全 文 ：［基金项目］吉林省教育厅项目（编号：吉教科合字２０１３第３１６号）　［作者简介］王亚红，女，硕士，教授，研究方向：天然药物的研究开发，电
话：１３７０４３１９６６５，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｙａｈｏｎｇ９９９９９＠１６３．ｃｏｍ
大孔树脂纯化瓦松中总黄酮的工艺
王亚红１，王亚丽２，杨艳俊１　 （１．吉林化工学院 化学与制药工程学院，吉林 吉林１３２０２２；２．长春市１２０急救中心，吉林
长春１３００００）
［摘要］　目的：筛选纯化瓦松总黄酮的树脂型号及最佳工艺。方法：分别通过动态、静态吸附的方法，以解吸率为主要指标考
察各因素对瓦松总黄酮大孔吸附树脂纯化工艺的影响。结果：ＤＭ３０１型大孔树脂纯化瓦松总黄酮效果最好，最佳工艺条件
为：上样液浓度２．６５　ｍｇ·ｍｌ－１，吸附速率３　ＢＶ·ｈ－１，５０％乙醇为洗脱液，８倍量树脂柱体积洗脱，上样液ｐＨ２时效果最好，总
黄酮含量达到５４．１１％。结论：ＤＭ３０１型大孔吸附树脂纯化瓦松总黄酮操作简单、安全、成本低廉、有较高的应用价值。
［关键词］　瓦松；大孔吸附树脂；总黄酮；纯化
［中图分类号］Ｒ９４３　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００１－５２１３（２０１４）１０－０７９１－０４　ＤＯＩ：１０．１３２８６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｈｉｎｈｏｓｐｐｈａｒｍａｃｙｊ．２０１４．１０．０４
Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＯｒｏｓｔａｃｈｙｓ　ｆｉｍｂｒｉａｔｕｓ　ｂｙ　ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｒｅｓｉｎ
ＷＡＮＧ　Ｙａ－ｈｏｎｇ１，ＷＡＮＧ　Ｙａ－ｌｉ　２，ＹＡＮＧ　Ｙａｎ－ｊｕｎ１（１．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｊｉｌｉｎ　Ｉｎ－
ｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊｉｌｉｎ　Ｊｉｌｉｎ　１３２０２２，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　Ｅｍｅｒｇｅｎｃｙ　Ｃｅｎｔｅｒ，Ｊｉｌｉｎ　Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　１３００００，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｓｅｌｅｃｔ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｒｅｓｉｎｓ　ｍｏｄｅｌ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｃｒａｆｔ　ｆｏｒ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＯｒｏｓｔａｃｈｙｓ
ｆｉｍｂｒｉａｔｕｓ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ｔｈｅ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｅｘａｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｓｔａｔｉｃ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｅｘ－
ｐｅｒｉｍｅｎｔｓ，ａｎｄ　ｔａｋｉｎｇ　ｔｈｅ　ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ａｓ　ｔｈｅ　ｍａｉｎ　ｉｎｄｅｘ．ＲＥＳＵＬＴＳ　ＤＭ３０１　ｔｙｐｅ　ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ｒｅｓｉｎ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ａｇｅｎｔ　ｆｏｒ
ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＯｒｏｓｔａｃｈｙｓ　ｆｉｍｂｒｉａｔｕｓ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ａｓ　ｆｏｌｏｗｓ：ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｏｎｃｅｎ－
ｔｒａｔｉｏｎ　２．６５　ｍｇ·ｍｌ－１，ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｒａｔｅｓ　３ＢＶ，ｅｌｕｔｉｎｇ　ｗｉｔｈ　５０％ｅｔｈａｎｏｌ　ａｎｄ　８　ｍｕｌｔｉｐｌｅｓ　ｏｆ　ｃｏｌｕｍｎ　ｖｏｌｕｍｎ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ，ｐＨ
ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅ　ｗａｓ　２．Ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｐｕｒｉｔｙ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗａｓ　ｕｐ　ｔｏ　５４．１１％．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　ＤＭ３０１　ｍａｃｒｏ－
ｐｏｒｏｕｓ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｒｅｓｉｎ　ｉｓ　ｓａｆｅ，ｅｃｏｎｏｍｉｃａｌ　ａｎｄ　ｅａｓｙ　ｔｏ　ｕｓｅ　ａｎｄ　ｃａｎ　ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ　ｂｅ　ｐｒｏｍｉｓｉｎｇｌｙ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ　ｐｕｒｉｆｙ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　Ｏｒｏｓｔａｃｈｙｓ　ｆｉｍｂｒｉａｔｕｓ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：Ｏｒｏｓｔａｃｈｙｓ　ｆｉｍｂｒｉａｔｕｓ；ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｒｅｓｉｎ；ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
　　瓦松［Ｏｒｏｓｔａｃｈｙｓ　ｆｉｍｂｒｉａｔｕｓ］因形态似松，生
必依瓦而得名，也称千手观音等，在我国已有一千余
年药用历史，被誉为“东方神草”［１］。现代药理研究
表明，瓦松具有抗癌、抗菌、强心和免疫调节等作
用［２］。国内外学者在瓦松属植物的生物活性及化学
成分研究中取得一定成果［３－６］，研究表明瓦松中含有
山柰素（ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ）、槲皮素（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）、山柰素－７－
鼠李糖苷（ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ－７－ｒｈａｍｎｏｓｉｄｅ）和槲皮素－３－Ｂ－
Ｄ－葡萄吡喃糖苷（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ－３－Ｂ－Ｄ－ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ）等多
种黄酮化合物［７］。黄酮化合物生物活性众多，经提
取纯化，可充分发挥其在医药方面的作用。已有研
究用大孔吸附树脂富集纯化黄酮类化合物效果理
想［８－１１］，而瓦松黄酮类化合物的分离纯化尚未见报
道。本实验对５种不同型号的大孔吸附树脂进行纯
化瓦松黄酮的筛选，并通过动态实验优化 ＤＭ３０１
型大孔树脂纯化工艺，为该资源的进一步开发提供
参考。
１　材料
ＴＵ－１９５０紫外可见分光光度计（北京普析通
用仪器有限责任公司）；ＲＥ－５２Ａ旋转蒸发仪（上海
亚荣生化仪器厂）；瓦松［吉林市江城大药房，周丽佳
药师鉴定为瓦松（Ｏｒｏｓｔａｃｈｙｓ　ｆｉｍｂｒｉａｔｕｓ）］；芦丁
（中国食品药品检定研究院，批号１１９８－０８１２０９；无
水甲醇、无水乙醇、三氯化铝、冰醋酸、醋酸钠均为分
析纯。大孔吸附树脂：ＤＭ３０１、ＤＭ１０３、ＨＰＤ１００、
Ｄ１０１、ＡＢ－８（西安蓝晓科技有限公司）。
２　方法与结果
２．１　总黄酮含量测定
２．１．１　对照品溶液的制备　精密称取干燥至恒重
的９４．３％对照品芦丁０．０１０　９　ｇ，置于５０　ｍｌ量瓶中
用无水甲醇溶解，定容，制成质量浓度为０．２０５　６　ｍｇ
·ｍｌ－１的对照品溶液［１２］。
２．１．２　供试品溶液的制备称取干燥粉碎瓦松２００
ｇ，用９倍量和８倍量７０％乙醇回流提取２次，每次
２　ｈ，抽滤，合并滤液，回收乙醇至适量，转移至２５０
·１９７·中国医院药学杂志２０１４年５月第３４卷第１０期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ｍａｙ　２０１４，Ｖｏｌ　３４，Ｎｏ．１０
ｍｌ量瓶加无水甲醇定容［１３］。
２．１．３　检测波长的选择　取对照品、供试品溶液各
１　ｍｌ，以等量无水甲醇平行样为空白，置１０　ｍｌ量瓶
中，各加新配制０．１　ｍｏｌ·ｍｌ－１三氯化铝溶液２　ｍｌ，
再加入ｐＨ５．２醋酸－醋酸钠缓冲溶液１　ｍｌ，无水甲
醇定容，摇匀，４０℃水浴保温１０　ｍｉｎ［１４］。冷却后在
２００～６００　ｎｍ范围内测吸光度，对照品最大吸收在
２６０～２８０　ｎｍ，供试品在２７２　ｎｍ有最大吸收，由此
确定检测波长为２７２　ｎｍ。
２．１．４　标准曲线的绘制　精密移取芦丁对照品溶
液０．２，０．４，０．６，０．８，１．０，１．２　ｍｌ置于６个１０　ｍｌ量
瓶中，测吸光度。以质量浓度Ｃ为横坐标，吸光度
Ａ为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Ａ＝３３．７２
Ｃ＋０．０１８　９，Ｒ２＝０．９９９　６。结果表明芦丁在４．１１２
～２４．６７２　ｍｇ·ｍｌ－１范围内线性关系良好。
２．１．５　精密度试验　精密移取芦丁对照品溶液１．０
ｍｌ置１０　ｍｌ量瓶中，连续测定６次吸光度。结果
ＲＳＤ为０．６９１％，表明仪器精密度良好。
２．１．６　稳定性试验　精密移取供试品溶液５　ｍｌ置
５０　ｍｌ量瓶中，每隔２０　ｍｉｎ测吸光度。结果表明，供
试品溶液在２２０　ｍｉｎ内基本稳定，ＲＳＤ为２．０８％（ｎ
＝１１）。
２．２　静态吸附试验　取１．４２５　ｍｇ·ｍｌ－１瓦松总黄
酮提取液４０　ｍｌ，分别加入放经过预处理各种型号６
ｇ树脂的１００　ｍｌ具塞三角瓶中［１５］。每１０　ｍｉｎ振摇
１次约３０　ｓ，持续２　ｈ，静置４８　ｈ，过滤。取续滤液
０．１　ｍｌ，测吸光度Ａ１，计算吸附率。树脂抽滤至干，
用７５％乙醇１００　ｍｌ解吸，操作同上。测续滤液吸
光度Ａ２，计算解吸率，结果见表１。
表１　大孔树脂静态筛选实验结果
Ｔａｂ　１　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｓｔａｔｉｃ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｔｅｓｔ　ｏｆ　ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ｒｅｓｉｎ
树脂种类
吸附后样品液质量
浓度Ｃ１／ｍｇ·ｍｌ－１
解吸液质量浓度
Ｃ２／ｍｇ·ｍｌ－１
吸附率
／％
解吸率
／％
Ｄ－１０１　 ０．５４４　２　 ０．２６４　６　 ６４．７５　５１．７０
ＤＭ３０１　 ０．４７３　５　 ０．３１０　９　 ６９．３３　６３．０３
ＤＭ１３０　 ０．５３４　７　 ０．２４４　９　 ６５．３７　４７．１３
ＨＰＤ－１００　 ０．５６３　２　 ０．２５７　８　 ６３．５２　５０．１１
ＡＢ－８　 ０．５４６　９　 ０．２５２　４　 ６４．５８　４８．８５
　　计算公式［１６］：吸附率（％）＝（Ｃ０－Ｃ１）／Ｃ０×
１００％ ；解吸率（％）＝Ｖ２Ｃ２／Ｖ１（Ｃ０－Ｃ１）×１００％。
Ａ１：吸附后样品液总黄酮吸光值；Ａ２：解吸液总黄酮
吸光值；Ｃ０（ｍｇ·ｍｌ－１）：上样液总黄酮质量浓度；Ｃ１
（ｍｇ·ｍｌ－１）：吸附后溶液总黄酮质量浓度；Ｃ２（ｍｇ·
ｍｌ－１）：解吸液总黄酮浓度；Ｖ１（ｍｌ）：样品液体积；Ｖ２
（ｍｌ）：解吸液体积。
由表１可得，吸附率、解吸率相对较高的为
ＤＭ３０１，其优势明显，故选择ＤＭ３０１型树脂进一步
优化工艺。
２．３　泄露曲线的绘制　取预处理树脂１５　ｇ（体积约
２０　ｍｌ），装柱。取上述药液（２．１３　ｍｇ·ｍｌ－１）以２　ＢＶ
·ｈ－１流速上样。每份２０　ｍｌ，收集２０份流出液。以
瓦松总黄酮质量浓度为考察指标绘制泄漏曲线，结
果见图１。
图１　泄漏曲线
Ｆｉｇ　１　Ｌｅａｋａｇｅ　ｃｕｒｖｅ
　　由图１可知，当上样大约８０～１００　ｍｌ（４～５
ＢＶ）时，开始有泄漏，故确定每次处理上样液４　ＢＶ。
２．４　上样液浓度的考察　取４份各１５　ｇ预处理树
脂装柱，分别加入５．３０，２．６５，１．３２５，０．８８３，０．６６３
ｍｇ·ｍｌ－１上样液。以流速２　ＢＶ·ｈ－１吸附，测吸光度
Ａ１，计算吸附率，结果见表２。
表２　上样液浓度的考察
Ｔａｂ　２　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ａｄｄｉｎｇ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｃｏｎ－
ｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
编号
上样液质量浓度Ｃ０
／ｍｇ·ｍｌ－１
吸附液质量浓度Ｃ１
／ｍｇ·ｍｌ－１
吸附率／％
１　 ５．３０　 １．４２　 ７３．２１
２　 ２．６５　 ０．６１０　 ７７．００
３　 １．３２５　 ０．３８６　 ７０．８６
４　 ０．８８３　 ０．２９９　 ６６．０７
５　 ０．６６３　 ０．２２５　 ６５．９６
　　从表２可知，随着上样液浓度减小，吸附率先增
加后减小，在２．６５　ｍｇ·ｍｌ－１时，吸附率最大，因此选
择２．６５　ｍｇ·ｍｌ－１。
２．５　吸附速率的考察　取５份各１５　ｇ预处理树脂
装柱，加入２．７５　ｍｇ·ｍｌ－１上样液各７３　ｍｌ，分别以１，
２，３，４，５　ＢＶ·ｈ－１速率进行吸附，测流出液吸光度
Ａ１，每一速率重复３次，计算３次吸附液浓度平均
值Ｃ１，再计算吸附率，结果见表３。
表３　吸附速率的考察（ｎ＝３）
Ｔａｂ　３　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｏｎ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｒａｔｅ（ｎ＝３）
吸附速率／ＢＶ·ｈ－１ 吸附液质量浓度Ｃ１／ｍｇ·ｍｌ－１ 吸附率／％
１　 ０．４９８　 ８１．８９
２　 ０．５６１　 ７９．６０
３　 ０．５６８　 ７９．３５
４　 ０．５８１　 ７８．８７
５　 ０．６３１　 ７７．０５
　　从表３可知，吸附速率较快，树脂尚未完全吸
附，黄酮类化合物就已流出树脂柱，吸附率逐渐降
·２９７· 中国医院药学杂志２０１４年５月第３４卷第１０期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ｍａｙ　２０１４，Ｖｏｌ　３４，Ｎｏ．１０
低。吸附速率过慢，吸附率增加的同时吸附时间也
增长，考虑循环周期不能太长，所以吸附速率选择３
ＢＶ·ｈ－１。
２．６　洗脱液浓度的考察　装柱方法同“２．５”项，分别
加入２．４７　ｍｇ·ｍｌ－１上样液各８４　ｍｌ，以流速３　ＢＶ·ｈ－１
吸附，记录流出液体积Ｖ１＝８４　ｍｌ，测吸光度Ａ１。分
别用１０％，３０％，５０％，７０％，９０％的乙醇各１００　ｍｌ以
３　ＢＶ·ｈ－１的流速洗脱，记录解吸液体积Ｖ２＝１００　ｍｌ，
测吸光度Ａ２，计算解吸率，结果见表４。
表４　洗脱液浓度的考察
Ｔａｂ　４　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｅｌｕｔｉｏｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｅｔｈａｎｏｌ
乙醇／％
吸附液质量浓度Ｃ１
／ｍｇ·ｍｌ－１
解吸液质量浓度Ｃ２
／ｍｇ·ｍｌ－１
吸附率／％
１０　 ０．５６４　 ０．９４３　 ７６．２０
３０　 ０．５６５　 １．０２８　 ７６．１６
５０　 ０．６０４　 １．１６　 ７４．５１
７０　 ０．６０７　 １．０１　 ７４．３９
９０　 ０．５９０　 ０．８６３　 ７５．１１
　　从表４可以看出，以解吸率为主要考察指标，在
其他纯化条件相同时，随着洗脱液浓度增加，解吸率
先增大后减小，最佳洗脱液为５０％乙醇。
２．７　洗脱液用量的考察　装柱方法同上，加入２．８６
ｍｇ·ｍｌ－１上样液各７０　ｍｌ，以流速３　ＢＶ·ｈ－１吸附，记
录流出液体积Ｖ１，测吸光度Ａ１＝０．５０６。用５０％乙
醇以流速３　ＢＶ·ｈ－１洗脱，每份收集２０　ｍｌ（一个柱体
积），共收集１０份洗脱液，测吸光度Ａ２，计算解吸液
中总黄酮含量，确定解吸终点，结果见图２。本实验
的Ｃ１＝０．７２２，吸附率为７４．７６％。
图２　洗脱液用量的考察
Ｆｉｇ　２　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　ｅｌｕｔｉｎｇ　ｓｏｌｖｅｎｔ
　　从图２可知，当洗脱液用量为８　ＢＶ时，已基本
将总黄酮洗脱净，所以洗脱液用量选８　ＢＶ。
２．８　上样液ｐＨ值的考察　装柱方法同上，分别加
入２．７９　ｍｇ·ｍｌ－１上样液７２　ｍｌ，其中溶液的ｐＨ 值
分别为１，２，３，４，５，７，９，以流速３　ＢＶ·ｈ－１吸附，记
录流出液体积Ｖ１＝７２　ｍｌ，测吸光度Ａ１。分别用
５０％乙醇各１６０　ｍｌ以流速３　ＢＶ·ｈ－１洗脱，测吸光
度Ａ２，计算解吸率，结果见表５。
如表５所示，综合考虑吸附率和解吸率，选择ｐＨ
为２。这是因为黄酮类化合物含多羟基，呈弱酸性，
故要达到较好的吸附效果，应在酸性条件下进行。
表５　上样液ｐＨ值的考察
Ｔａｂ　５　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｏｎ　ａｄｄｉｎｇ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｐＨ
ｐＨ值
吸附液质量浓度Ｃ１
／ｍｇ·ｍｌ－１
解吸液质量浓度Ｃ２
／ｍｇ·ｍｌ－１
吸附率
／％
解吸率
／％
１　 ０．４９２　 ０．７３４　 ８２．３７　 ５７．６７
２　 ０．５１５　 ０．７５３　 ８１．５４　 ５９．７６
３　 ０．６７８　 ０．７０６　 ７５．７０　 ６０．３６
４　 ０．７６４　 ０．６５９　 ７２．６２　 ５８．７３
５　 ０．９５２　 ０．５９０　 ６５．８８　 ５８．０２
７　 １．２７１　 ０．４８５　 ５４．４４　 ５７．６５
９　 １．６１３　 ０．３３５　 ４２．１９　 ５１．３９
２．９　工艺验证试验　以总黄酮含量为考察指标，在
最佳工艺条件：上样液浓度２．６５　ｍｇ·ｍｌ－１，吸附速
率３　ＢＶ·ｈ－１，洗脱液为５０％乙醇，洗脱液用量８倍
树脂柱体积，ｐＨ＝２条件下进行４次工艺验证试
验，结果见表６。
表６　验证试验结果
Ｔａｂ　６　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｔｅｓｔｓ
编
号
吸附液质量浓度
Ｃ１／ｍｇ·ｍｌ－１
解吸液质量浓度
Ｃ２／ｍｇ·ｍｌ－１
浸膏质
量／ｇ
总黄酮
含量／％
含量平
均值／％
１　 ０．４１４　 ０．５２８　 ０．１２１　 ５２．１９　 ５４．１１
２　 ０．４１４　 ０．５２７　 ０．１１２　 ５６．４６
３　 ０．４０９　 ０．５２７　 ０．１１３　 ５６．６２
４　 ０．４１１　 ０．５２８　 ０．１２４　 ５１．１８
　　表６表明，所确定的工艺条件基本稳定，用
ＤＭ３０１树脂纯化瓦松总黄酮是可行的。
２．１０　树脂重复使用试验　装柱方法同“２．５”项，按
照工艺验证试验方法做６次试验，结果见表７。
表７　树脂的重复使用试验结果
Ｔａｂ　６　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｒｅｐｅａｔｅｄ　ｔｒｉａｌｓ　ｏｆ　ＤＭ３０１　ｒｅｓｉｎ
编号
吸附液质量
浓度Ｃ１／ｍｇ·ｍｌ－１
解吸液质量
浓度Ｃ２／ｍｇ·ｍｌ－１
吸附率
／％
解吸率
／％
１　 ０．３７５　 ０．９９７　 ８５．８８　 ７０．１２
２　 ０．４６７　 ０．９８９　 ８２．４１　 ７２．４９
３　 ０．４４８　 ０．８４７　 ８３．１３　 ６１．５４
４　 ０．５０３　 ０．８１４　 ８１．０５　 ６０．６６
５　 ０．５４７　 ０．７９２　 ７９．４０　 ６０．２６
６　 ０．５６７　 ０．７５８　 ７８．６４　 ５８．０８
　　由表７可得，在最佳工艺条件下，ＤＭ３０１型树
脂的重复使用性能较好，重复使用６次之后，解吸率
只降低了１２％左右。
３　讨论
本实验对５种不同型号大孔吸附树脂进行了瓦
松总黄酮纯化实验，通过对影响大孔吸附树脂吸附
及解吸各种因素的系统研究，初步确定了 ＤＭ３０１
型大孔吸附树脂分离纯化瓦松总黄酮的效果比较理
想，其最佳工艺条件：上样液浓度２．６５　ｍｇ·ｍｌ－１，
药液ｐＨ＝２，吸附速率３　ＢＶ·ｈ－１，用８倍树脂柱体
积５０％乙醇洗脱。方法简便、易行，结果可靠，干浸
膏中总黄酮含量由原来的１６％提高到５４．１１％。
·３９７·中国医院药学杂志２０１４年５月第３４卷第１０期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ｍａｙ　２０１４，Ｖｏｌ　３４，Ｎｏ．１０
参考文献：
［１］　陈进友．瓦松的生育特性及观赏栽培技术［Ｊ］．南方农业，２０１１，
５（８）：１５－１７．
［２］　张芬，祝慧凤，薛莉君，等．瓦松镇痛作用研究［Ｊ］．时珍国医国
药，２０１１，２２（１０）：２４７８－２４７９．
［３］　Ｙｏｏｎ　Ｙ，Ｋｉｍ　ＫＳ， Ｈｏｎｇ　ＳＧ　Ｊａｎ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ
Ｏｒｏｓｔａｃｈｙｓ　Ｊａｐｏｎｉｃｏｓ　Ａ．Ｂｅｒｇ　ｏｎ　Ｈ２Ｏ２－ｉｎｄｕｃｅｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ
ＧＴ－１ｍｏｕｓｅ　ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ　ｎｅｕｒａｎｏｌ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅ［Ｊ］．Ｊ　Ｅｔｈｎｏ－ｐｈａｒ－
ｍａｃｏｌ，２０００，６９（１）：７３－８１．
［４］　Ｓｕｎ　Ｙｏｕｎｇ　Ｃｈｏｉ，Ｍｉ　Ｊａ　Ｃｈｕｎｇ，Ｗｏｏ　Ｄｕｃｋ　Ｓｅｏ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｎｈｉｂｉ－
ｔｏｒｙ　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｏｒｏｓｔａｃｈｙｓ　ｊａｐｏｎｉｃｕｓ　Ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ
ｏｆ　Ｎ－Ｎｉｔｒｏｓｏｄｉｍ　ｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ１［Ｊ］．Ａｇｒｉｃ　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ，２００６，
５４：６０７５－６０７８．
［５］　Ｐａｒｋ　Ｊ　Ｃ，Ｈａｎ　Ｗ　Ｄ，Ｐａｒｋ　Ｊ　Ｒ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｄｒｕｇ
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［收稿日期］２０１３－０９－２２
［基金项目］广东省科技厅项目－广东省中医药科学院联合专项（编号：２０１１Ｂ０３２２００００８）；广东省部产学研结合项目专项资金支助（编号：
２０１１Ａ０９１００００２０）　［作者简介］黄娟，女，硕士，研究方向：新型给药系统，电话：０２０－３９３１８５７１，Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｕａｎｈｕａｎｇｚｉ＠１２６．ｃｏｍ　［通讯作者］丘
小惠，女，研究员，研究方向：中药药效物质基础及成分分析，电话：０２０－３９３１８５７１，Ｅ－ｍａｉｌ：ｑｉｕｘｉａｏｈｕｉ＠ｇｚｈｔｃｍ．ｅｄｕ．ｃｎ
番泻叶提取液中番泻苷Ａ、番泻苷Ｂ的稳定性考察
黄娟，张靖，徐文，蔡业峰，丘小惠　 （广州中医药大学第二临床医学院，广东 广州５１０００６）
［摘要］　目的：考察不同因素对番泻叶提取液中番泻苷Ａ、番泻苷Ｂ稳定性的影响，为番泻叶制剂开发与生产提供实验依据。
方法：应用经典恒温法考察温度、溶剂、时间对番泻苷 Ａ和番泻苷Ｂ稳定性的影响，采用 ＨＰＬＣ法测定样品中两种成分的浓
度，并计算相关参数。结果：番泻叶提取液在长时间受热过程中，番泻苷Ａ与番泻苷Ｂ的含量明显降低，随着温度的升高，溶
剂中乙醇含量的增多，两种成分降解速率均增大，且番泻苷Ｂ的降解速率更大。当提取液溶剂为７０％乙醇，在８０℃水浴中保
持１０　ｈ后，番泻苷Ａ降解了５１．６３％，番泻苷Ｂ降解了９３．０６％。结论：番泻苷 Ａ和番泻苷Ｂ在高温高醇条件下较不稳定，且
番泻苷Ｂ较番泻苷Ａ更易降解。
［关键词］　番泻苷Ａ；番泻苷Ｂ；稳定性；经典恒温法
［中图分类号］Ｒ９４３　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００１－５２１３（２０１４）１０－０７９４－０４　ＤＯＩ：１０．１３２８６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｈｉｎｈｏｓｐｐｈａｒｍａｃｙｊ．２０１４．１０．０５
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｓｔａｂｉｌｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｓｅｎｎｏｓｉｄｅ　Ａ　ａｎｄ　ｓｅｎｎｏｓｉｄｅ　Ｂ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　Ｓｅｎｎａｅ　ｆｏｌｉｕｍ
ＨＵＡＮＧ　Ｊｕａｎ，ＺＨＡＮＧ　Ｊｉｎ，ＸＵ　Ｗｅｎ，ＣＡＩ　Ｙｅ－ｆｅｎｇ，ＱＩＵ　Ｘｉａｏ－ｈｕｉ（Ｔｈｅ　Ｓｅｃｏｎｄ　Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｕａｎ－
ｇｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５１０００６，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｓｔａｂｉｌｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｓｅｎｎｏｓｉｄｅ　Ａ　ａｎｄ　ｓｅｎｎｏｓｉｄｅ　Ｂ　ｉｎ　ｔｈｅ
ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｓｅｎｎａｅ　ｆｏｌｉｕｍ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ｔｈｅ　ｓｔａｂｉｌｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｕｎｄｅｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｓｏｌｖｅｎｔ
ｏｒ　ｔｉｍｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｃｌａｓｓｉｃａｌ　ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｓｅｎｎｏｓｉｄｅ　Ａ　ａｎｄ　ｓｅｎｎｏｓｉｄｅ　Ｂ
ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＨＰＬＣ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｌｅｖａｎｔ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ．ＲＥＳＵＬＴＳ　Ｓｅｎｎｏｓｉｄｅ　Ａ　ａｎｄ　ｓｅｎｎｏｓｉｄｅ　Ｂ　ｗｅｒｅ　ｖｅｒｙ
ｕｎｓｔａｂｌｅ　ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ　ｈｉｇｈ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（８０℃），ｅｓｐｅｃｉａｌｙ　ｉｎ７０％ｅｔｈａｎｏｌ，ｗｈｅｒｅ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ
ｄｅｇｒａｄｅｄ　ｂｙ　５１．６３％ａｎｄ　ｂｙ　９３．０６％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　Ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｆａｃｔｏｒｓ，ｎａｍｅｌｙ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｓｏｌｖｅｎｔ，ｈａｖｅ
ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｓｅｎｎｏｓｉｄｅ　Ａ　ａｎｄ　ｓｅｎｎｏｓｉｄｅ　Ｂ，ｗｈｉｃｈ　ｐｒｏｖｉｄｅｄ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｂａｓｉｓ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ
Ｆ．ｓｅｎｎａｅ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：ｓｅｎｎｏｓｉｄｅ　Ａ；ｓｅｎｎｏｓｉｄｅ　Ｂ；ｓｔａｂｉｌｉｔｙ；ｃｌａｓｓｉｃａｌ　ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ　ｍｅｔｈｏｄ
·４９７· 中国医院药学杂志２０１４年５月第３４卷第１０期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ｍａｙ　２０１４，Ｖｏｌ　３４，Ｎｏ．１０