免费文献传递   相关文献

激素对菘蓝器官分化及愈伤组织诱导的影响



全 文 :— 11 —现代中药研究与实践2012年第26卷第5期Chin Med J Res Prac,2012 July.,Vol.26 No.5
3.2 采收期的确定
根据瓜蒌道地产地瓜蒌传统的采收时间和文献记
载的采收时间报道,本实验拟订了传统采收期(秋分
至寒露间,9 月底到 10 月初)和果实黄色采收期(霜
降至立冬,10 月底至 11 月初)两个采收时间进行试
验。按传统的采收加工时间和方法,瓜蒌的采收期
应在 9 月底至 10 月初,此时果皮仍为绿色,但种子
已经成熟,呈灰棕色或棕色,果皮厚度 1 cm 以上,
不容易被碰伤而破碎,加上整个加工过程需要轻拿轻
放,一般果实损伤极少,果实干燥后为橙红色或棕红
色,这种颜色是商品药材瓜蒌的传统颜色,也是人们
公认的瓜蒌药材颜色。而破损后的果实在干燥时常形
成“黑头”,药材干燥过程中常变成黑褐色或棕褐色,
糖分自破损处流出或渗出,并且不容易干燥,极易发
霉、生虫、变质,这种药材实际上已经报废。采收期
过晚,果皮还会随着采收期的延后而逐渐变薄,变薄
的果皮在采收、干燥、运输和贮藏的过程中极易破损,
如 1、2 两种样品,采收时由于果皮已经很薄,其厚
度仅为正常季节采收期瓜蒌的 1/3,我们见到样品时,
大多数已经破碎,由于大部分采用了烘干法,才未造
成大量损失。
根据上述研究结果,在保证瓜蒌的产量和质量
的同时,又要确保瓜蒌的外观特征,我们确定,瓜蒌
的采收期基本沿用传统的采收季节,即秋分至寒露期
间,也就是 9 月底至 10 月初。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中国药典 [S].北京 :化学工业出版社,2010 :84.
[2] 靳光乾,刘善新.长清栝楼的栽培 [J].中国中药杂志,1989,14(8):
12.
[3] 丁如辰.山东瓜蒌栽培经验介绍 [J].齐鲁药事,1983,12(4):43 .
[4] 屈生彦.庭院栽培栝楼前景可观 [J].中国中药杂志,1991,11(11) :
658.
[5] 光明中药函授学院山东分院.山东地道药材 [M].北京 :中国医药科技
出版社,1993 :325.
[6] 王慧敏,唐月荣.瓜蒌的加工贮存 [J].中药材,2000,23(4) :203.
激素对菘蓝器官分化及愈伤组织诱导的影响
张晓旭
(中山大学药学院 广东 广州 510006)
摘要 : 目的 研究激素对菘蓝器官分化及愈伤组织形成能力的影响。方法 以菘蓝无菌苗的子叶和胚
轴为外植体,采用含有不同植物激素配比的培养基培养菘蓝不同外植体,分析在不同激素配比的条件下诱
导形成愈伤组织和分化不定根、不定芽的能力。结果 在 NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.1 mg/L (14d)、NAA 0.5
mg/L+6-BA 1.0 mg/L (14d)、NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.1 mg/L (28d) 三个条件下子叶的愈伤组织诱导率可达
到 100% ;NAA (0 mg/L ~ 0.1 mg/L) +6-BA1.0 mg/L 的激素组合不定芽诱导率可达 75% 以上 ;生根培养以
1/2MS 培养基附加 NAA 0.1 mg/L 可使不定芽生根率可达 100%。结论 合适的激素组合,能促进菘蓝愈伤
组织的形成和器官的分化。。
关键词 : 激素 ;菘蓝 ;诱导 ;器官分化 ;愈伤组织
中图分类号 :R282.2 文献标识码 :A 文章编号 : 1673-6427(2012)05-0011-04
收稿日期:2012-03-08
作者简介:张晓旭(1990-),女,药学专业硕士研究生
DOI:10.13728/j.1673-6427.2012.05.010
— 12 — 现代中药研究与实践2012年第26卷第5期Chin Med J Res Prac,2012 July.,Vol.26 No.5
The Effect of Hormone for Isatis indigotica Organ Differentiation
and Induction of Callus
Zhang xiao-xu
(College of Pharmacy Sun Yat-sen University Guangzhou 510006)
Abstract: Objective Study the effects of hormones on the ability of the organ differentiation and callus
formation of Isatis indigotica Fort. Method With the Isatis indigotica Fort. explants of aseptic seedling cotyledon
and hypocotyl, using medium containing different plant hormones on Isatis indigotica Fort. to culture different
explants,analysis the ability of inducing the formation of callus and differentiation of adventitious roots and
adventitious buds under different conditions of hormone combinations. Results The cotyledons callus induction
rate can reach 100% under the three condition of NAA 0.1mg / L +6- BA 0.1 mg / L (14 d), NAA 0.5 mg / L +6-
BA 1.0 mg / L (14 d), NAA 0.5 mg / L +6- BA 0.1 mg / L ( 28 d); with the hormone combination of NAA (0 mg /
L to 0.1 mg / L) +6- BA1.0 mg / L, adventitious bud induction rate can up to 75% above, rooting culture of 1/2MS
medium supplemented with NAA 0.1 mg / L, the rooting rate can up to 100%. Conclusion The right combination
of hormones can promote the callus formation and organ differentiation of Isatis indigotica Fort.
Keywords: Hormone; Isatis indigotica Fort.; induction; organ differentiation; callus
十字花科植物菘蓝(Isatis indigotica Fort.)是一
种有开发前景的药用植物,其干燥根入药称之为板蓝
根,含有靛蓝、靛玉红、腺苷及多种氨基酸等,具有
清热解毒、凉血利咽之功效。医学上用板蓝根治疗温
毒发斑、舌绛紫暗、痄腮、喉痹、烂喉丹痧、大头瘟疫、
丹毒、痈肿等症 ;其叶片入药称大青叶,是我国传统
常用中药材之一。具有清热解毒,凉血消斑的功能。
靛玉红有抗癌活性,治疗慢性粒细胞白血病有较好的
疗效,并且有增强人体免疫力的功能。
利用组织培养对菘蓝进行快速繁殖和高产栽
培,对节约耕地,提高产量有重要意义。
本试验研究通过采用含有不同的植物激素
配比的培养基培养菘蓝不同外植体,研究
激素对菘蓝器官分化及愈伤组织形成能力
的影响,为菘蓝组培生产提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
挑选生长饱满、无病斑的菘蓝种子,
75% 酒精处理数秒,无菌水冲洗 2 次,然
后用 0.1%HgCl2 消毒 15mim,无菌水冲洗 5
次,接种于预先配制好的不含任何激素的
B5 培养基(含 2% 蔗糖和 0.8% 琼脂)上,
于光照培养箱中培养至 13 d 时,取无菌苗
的子叶和胚轴作为外植体。
1.2 方法
以 B5 培养基为基本培养基,添加 2%
蔗 糖 和 0.8% 琼 脂 及 不 同 浓 度 的 NAA 和
6-BA,调节 pH5.8。将无菌苗分子叶和胚轴剪下,
作为外植体分别转入上述培养基中,每瓶培养基接入
4~6 个外植体,于光照培养箱中(27℃,昼夜无温差,
光照 12 h/d)培养,分别于 14 d 和 28 d 时观察,统
计并记录结果。
2 结果与分析
2.1  不同浓度激素组合对外植体愈伤组织形成的影

NAA 与 6-BA 不同浓度组合对诱导外植体形成愈
伤组织的影响见表 1。在 14 d 时,接种于加了 NAA
表 1 不同浓度激素组合对外植体愈伤组织形成的影响
Tab.1 Effects of hormone combination and concentrations on external callus formation
外植体
激素浓度组合(mg/L) 接种外植
体数(块)
14d 形成愈
伤组织数
(块)
14d 愈伤组
织诱导率
(%)
28d 形成愈
伤组织数
(块)
28d 愈伤组
织诱导率
(%)NAA 6-BA
子叶
0
0.1 16 0 0 2 12.50
2.0 6 4 66.67 0 0
0.1
0.1 12 12 100.00 1 8.33
1.0 12 11 91.67 2 16.67
2.0 10 7 70.00 2 20.00
0.5
0.1 12 11 91.67 12 100.00
1.0 11 11 100.00 8 72.73
2.0 9 7 77.78 4 44.44
胚轴
0
0.1 3 0 0 0 0
2.0 5 0 0 0 0
0.1
0.1 3 0 0 0 0
1.0 3 2 66.67 0 0
2.0 7 0 0 0 0
0.5
0.1 4 3 75.00 0 0
1.0 6 3 50.00 1 16.67
2.0 5 0 0 0 0
— 13 —现代中药研究与实践2012年第26卷第5期Chin Med J Res Prac,2012 July.,Vol.26 No.5
培养基中的子叶和胚轴相对较接种于不加 NAA 培养
基中的子叶和胚轴愈伤组织诱导率高,证明 NAA 有
助于愈伤组织的形成。至 28d 时,愈伤组织诱导率大
部分呈下降趋势,可能是与培养基中所含的 6-BA 促
进愈伤组织形成器官、分化不定芽有关。在 NAA 0.1
mg/L+6-BA 0.1 mg/L(14d)、NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0
mg/L(14 d)、NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.1 mg/L(28 d)
三个条件下子叶的愈伤组织诱导率可达到 100%,可
作为选择诱导愈伤组织形成的条件的参考。
此外,同等激素条件下,胚轴的愈伤组织诱导率
明显低于子叶的愈伤组织诱导率,说明子叶和胚轴
对 NAA 的敏感程度不同,可能与外植体本身内含生
长素不同有关。以获得愈伤组织为目的组织培养时,
选择子叶作为外植体,可获得相对较好的结果。
2.2 不同浓度激素组合对外植体不定芽形成的影响
NAA 与 6-BA 不同浓度组合对诱导外植体分化
不定芽的影响见表 2.。整体分析激素对子叶和胚轴
的不定芽诱导情况,发现胚轴比子叶分化不定芽要
早,且不定芽率相对较高。进一步分析发
现当 NAA 浓度一定,随着 6-BA 浓度的提
高,不定芽诱导率呈整体升高趋势,但在
6-BA1.0 mg/L~2.0 mg/L 浓度范围内,诱导
率升高不显著 ;而 6-BA 浓度一定,随着
NAA 浓度的提高,不定芽诱导率升高不显
著甚至有下降的趋势。在 NAA 0 mg/L~0.1
mg/L 浓度范围内,诱导率已经十分可观,
所 以 NAA(0 mg/L~0.1 mg/L)+6-BA1.0
mg/L 适宜是诱导菘蓝外植体分化芽。
2.3 不同浓度激素组合对外植体不定根形
成的影响
NAA 与 6-BA 不同浓度组合对诱导外
植体分化不定根的影响见表 3。从表 3 可
以看出,28d 时子叶和胚轴分化不定根的
最低浓度激素组合分别为 NAA 0.1 mg/L+6-
BA 1.0 mg/L 和 NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.1 mg/
L。从 14 d 和 28 d 的数据对比可以看出,
子叶和胚轴都在激素组合 NAA 0.5 mg/L+6-
BA 0.1 mg/L 时分化不定根较早且不定根诱
导率最高,说明该激素浓度组合最适宜外
植体不定根的诱导。NAA/6-BA 比值较低
时(NAA 0 mg/L- 0.1 mg/L),不适宜外植
体不定根的生成,随着 NAA/6-BA 比值升
高,外植体不定根的诱导率升高。
本组试验并没有得到较高的不定根诱
导率,以胚轴为外植体的培养中,不定根
的诱导率均不超过 50%,以子叶为外植
体的培养中,最高的不定根诱导率也只有
75%。一般对菘蓝试管苗的生根培养不采
用此两组激素组合,据彭丽萍 [3] 等,但以
1/2MS 培养基附加 NAA 0.1mg/L 可使不定
芽生根率可达到 100% 。
表 2 不同浓度激素组合对外植体不定芽形成的影响
Tab.2 Effects of hormone combination and concentrations on external
adventitious buds formation
外植体
激素浓度组合(mg/L) 接种外植
体数(块)
14d 形成愈
伤组织数
(块)
14d 愈伤组
织诱导率
(%)
28d 形成愈
伤组织数
(块)
28d 愈伤组
织诱导率
(%)NAA 6-BA
子叶
0
0.1 16 4 25.00 6 37.50
2.0 6 4 66.67 6 100.00
0.1
0.1 12 0 0 7 58.33
1.0 12 11 91.67 9 75.00
2.0 10 3 30.00 8 80.00
0.5
0.1 12 2 16.67 5 41.67
1.0 11 1 9.09 8 72.73
2.0 9 4 44.44 8 88.89
胚轴
0
0.1 3 3 100.00 3 100.00
2.0 5 5 100.00 5 100.00
0.1
0.1 3 3 100.00 3 100.00
1.0 3 3 100.00 3 100.00
2.0 7 6 85.71 7 100.00
0.5
0.1 4 1 25.00 3 75.00
1.0 6 3 50.00 5 83.33
2.0 5 3 60.00 5 100.00
表 3  不同浓度激素组合对外植体不定根形成的影响
Tab.3 Effects of hormone combination and concentrations on external
adventitious root formation
外植体
激素浓度组合(mg/L) 接种外植
体数(块)
14d 形成愈
伤组织数
(块)
14d 愈伤组
织诱导率
(%)
28d 形成愈
伤组织数
(块)
28d 愈伤组
织诱导率
(%)NAA 6-BA
子叶
0
0.1 16 0 0 0 0
2.0 6 0 0 0 0
0.1
0.1 12 0 0 0 0
1.0 12 0 0 3 25.00
2.0 10 1 10.00 3 30.00
0.5
0.1 12 5 41.67 9 75.00
1.0 11 2 18.18 2 18.18
2.0 9 3 33.33 5 55.56
胚轴
0
0.1 3 0 0 0 0
2.0 5 0 0 0 0
0.1
0.1 3 0 0 0 0
1.0 3 0 0 0 0
2.0 7 0 0 0 0
0.5
0.1 4 1 25.00 2 50.00
1.0 6 1 16.67 1 16.67
2.0 5 0 0 2 40.00 (文下转第 27 页)
— 27 —现代中药研究与实践2012年第26卷第5期Chin Med J Res Prac,2012 July.,Vol.26 No.5
及相关系数计算,都表明鱼腥草根、茎、叶、花四个
部位之间存在一定的差异。根和茎、叶、花差异大 ;
茎与根、叶、花均有差异 ;叶和花差异小。峰面积归
一化法显示各部位组分含量存在较大差异,茎、叶、
花各组份含量大体相同,根部挥发油含量和其它三个
部位相差较大;单萜,倍半萜,非萜化合物在茎、叶、
花中的比例接近,和根部不一致。可见,随着中药现
代化进程的推进,为确保用药质量,今后鱼腥草用药
时应充分考虑各部位挥发油成分的差异。
参考文献
[1] 国家药典委员会 . 中国药典 ( 一部 ) [S]. 北京 : 中国医药科技出版 , 2010.
[2] 曾虹燕,蒋丽娟,张英超 . 鱼腥草挥发油的化学成分 [J]. 植物资源与环
境学报 , 2003, 12(13) :50-53.
[3]  杨 滨,王若菁 . 鱼腥草中挥发油成分的气相色谱指纹图谱研究 [J]. 中
国中药杂志 , 2006, 31(24) :2055-2058.
[4] 杨文凡,陈 勇,程翼宇 . 鱼腥草不同部位挥发油成分的研究 [J]. 中草药 ,
2006, 37(8) :1149-1151.
[5]  黄春燕,吴 卫,郑有良 . 鱼腥草不同部位挥发油化学成分的比较 [J].
药物分析杂志 , 2007, 27(1) :40-45.
[6] 张婷婷,宋敏 . 鱼腥草药材挥发油及其注射剂中葵酰乙醛的研究考证 [J].
药物分析杂志,2008, 28(9) :1422-1428.
[7] Liang YZ, Xie PS, Chan K. Quality Control Of Herbal Medicines[J]. Journal Of
Chromatography B, 2004, 812( 1-2 ) :53-67.
[8] Lu HM, Gan DD, Zhang ZM, et al. Sample classifcation of GC-ToF-
MS metabolomics data without the requirement for chromatographic
deconvolution[J]. Metabolomics, 2011, 7(2) :191-205.
[9] 卢红梅,梁逸曾 . 中药鱼腥草及其注射液指纹图谱和谱效学研究 [D],
中南大学 , 2006.
[10] 杨秀伟,郝美荣,服部征雄 . 中药成分代谢分析 [M]. 北京 : 中国医药
科技出版社 , 2003, 265.
[11] Li C, Wei W, Chun YH. Composition and variability of the essential oil of
Houttuynia in Sichuan and Chongqing provinces of China[J]. Chemisty of
Natural Componds, 2008, 44(6) :77-81.
[12] 刘 雷,吴 卫,黄春燕 . 鱼腥草野生居群人工栽培后挥发油成分分析 [J].
中国中药杂志 , 2010, 35(7) :876-881.
责任编辑 :王广林
3 结论
菘蓝不同外植体,胚轴的不定芽分化较早,培养
6~7 d 即可发生 [4],14 d 时观察胚轴在适宜激素组合
的培养基上其愈伤组织诱导率为 0,而不定芽诱导率
已达 100%。
菘蓝外植体为对 NAA 敏感,NAA 有助于愈伤组
织的形成(其浓度高低对愈伤组织诱导率的影响不显
著 [5]);在 NAA 0 mg/L~0.1 mg/L 浓度范围内,菘蓝不
定芽诱导率已经十分可观 ;NAA 0 mg/L~0.1 mg/L 不
太适宜外植体不定根的形成。
随着 6-BA 浓度的提高,不定芽诱导率呈整体升
高趋势,但在 6-BA1.0 mg/L~2.0 mg/L 浓度范围内,
诱导率升高不显著;对不定根诱导率的影响,6-BA2.0
mg/L 时与 6-BA0.1 mg/L 时相当。
参考文献
[1]  国家药典委员会 . 中国药典二部 [S]. 北京 :中国医药科技出版社,
2010.
[2]   肖 培 根 主 编 . 新 编 中 药 志 . 第 三 卷 [M]. 北 京 :化 学 工 业 出 版 社,
2001.12
[3]  彭丽萍,张远兵,汪露润 . 菘蓝离体叶片高频再生体系的建立 [J]. 安徽
科技学院学报,2007,21 (4) :14-17.
[4]  彭菲,等 . 菘蓝子叶和下胚轴组织培养再生植株的研究 [J]. 湖南农学院
学报,1994,20(5):450-456.
[5]  陈薇,杜利云,寸守铣,赵丰萍 . 菘蓝下胚轴组织培养研究 [J]. 药学实
践杂志,2000,18(5):337-339.
责任编辑 :王广林
(文上接第 13 页)