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不同产地瓦松活性成分初步研究



全 文 :收稿日期:2013-04-08
基金项目:黑龙江省教育厅科学技术研究面上项目(11551514)
作者简介:肖杰(1963-),男,硕士,教授,主要研究方向为植物学,E-mail:swxxj@126.com。
doi.:10.13268/j.cnki.fbsic.2015.01.010
不同产地瓦松活性成分初步研究
肖杰,柴军红,杨春文,何婷婷,许丽颖
(牡丹江师范学院生命科学与技术学院,黑龙江 牡丹江 157011)
摘 要:目的:讨论不同产地瓦松提取物活性成分差异,以期为瓦松应用开发提供理论基础。方法:采用系统化学
检测法研究瓦松水提物及醇提取物成分差异;采用 HPLC法,对水提物正丁醇萃取相进行了讨论,研究其差异。结
果:不同产地瓦松水提物及醇提物存在一定差异。结论:相对来说辽宁、黑龙江所产瓦松活性成分较为丰富,相对
含量较高。
关键词:瓦松;活性成分
中图分类号:R931.6     文献标识码:A
Optimization of Extraction Process for Active
Components from Fimbriation Orostachys Herb
Xiao Jie,Chai Junhong,Yang Chunwen,He Tingting,Xu Liying
(School of Life Science and Technology,Mudanjiang normal university,Mudanjiang 157011)
Abstract:Objective:Active components from Fimbriation Orostachys Herb in different areas are discussed.To pro-
vided the theoretical basis for the application development.Methods:using the method of chemical system analysis,
Study on Differences of the active ingredients between alcohol extract and aqueous extract.Butanol phase of aqueous
extract was discussed by HPLC.Results:there are some differences in the Active components from Fimbriation
Orostachys Herb in different areas.Conclusion:The active components from Fimbriation Orostachys Herb of the Li-
aoning,Heilongjiang is more abundant,relatively high levels.
Key words:Orostachys Herb;Active components
  瓦松 (Orostachys Fisch)是景天科的瓦松属,
全草入药,具有清热解毒、止血、利湿、消肿的功效、
用于吐血、痔疮、湿疹、血痢、疟疾等症状[1-2]。2005
版药典首次收录。主要成分是黄酮类、有机酸、萜
类、氨基酸[2-4]等。现阶段相对研究较少,主要集中
在相关中药制剂、抑菌、降糖等方面,但对于不同产
地瓦松属植物活性成分差异研究相对较少。
本文以黑龙江、辽宁、甘肃、河北所产瓦松属植
物瓦松[5](经牡丹江师范学院于爽副教授鉴定分别
为狼爪瓦松、瓦松、黄花瓦松、塔花瓦松。标本现存
于牡丹江师范学院-生科院标本室,后面研究以地
方为代称)为对象,采用系统化学检测及 HPLC研
究化学成分变化,希望为瓦松属植物开发利用、活性
成分提取纯化提供一些理论依据。
1 材料与方法
1.1 主要试剂
正丁醇(AR),石油醚(AR),山柰素(贵州迪大
生物技术公司),香草醛(AR,辽宁世星药化)高氯酸
(AR)氢氧化钠(AR),硫酸铜(AR),乙醇(AR),硫
酸(AR),三氯化铁(AR),硅钨酸(AR),鞣酸(AR),
醋酐(AR),溴酚兰(AR),过氧化氢(AR),乙酸乙酯
(AR)磷酸(AR),色谱级甲醇等。
1.2 主要仪器
HH-6恒温水浴锅(常州华奥),FZ102植物粉
碎机(天津泰斯特仪器公司),UV-2010紫外可见分
光光度计(日立),BS214D电子天平(德国赛多利
斯),RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣),索氏提取装
置;高效液相色谱仪(美国 Waters);PAD紫外吸收
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第1期(总第134期) 中 国 林 副 特 产 No.1(Total No.134)
2015年2月 Forest By-Product and Speciality in China  Feb.2015
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检测器;超声波清洗器;离心机(美国贝克曼)等。
1.3 原料的预处理及预试溶液的制备
把黑龙江、辽宁、甘肃、河北各地的瓦松全草用
粉碎机打成粉状,过30~40目筛,备用。
水提取液的制备:分别称取不同产地的瓦松的
干粉100g,加入1000mL蒸馏水,90℃下水浴提取
2h,过滤,适当浓缩用于测定氨基酸、多肽和蛋白
质、糖类、皂苷、酚类等成分。
乙醇提取液的制备:分别称取不同产地瓦松的干粉
30g,加入300mL 75%乙醇,水浴回流提取2h,过滤,用于
测定有机酸、生物碱、酚类和鞣质、黄酮、萜等成分。
同上醇提法,乙醇浓度为95%,将其提取液浓
缩至原体积1/10,依次石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正
丁醇萃取,回收萃取溶剂,浓缩、干燥备用,本文主要
对正丁醇萃取相进行讨论。
1.4 液相色谱条件
色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(C18);
流动相:以甲醇-0.5%磷酸溶液(43∶57);
检测器:PDA(200~400nm全波长扫描);
柱温:30℃;进样量:waters2696E自动进样器
5~10μL。
2 结果与讨论
2.1 水提取液检测结果
如表1所示:以上不同产地瓦松中活性成分存
在差异,对于黑龙江及甘肃瓦松其中氨基酸蛋白物
质,含量相对是较低(进一步采用考马斯亮兰G-250
验证显阳性)。所有瓦松中醇提物加热沉淀显示应
为鞣制或其它成分(可能为相对溶解度低的糖苷
类)。相对于酚类,由于均含有黄酮类所以基本显示
阳性。由于瓦松大多含有草酸、没食子酸等,这与文
献[5-7]结果一致。皂苷、甾类、萜类是瓦松主要活性
成分之一,预实验表明,甘肃、河北产瓦松在此存在
差异,部分显阴性,表明在苷元含量或种类可能存在
差异,这也与杨林[8]课题组研究的部分结果相似。
河北瓦松在甾类上明显存在差异,笔者通过对购买
的3个批次,进一步研究发现,不同批次差异明显,
其中6~7月份河北所产瓦松甾类,显示阳性反应、
其它月份不明显。所以笔者认为这与采摘季节可能
有关系,进一步可以开展相关研究。同时进行Kel-
ler-Kiliani(K-K)反应发现,黑龙江及辽宁瓦松显示
阳性反应,初步判断可能含有强心苷成分。对于蒽
醌类碱液反应阳性,醋酸镁反应均阴性,表明可能含
有蒽醌类。生物碱反应表明以上只有黑龙江瓦松可
能含有生物碱。碘-碘化钾氧化反应显示可能与其
含有的黄酮、酚类有关系。香豆素、内酯研究表明,
黑龙江、辽宁正反应明显,显示含有相关物质,河北、
甘肃相对不是很明显,单一实验表明可能含有。以
上存在差异,表明亚种之间成分存在差异。
表1 化学成分系统预试结果
序号 预试项目 预试样液 实验内容
实验结果
黑龙江甘肃辽宁 河北

氨基酸、
多肽、
蛋白质
水提取液 ①双缩脲反应 - - + +
醇提取液 - - - -
水提取液 ②加热沉淀实验 + + + +
醇提取液 + + + +
2 酚类和鞣质
水提取液 ①三氧化铁实验 + + + +
醇提取液 - + + +
水提取液 ②明胶实验 - + + +
醇提取液 - - - -
3 有机酸
水提取液 ①溴酚蓝实验 + + + +
醇提取液 + + + +
水提取液 ②pH试纸实验 + + + +
醇提取液 + + + +
4 皂苷
水提取液 ① 醋酐-硫酸实验 + + + +
醇提取液 + - + -
水提取液 ②芳香醛-硫酸/高氯酸 + + + +
醇提取液 - - + -
5 蒽醌类
水提取液 ①碱液实验 + + + +
醇提取液 + + + +
水提取液 ②醋酸镁反应 - - - -
醇提取液 - - - -
6 香豆素

内酯
水提取液 ①开闭环反应 + + + +
醇提取液 + + + +
水提取液 ②异羟污酸铁反应 - - - -
醇提取液 + - + -
7 生物碱
水提取液 ①碘-碘化钾反应 + + + +
醇提取液 + + + +
水提取液 ②硅钨酸试剂 - - - -
醇提取液 + - - -
8 甾类
水提取液 ①Lieberman—Burchard + - + -
醇提取液 + + + -
水提取液 ②氯仿-浓硫酸反应 + + + +
醇提取液 + - + -
9 黄酮及其甙类
水提取液 ①盐酸-镁粉反应 + + + +
醇提取液 + + + +
水提取液 ②三氯化铝反应 + + + +
醇提取液 + + + +
  注:“+”阳性反应;“-”阴性反应。
2.2 萃取相 HPLC法研究
依据1.3提取方法,得到的萃取相,置于恒温水
浴锅中,挥发正丁醇至干,色谱甲醇进行溶解,12000
r/min下离心10min,取其上清液并定容,即得。
图1 辽宁瓦松的液相色谱图
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2015年 肖杰等:不同产地瓦松活性成分初步研究 第1期
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图2 河北瓦松的液相色谱图
图3 黑龙江瓦松的液相色谱图
图4 甘肃瓦松的液相色谱图
由图1~4所示,其正丁醇萃取相中黑龙江和甘
肃瓦松具有显著相似性,相对来说河北瓦松在相同
条件下,相对以上主体成分Ⅰ、Ⅱ含量差异明显,辽
宁瓦松成分与黑龙江及甘肃瓦松在色谱图中存在差
异。为了进一步研究成分差异,采用盐酸水解反应,
研究表明,以上成分主体为山奈素、异槲皮素及齐墩
果酸类物质。这与药典表述基本吻合,但是成分之
间含量、种类有差异,所以,下一步有必要对其成分
进行细化研究,有必要对萃取相展开相关液相指纹
图研究。
3 结论
综上所述,不同亚种瓦松成分存在较明显差异,
初步研究表明:就成分种类而言,黑龙江、辽宁所产
瓦松成分相对复杂,河北瓦松成分种类相对较少,黑
龙江瓦松中发现可能含有强心苷成分。进一步可以
开展相关研究。其液相实验表明:不同亚种萃取相
存在明显差异,所以有必要依照相关企业应用工艺,
开展其萃取相指纹图研究,进一步提高瓦松应用的
科学性。
参 考 文 献
[1]左春旭,李凤琴.几种天然药物的研究开发[J].中草药,
1996,27:202-205.
[2]郑艳,巩劼,陈士超,等.瓦松的形态解剖学研究[J].植
物研究,2003,23(2):164.
[3]郑万金,仲英.瓦松的化学成分研究[J].中草药,2009,40
(6):859.
[4]赵艳杰,刘晓娟.瓦松中强心成分的提取和药理作用的初
步研究[J].锦州医学院学报,1992,13(4):13.
[5]郑艳徐,珞珊.中国瓦松属的药用资源[J].中国中医药信
息杂志,2003,10(11):41-42.
[6]任荣,柴军红,金志民,等.瓦松属植物化学成分及其生物
活性研究进展[J].安徽农业科学,2011,39(22):13412-
13413.
[7]王翔飞,潘旭东,刘雯霞,等.黄花瓦松中总三萜成分的含
量的测定[J].中国民族民间医药,2009,10(3):11.
[8]杨林,闫福林.晚红瓦松化学成分的研究[J].新乡医学院
学报,2008,25(3):292.
(上接25页)的光合产物充实果粒,使果粒变大,随
着枝条留叶数增加,最下面2~3片叶完成生长后生
产的光合产物被分配给果实和上面幼叶生长,幼叶
生长竞争养分能力高于果实,果粒变小。因此,最适
宜的留叶数量为3片。环剥阻碍了光合产物向其它
组织运输,调节了光合产物再分配,果实得到充足的
营养,果粒变大,可溶性固形物增加。环剥在生产应
用过程中,环剥时期、宽度对树势强弱的判断不好掌
握,而摘心相对较易操作和推广。
参 考 文 献
[1]杨发祥,刘化英.果桑“大十”品种早丰高产栽培技术[J].
北方蚕业,2007(4):28.
[2]楼黎静,钱文春,柳丽萍,等.果桑栽培技术的应用研究
[J].中国蚕业,2005(4):39-40.
[3]孙孝龙.江苏沿海果桑智能化设施栽培技术研究[J].蚕
桑茶叶通讯,2013(4):4-5.
[4]叶伟彬.我国桑树研究及栽培技术的回顾与展望[J].广
东蚕业,2000(4):51-58.
[5]孙建敏,朱敏华,叶正梅.果桑塑料大棚栽培技术研究
[J].浙江柑橘,2001(4):21.
[6]陈继富,崔丽红.不同时期重截对大十果桑生长结果的影
响[J].北方园艺,2009(6):76-78.
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2015年 中 国 林 副 特 产 第1期
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