全 文 ：·40· Chinese Journal of Information on TCM Feb.2005 Vol.12 No.2

翻白草对2型糖尿病大鼠胰岛素降解酶
基因表达的影响
郭新民,崔荣军,董 琦
(牡丹江医学院,黑龙江 牡丹江 157011)
摘要：目的 研究翻白草水煎剂对2型糖尿病大鼠胰岛素降解酶基因mRNA表达的影响。方法 随机选取以不
同剂量的翻白草水煎剂灌胃的2型糖尿病大鼠、以安慰剂灌胃的2型糖尿病大鼠以及正常对照各10只,用RT-PCR
法测定肝细胞胰岛素降解酶基因mRNA的表达。结果 服用翻白草后,2型糖尿病大鼠的胰岛素降解酶基因 mRNA的
表达下降,而服用安慰剂的糖尿病大鼠上述指标无显著变化。结论 翻白草能降低2型糖尿病大鼠胰岛素降解酶基
因的表达。
关键词：翻白草；2型糖尿病；胰岛素降解酶；基因表达
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2005)02-0040-03
Effect of Herba Potenillae Discoloris on mRNA Expression of Insulin-degrading Enzyme in Rat
Model of Type 2 Diabetes Mellitus GUO Xin-min, CUI Rong-jun, DONG Qi (Mudanjiang Medical College,
Mudanjiang 157011,China)
Abstract：Objective To study the effects of Herba Potenillae Discoloris decoction on mRNA
expression insulin-degrading enzyme (IDE) of experimental rat model of type 2 diabetes mellitus.
Methods mRNA expression of IDE was determined by RT-PCR in 10 rats model of type 2 diabetes
mellitus being treated with Herba Potenillae Discoloris decoction, 10 diabetic rats laking placebo
and 10 normal subjects. Results Herba Potenillae Discoloris decoction caused a decrease in mRNA
expression of IDE. No change of the index was observed in diabetic rats with placebo. Conclusion
Herba Potenillae Discoloris decoction can reduced the mRNA expression of IDE of rat model of type
2 diabetes mellitus.
Key words：Herba Potenillae Discoloris；type 2 diabetes mellitus；insulin-degrading enzyme；gene
expression

致“瘀”,终止“痰瘀痹阻”的共同土壤,是机体生化物质渐
进为“痰瘀”病理的量变过程。ISI降低不仅可直接导致AS,
并且还可以通过影响AS的其他易患因素间接影响AS的发生
和发展[8]。AS“痰瘀”变化中,血脂、血液流变、血糖、胰岛
素、IR均逐渐增加,病情逐渐加重；从细胞水平看,由正常到
AS“痰凝”、“痰瘀痹阻”,有细胞凋亡现象,它贯穿于AS整个
过程中,调节机体细胞增殖与更新的平衡,但以“痰瘀痹阻”
细胞凋亡为最严重,具有显著性差异。细胞凋亡是一种固缩性
死亡,体积缩小、细胞膜出泡、凋亡小体形成等形态学改变。
AS“痰凝”时见细胞核固缩、凋亡小体形成。“痰瘀痹阻”VSMC
明显增殖并伴大量“泡沫细胞”,大量的细胞外基质(包括胶
原,弹性纤维、蛋白聚糖及细胞外脂质)均与actin表达异常
增加相关,与正常组比较有显著差异性。细胞凋亡严重,及凋
亡小体清除不足,是VSMC增殖的中心环节,也是AS由痰致瘀,
终至痰瘀互结的必然结果。
参考文献：
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(致谢：承蒙陈可冀院士审阅,谨致谢意！)
(收稿日期：2004-05-31)

2005年2月第12卷第2期 中国中医药信息杂志 ·41·

翻白草(Herba Potenillae Discoloris)又名鸡腿儿,为
蔷薇科植物翻白草(Potentilla discolor Bge.)的干燥全草,
具有止血、止痢、清热解毒、利尿消肿之功效,主要用于吐血、
便血、崩漏、痢疾、疥疮、无名肿毒等。民间用其水煎剂治
疗糖尿病。本实验拟从分子水平对其加以评价。
1 实验材料
1.1 主要试剂与药物
链脲佐菌素(STZ)购于 Sigma公司,临用时溶于 pH 4.5
的柠檬酸钠-柠檬酸缓冲溶液,配成2%的溶液,即20 mg/mL。
TRIZOL Reagent购于invitrogen life technologies公司。
TaKaRa RNA PCR Kit(AMV) Ver.2.1购于宝生物工程(大连)
有限公司。翻白草全草购于牡丹江市益寿堂药店,经漂洗、浸
泡、水煎、过滤、浓缩制成原药材含量分别为0.5、1.0、1.5
g/mL的溶液。
1.2 实验动物与饲料
Wistar 大鼠80只,2月龄、雌雄各半,体重200～250 g,
牡丹江医学院实验动物中心提供。基础饲料：碳水化合物占
60%,蛋白质占 22%,脂肪占 10%(植物脂肪为主),其它成分占
8%,牡丹江医学院动物实验中心提供。高热量饲料：由基础饲
料加炼猪油(25%)、蔗糖(20%)、鲜鸡蛋(3%)制成,其中碳水化
合物占 50%,蛋白质占 13%,脂肪占 30%(动物脂肪为主),其它
成分占7%。
2 实验方法
2.1 造模
参考文献[1]建立2型糖尿病大鼠模型,略有改动。健康
Wistar大鼠80只适应性喂养3 d,随机选取10只作为正常对
照组,给以基础饲料,其余 70只给以高热量饮食,持续喂养 8
周后,尾静脉一次性注射STZ注射剂15 mg/kg,而正常对照组
注射相同体积的柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液,48 h后,空腹血糖
测定,以血糖≥11.1 mmol/L且<33.3 mol/L为模型成功。
2.2 动物分组及处理
将造模成功的50只(筛选后,余者弃掉)糖尿病大鼠随机
分为5组：即正常对照组、模型对照组、翻白草大剂量组、
翻白草中剂量组、翻白草小剂量组,除正常对照组外,其余各
组分别给相应药物0.6 mL/100 g体重灌胃,正常对照组、模
型对照组灌胃相同体积的生理盐水,治疗周期为8周。
2.3 标本采集与测定
2.3.1 大鼠肝脏总RNA的制备 治疗期满,各组大鼠禁食12
h后乙醚麻醉,用Trizol总RNA提取试剂盒提取大鼠肝脏总
RNA,用紫外分光光度计测定总 RNA浓度和纯度,重复测定 3
次,OD260和 OD280之比值应在 1.8～2.0之间,计算样品总
RNA浓度。
2.3.2 反转录和半定量 PCR 用TaKaRa RNA PCR Kit (AMV)
Ver.2.1试剂盒,按说明书操作,反转录反应引物选用 Oligo
Dt-Adaptor Primer,反应条件：30 ℃,10 min；50 ℃,30 min；
99 ℃,5 min；5 ℃,5 min,进行一个循环。PCR反应扩增,根
据大鼠IDE基因的引物序列,扩增片段300 bp,其序列上游引
物为 5′-AATGATACTCTCTGCAGA-3′；下游引物为 5′
-GTTTGAATCACCTGAGTC-3′。内标准物为β-actin,采用文献
的引物序列,扩增片段 270 bp,其序列上游引物为 5′
-AAATCGTCGGTGACATCAAA-3′ ； 下 游 引 物 为 5′
-ATCGTACTCGTGCTTGCTGA-3′。反应条件为：94 ℃ 5 min后,
进行40个循环扩增(94 ℃,1 min；55 ℃,45 s；72 ℃,90 s)。
再经72 ℃ 10 min、4 ℃ 5 min后,即可进行扩增产物鉴定,
取 10 μL PCR反应液,经 2%琼脂糖凝胶电泳,电泳完毕后用
凝胶成像分析系统成像并用密度扫描分析PCR产物带。为消
除系统及定量误差,IDE ｍRNA的表达水平以相对光密度表达
量即IDE/β-actin的比率来计算。
.4 数据处理
数据用SPSS11.0 for windows软件包处理,所有数据用
—
x
±s表示,组间差异采用单因素方差分析(ANOVA),有显著性差
异者用最小显著差法(LSD)进行两两比较。
3 结果
扩增后得到β-actin 270 bp和 IDE 300 bp两个片段,
β-actin为内参照,与IDE的扩增条件完全一致。结果见表1、
图1。
表1 在不同浓度HPD作用下大鼠肝细胞IDE基因
mRNA表达的变化(
—
x±s,n=10)
组别 IDE/β-actin
正常对照组 0.58±0.05☆☆
模型对照组 0.80± .08**
翻白草大剂量组 0.65±0.05☆
翻白草中剂量组 0.60± .06☆
翻白草小剂量组 0.62±0.04☆
注：与正常对照组比较, **P<0.01；与模型对照组比较,☆P<0.05,
☆☆P<0.01
270bp
M A B C D E
图1 大鼠肝细胞IDE mRNA 表达产物分析
4 讨论
2型糖尿病的最显著特征就是胰岛素抵抗(IR)。IR是指
机体对一定量的胰岛素的生物学效应低于预计正常水平的现
象,表现为胰岛素的敏感性和反应性降低[2]。IR的机制复杂,
而胰岛素的降解过快是其原因之一[3]。实验结果显示 2型糖
尿病大鼠的IDE基因表达显著高于正常对照组,表明2型糖尿
病大鼠由于 IDE的基因表达增加而造成胰岛素降解过快,使
胰岛素不能正常发挥生理效应,出现IR。
IDE(Insulin-degrading enzyme)是存在于细胞内的一种
金属蛋白酶,其主要作用是降解胰岛素、胰岛素样生长因子I、
胰岛素样生长因子Ⅱ等[3]。其米氏常数为20～40 nmol/L。
IDE可以裂解胰岛素A链和B链的不同位置,使胰岛素降解失
活[4]。
30bp IDE
β-actin
·42· Chinese Journal of Information on TCM Feb.2005 Vol.12 No.2

益气活血解毒方诱导小鼠肺癌细胞凋亡的研究
王 哲,刘春英,郝宏党,王守岩,蔡 朔,蔡玉文
(辽宁中医学院,辽宁 沈阳 110032)
摘要：目的 观察益气活血解毒方对小鼠 Lewis肺癌细胞凋亡的影响。方法 选用Lewis肺癌小鼠肿瘤细胞
株,制作肿瘤动物模型后,分为盐水对照组、中药组,进行光、电镜形态学观察。结果 实验组与对照组比较,肿瘤
团块较小,细胞体积较小,异型性不明显,病理性核分裂较少,间质血管较少,坏死现象较轻。电镜下可见凋亡小体形
成。结论 益气活血解毒方具有抗肺癌作用,其作用机理是通过诱导肿瘤细胞凋亡来实现的。
关键词：益气活血解毒方；细胞凋亡；电镜
中图分类号：R289.11 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2005)02-0042-02
Study on Yiqihuoxuejiedu Herb of Inducing Apoptosis of Lewis Lung Cancer M useWANG Zhe,
LIU Chun-ying, HAO Hong-dang, et al (Liaoning College of TCM, Shenyang 110032,China)
Abstract：Objective To observe the effect of Yiqihuoxuejiedu herb on inducing apoptosis of Lewis
lung cancer mouse. Method We chose the cell strain of Lewis lung cancer mouse, inoculated the cell
strain subcutaneously. After building the tumor animal model successfully, we divided the animal
into Saline control group and Yiqihuoxuejiedu herb treating group. Using the method of light
microscope (LM) and electron microscope (EM) to observe the morphology. Result To be compared
with the control group, the experimental group has following characteristics：the tumor ball and the
cell volum are smaller, the atypia is not evident, and the pathological karyokinesis and interstitial
blood vessel are fewer. It has necrosis. Through the observation of EM, we found the formation of
apoptotic body. Conclusion Yiq huoxuejiedu herb has the function of anti-lung cancer which
mechanism maybe induce the tumor cell apoptosis of the Lewis lung cancer mouse.
Key words：Yiqihuoxuejiedu herb；apoptosis；electron microscope
益气活血解毒方是我院依据益气、活血、解毒组方原则
组成,是临床多年来一直应用的一种有效的抗肺癌方剂。为进
一步探讨其机制,本实验通过诱导肺癌细胞凋亡来研究益气
活血解毒方的抑癌机理。
1 实验材料
1.1 动物及瘤株
小鼠 Lewis肺癌肿瘤细胞株,中国医科大学免疫学教研
室提供。C57BL/6小鼠,65只,体重18～20 g,雌雄各半,中国
医科大学实验动物中心提供。
1.2 药物及试剂

基金项目：辽宁省教育厅资助课题(99152133)
益气活血解毒方由红参、黄芪、莪术、桃仁、白花蛇舌
草、天花粉、半枝莲、仙鹤草等组成。传统方法煎制而成,
终浓度为 1.0 g/mL,4 ℃冰箱保存备用。顺铂(DDP)粉剂,10
mg/瓶,齐鲁制药厂出品,批号010620。
1.3 主要仪器
Olympus光学显微镜、电子显微镜、超薄切片机等。
2 实验方法
2.1 分组
随机分为对照组、化疗组、中药组,每组20只。
2.2 造模
将小鼠 Lewis肺癌肿瘤细胞株从冻存的液氮内取出,复
苏后分别接种于5只C57BL/6小鼠左后肢皮下,待瘤体长至

翻白草的主要化学成分含可水解鞣质及缩合鞣质共约
0.04%,淀粉约37%,植株各部分均含黄酮类化合物。本研究结
果显示翻白草水煎剂能够显著降低 IDE的基因表达,避免胰
岛素降解过快,增强其敏感性和反应性,减轻IR。
参考文献：
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(收稿日期：2004-05-24)