.5 ～ 5.0 mg/L 6-BA的 7种 MS诱导培养基
中。每组3瓶 ,每瓶接入 5棵 ,每瓶为1次重复。30 d后
观察诱导出的不定芽总数及其生长情况 ,筛选合适的诱
导培养基 ,并在后续的培养中加以应用。
1.2.3　增殖培养　以 MS 为基本培养基。在基本培养
基中附加 2.0 mg/ L 6-BA和 0.01 ～ 0.5 mg/ L IBA或
NAA。将诱导出的丛生芽在超净工作台上切分为只带
有 1个茎尖的试管苗 ,接入增殖培养基。每组 3 瓶 ,每
瓶接入 5棵 ,每瓶为 1次重复。30 d后观察增殖培养后
产生不定芽的总数 ,计算繁殖系数 ,筛选最佳的增殖培
养基。
1.2.4　生根培养　选取生长健壮且长势一致的试管苗
进行生根处理。要求苗高 2 ～ 3 cm ,每株带有 2 ～ 3 片
叶。生根培养基为 MS 、1/2MS和 1/4MS ,共3 种 ,并附
加 0.00～ 0.2 mg/L IBA。每组 3瓶 ,每瓶接入 5棵 ,每
瓶为 1次重复。30 d后观察生根培养效果 ,统计生根
率 、平均根长、平均根数和始生根天数(根长约为 1 ～
2 mm时录入),筛选最佳的生根培养基。
1.3　培养条件
所有培养基均加3%蔗糖和 7.0 g/ L琼脂 ,pH 5.8。
室内培养温度为(24±1)℃,光照时间为12 h/d ,光照强度
为 30μmol·m-2 ·s-1 。
2　结果与分析
2.1　不同 6-BA浓度对外植体诱导的影响
从表 1看出 ,用 MS+2.0 mg/L 6-BA 培养基对蛇
莓外植体进行诱导培养 ,诱导的不定芽数明显优于其它
培养基。当显著性水平为0.05时 ,存在统计学意义。试
验中观察发现 ,在植株基部有愈伤组织存在 ,从其基部
发出新的幼苗。但随 6-BA浓度的升高愈伤组织逐渐增
大 ,而不定芽数呈现先增加后减小的趋势。上述 7种培
养基 ,在培养过程中均无玻璃化现象出现 ,且生长势良
好 ,均可用于下步试验。
　　表 1　　不同 6-BA浓度对外植体诱导的影响
6-BA/ mg·L-1 平均不定芽数/个
0.5
1.0
1.5
2.0
3.0
4.0
5.0
11.33±1.54b
13.47±2.83b
17.07±2.60c
19.87±1.51d
12.60±3.02b
10.33±3.99 ab
8.53±2.36a
2.2　不同激素浓度及组合对外植体增殖的影响
在不考虑所用激素 IBA或 NAA浓度时 , IBA对外
植体的增殖效果要明显好于NAA。从增殖能力看 , IBA
和 NAA都随浓度的增加而减小。虽然在使用 0.10与
0.50 mg/ L IBA的增殖数值上存在差异 ,但统计后发现
不具有统计学意义 ,二者不存在显著差异。另外 ,实验
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·生物技术· 北方园艺 2010(8):147～ 148
过程中发现 ,在使用 IBA时能明显的诱导出大量匍匐
茎 ,而 NAA 较少。使用 MS +6-BA 2.0 mg/ L +IBA
0.01 mg/L进行培养时 ,增殖系数能达到 9.47。在显著
水平为 0.05时 ,和其它培养基相比存在显著性差异 ,所
以认为使用 MS+6-BA 2.0 mg/ L+IBA 0.01 mg/ L进
行培养能达到明显的增殖效果。
　　表 2　6-BA浓度 2.0 mg/L 条件下不同 IBA 、
NAA浓度对外植体增殖的影响
处理/ mg·L-1 接种数/个 不定芽数/个 增殖系数
IBA 0.01
IBA 0.05
IBA 0.10
IBA 0.50
NAA 0.01
NAA 0.05
NAA 0.10
NAA 0.50
15
15
15
15
15
15
15
15
142
94
81
85
96
81
58
33
9.47e
6.27 cd
5.40c
5.67 cd
6.40d
5.40 bc
3.87b
2.20a
2.3　不同生根培养基对外植体生根的影响
从表 3看出 ,相对其它植物而言蛇莓生根较为容
易 ,所使用的生根培养基均能使蛇莓生根 ,且生根率均
可到达 100%。从根长来看 ,MS+IBA 0.10 mg/ L生根
培养基与 1/2MS+IBA 0.10 mg/ L、1/2MS+IBA 0.20
mg/ L在显著性水平为 0.05时存在显著性差异 ,与其它
生根培养基无显著性差异。从根数来看 ,MS+IBA 0.10
mg/ L和 MS+IBA 0.20 mg/ L生根培养基与其它生根
培养基在显著性水平为0.05时都存在显著性差 ,而其二
者之间不存在显著性差异。从生根天数来看 ,MS+IBA
0.20 mg/L 生根培养基与 MS 、MS+IBA 0.05 mg/L 、
MS+IBA 0.10 mg/L 、1/2MS 、1/2MS+IBA 0.05 mg/L 、
1/4MS在显著性水平为0.05时存在显著性差异外 ,与其
它生根培养基无显著性差异。综合根长 、根数 、生根天
数及成本 4个因素考虑 ,认为使用 MS培养基就能够达
到较为理想的生根效果。另试验观察发现 ,所有生根培
养基根系诱导出的根系呈放射状 ,而且根密色白。
　　表 3　　不同生根培养基对外植体生根的影响
处理/ mg·L-1 生根率/ %
平均根长
/cm
平均根数
/条
生根天数
/d
MS
MS+0.05 IBA
MS+0.10 IBA
MS+0.20 IBA
1/ 2MS
1/ 2MS+0.05 IBA
1/ 2MS+0.10 IBA
1/ 2MS+0.20 IBA
1/ 4MS
1/ 4MS+0.05 IBA
1/ 4MS+0.10 IBA
1/ 4MS+0.20 IBA
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
4.15±0.92 ab
3.84±0.71 ab
4.23±0.82b
3.76±1.18 ab
3.40±0.99 ab
3.48±1.30 ab
3.09±0.72a
3.09±0.65a
3.58±0.83 ab
3.67±0.81 ab
3.86±0.92 ab
3.82±0.59 ab
6.73±1.58b
6.87±1.85b
4.20±1.57a
4.00±1.20a
6.13±1.68b
5.93±2.05b
5.60±1.55b
6.00±1.73b
6.53±1.55b
6.13±1.60b
6.47±2.20b
5.80±1.42b
6.53±2.72a
7.60±2.20a
7.67±2.13a
12.07±5.91b
8.07±3.35a
7.87±1.88a
10.27±3.84 ab
10.13±3.27 ab
7.27±1.83a
9.00±2.62 ab
9.80±3.00 ab
9.27±3.35 ab
2.4　移栽
将已生根的试管苗连瓶置于室温练苗 ,3 d后打开
瓶盖 ,暴露于空气中 ,3 d后取出试管苗 ,小心洗净根上
附着的培养基 ,移栽至装有蛭石∶东北营养土=1∶1的
营养钵中 ,温度 20～ 24℃,空气相对湿度 50%～ 60%,每
天上午 7:00 ,下午 18:00对叶片喷水 ,保持叶片湿度。
在生长 7 d后开始有新根新叶出现 ,移栽至大田。移栽
初始适当遮荫 、喷水 ,避免温度过高叶片灼伤 ,造成移栽
植株死亡。一般情况 ,移栽成活率可达 80%以上。
3　结论
细胞分裂素6-BA对形成愈伤组织和促进芽分化有
较强作用 ,而在生根时有无激素对其影响不是十分显
著。该试验中较为适合的芽诱导培养基为 MS+6-BA
2.0 mg/L;增殖培养基为 MS+6-BA 2.0 mg/L +IBA
0.01 mg/ L;生根培养基为 MS。其它激素及组合对蛇莓
组培的影响还有待进一步深入研究。
参考文献
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影响[ J] .苏州大学学报(自然科学版),2007, 23(3):75-79.
Tissue Culture and Rapid Propagation of Duchesneae indicae
BO Tao ,WANG Zi-cheng
(Institute of Agricultural Bio technology ,Henan University , Kaifeng ,Henan 475001)
Abstract:The shoot tips of Duchesneae indicae as explants were used.Effect on tissue culture of MS containing different
content 6-BA , NAA and IBA were studied.The results indicated that the medium MS+6-BA 2.0 mg/L w as suitable for
int roduction of callus or adventitious buds.The medium MS+6-BA 2.0 mg/ L+IBA 0.01 mg/ L w as the best for multi-
plication.The optimum rooting medium was MS.
Keywords:Duchesneae indicae;shoot tips;tissue culture
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