全 文 ：黄花瓦松提取物抑菌活性部位研究
王翔飞 ,赵文斌 ,成玉怀 ,朱 芸 ,谭 勇＊　(新疆特种植物药资源重点实验室 /石河子大学药学院 ,新疆石河子 832002)
摘要　[目的 ]比较黄花瓦松不同提取部位的体外抑菌作用。 [方法 ]以黄花瓦松为试材 ,采用滤纸片扩散法及二倍稀释法比较黄花瓦
松不同提取部位的体外抑菌作用。 [结果 ]不同供试菌种对黄花瓦松提取物的敏感性不同 , 其中大肠杆菌最敏感 , 金黄色葡萄球菌不敏
感。黄花瓦松 95%乙醇提取物和石油醚提取物对大肠杆菌的抑菌效果明显 , 其抑菌圈均大于 15mm,且石油醚提取物的抑菌效果优于
95%乙醇提取物。黄花瓦松 95%乙醇提取物和石油醚提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌效果均不明显。黄花瓦松石油醚提取物对大肠
杆菌的最小抑菌浓度为 7.9g/L,对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为 31.3g/L。 [结论]该研究为黄花瓦松抑菌活性部位的提取分离
提供了试验依据。
关键词　黄花瓦松;提取物;抑菌活性
中图分类号　S567.23+9　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2010)25-13675-02
PrimaryExplorationonAntibacterialActivePartofExtractfromOrostachysspinosa(L.)C.A.Mey.
WANGXiang-feietal　(KeyLaboratoryofXinjiangEndemicPhytomedicineResources, MinistryofEducation/PharmacyCollege, Shihezi
University, Shihezi, Xinjiang832002)
Abstract　 [ Objective] TheresearchaimedtocomparetheinvitroantibacterialactionofdiferentextractfractionsfromOrostachysspinosa
(L.)C.A.Mey.[ Method] WithO.spinosaastestedmaterial, theinvitroantibacterialactionofitsdiferentextractfractionswerecompared
byusingfilterpaperdifusionanddoubledilutionmethods.[ Result] ThesensitivitiesofdiferenttestedstrainstoextractfromO.spinosawere
diferent, amongwhichEscherichiacoliwasmostsensitiveandStaphylococcusaureuswasinsensitive.Theantibacterialeffectsof95%ethanol
extractandpetroleumetherextractfromO.spinosaonE.coliwereobvious, theirdiametersofinhibitionzonesexceeded15mmandtheanti-
bacterialefectofpetroleumetherextractwassuperiortothatof95%ethanolextract.Theantibacterialefectsof95%ethanolextractandpe-
troleumetherextractfromO.spinosaonS.aureuswerenotobvious.Theminimalinhibitoryconcn.ofpetroleumetherextractfromO.spinosa
onE.coliandS.aureuswere7.9and31.3g/Lresp.[Conclusion] Thisresearchprovidedexperimentalbasisforextractionandseparationof
antibacterialactivepartfromO.spinosa.
Keywords　 Orostachysspinosa(L.)C.A.Mey;Extract;Antibacterialactivity
基金项目　石河子大学高层次人才启动项目(RCZX200666)。
作者简介　王翔飞(1979-),女 ,四川泸州人 ,讲师 ,从事天然产物化学
和药用植物资源研究。 ＊通讯作者 ,副教授 ,从事植物资源
研究工作。
收稿日期　 2010-05-17
　　黄花瓦松(Orostachysspinosa(L.)C.A.Mey.)为景天
科瓦松属(Orostachys)二年生肉质草本植物 ,又名昨叶荷草 、
向天草 ,为我国传统用药 [ 1] 。其性味酸 、苦 、凉 ,归肝 、肺 、脾
经 ,具有清热解毒 、凉血止血 、利湿消肿 、抗菌消炎等功效 ,中
国药典对其进行了收录。瓦松属植物全世界约有 13种 ,主
要分布于温带地区 ,我国约有 10种 ,在新疆也有着广泛的分
布(主要为黄花瓦松和小苞瓦松)[ 2] 。笔者以黄花瓦松为研
究对象 ,采用滤纸片扩散法及二倍稀释法 ,比较其不同提取
部位的体外抑菌作用 ,为进一步开发利用提供理论依据。
1　材料与方法
1.1　材料与仪器
1.1.1　材料。牛肉蛋白胨固体培养基 、牛肉蛋白 、胨液体培
养基 、马铃薯固体培养基 、0.9%生理盐水(自配);石油醚 ,氯
仿 、乙酸乙酯 , 95%乙醇 ,均为分析纯;黄花瓦松采自新疆农
九师 165团 ,阴干备用;金黄色葡萄球菌(Staphylococusau-
reus)、大肠杆菌(Escherichiacoli)均由石河子大学医学院提
供 。
1.1.2　仪器。水浴锅(SB-1000上海爱明仪器有限公司)。
1.2　试验方法
1.2.1　瓦松提取物的制备。黄花瓦松全草粉碎机粉碎后过
60目分样筛 ,称取 150 g放入预先叠好的滤纸筒中 ,再将装
有瓦松粉末的滤纸筒小心放入索氏提取器中 ,分别用石油
醚 、氯仿 、乙酸乙酯 、95%乙醇提取 ,残渣用蒸馏水提取 ,各溶
剂提取物经减压浓缩干燥后 ,制成 1 g/ml的试液 ,放入冰箱
中冷藏备用。
1.2.2　培养基的制备 [ 3-4] 。 ①牛肉蛋白胨液体培养基(细
菌液体培养用):牛肉膏 5g, NaCl5 g,蛋白胨 10 g,蒸馏水定
容至 1 000ml, pH值 7.2。②牛肉蛋白胨固体培养基:在配好
的营养肉汤中加入 2%的琼脂即得。
1.2.3　菌种的活化和复壮。将金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌
分别接入装有牛肉膏蛋白胨固体培养基的试管斜面中 , 37
℃培养 24 h,使菌种活化。将活化好的菌种转接到准备好的
培养基平板中 37℃培养 24h,使菌种复壮 。
1.2.4　菌悬液的制备。在无菌条件下 ,用接种环挑取活化
后的菌体 ,放入 50 ml无菌生理盐水中振荡摇匀 ,制成菌
悬液。
1.2.5　抑菌效力的测定。
1.2.5.1　滤纸片法测定各粗提物抑菌效果。选择吸水性强
的滤纸 ,用打孔器打成若干直径为 6 mm的圆形滤纸片 ,装入
准备好的试管中 , 121 ℃湿热灭菌 30 min后备用。吸取 0.1
ml已稀释到一定浓度的各种菌液 ,将其均匀地涂布于平板表
面 ,正置在培养箱 1 h(37 ℃)。 1 h后 ,再用无菌镊子夹取浸
有上述不同提取液并挥发干的滤纸片贴于平板中 ,每个培养
基平板中 3张(其中 1片为用浸有提取溶剂并挥干的滤纸片
作为阴性对照),以蒸馏水浸润后的滤纸片作为空白对照。
在 37 ℃倒置培养 48 h,观察抑菌情况 ,并测量抑菌圈
直径 [ 4] 。
1.2.5.2　最低抑菌浓度的测定。采用试管稀释法测定最低
抑菌浓度 (MIC)。用丙酮按两倍稀释法配制 500.00、
250.00、125.00、62.50、31.25、15.63、7.82、3.91 g/L8个不同
浓度提取液系列。将配制好的液体培养基按每试管 9.0 ml
分装 , 121 ℃湿热灭菌 ,待冷却后 ,准确吸取 1.0 ml上述 8个
安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2010, 38(25):13675-13676 责任编辑　朱新秀　责任校对　李岩
系列试液 ,加入到液体培养基试管中 ,即得到 8个不同浓度
的提取液系列培养基。每 1系列培养基接种一种菌 ,每个浓
度 3次平行 ,另取一列以丙酮 、无菌蒸馏水以及不接种任何
试验菌做为空白对照 ,置于 37℃下恒温培养 ,定时观察生长
情况 。将提取液的接种系列和不接种任何试验菌的空白系
列对照 ,两者透明度相同的最低浓度即为提取液的最低抑菌
浓度(MIC)[ 5] 。
2　结果与分析
2.1　黄花瓦松不同溶剂提取物的抑菌作用　选用蒸馏水 、
95%乙醇 、乙酸乙酯 、氯仿石油醚 5种提取液对金黄色葡萄
球菌 、大肠杆菌做抑菌试验 , 比较各种提取物对上述两种细
菌的作用(表 1)。
表 1　不同溶剂提取物的抑菌效果
Table1　Antibacterialeffectofdiferentsolventextract
供试菌种Bacteriatested
阴性对照Negativecontrol
阳性对照Positivecontrol
抑菌圈直径Diameterofinhibitionzone∥mm
蒸馏水提取物Extractsfromdistiledwater
95%乙醇提取物
95% ethanolextracts
乙酸乙酯提取物Extractsfromethylacetate
氯仿提取物Chloroformextracts
石油醚提取物Extractsfrompetroleumether
大肠杆菌 未见抑菌圈 未见抑菌圈 14.4 16.9 13.0 14.8 17.5
Escherichiacoli
金黄色葡萄球菌 未见抑菌圈 未见抑菌圈 8.3 10.0 未见抑菌圈 9.6 11.0
Staphylococcusaureus
　　从表 1中可见 ,采用不同溶剂提取所得提取物抑菌效果
不同:95%乙醇提取物和石油醚提取物对大肠杆菌的抑菌效
果明显 ,抑菌圈均大于 15mm,其中石油醚提取物的抑菌效果
优于 95%乙醇提取物 ,在该试验内确定石油醚提取物为最佳
抑菌粗提液;各提取液对金黄色葡萄球菌的抑制效果均不
明显。
2.2　最低抑菌浓度(MIC)　由表 2可知 ,黄花瓦松石油醚
提取物对大肠杆菌较强的抑菌作用 ,其 MIC值为 7.9 g/L;对
金黄色葡萄球菌的抑制作用较弱 ,其 MIC值为 31.3 g/L。
表 2　黄花瓦松提取物最小抑菌浓度(MIC)的确定
Table2　TheminimumantibacterialconcentrationofextractsfromOrostachysspinosa
供试菌种
Bacteriatested
丙酮对照
Acetonecontrol
蒸馏水对照
Distiledwatercontrol
提取液浓度 Concentrationofextractsg∥g/L
500 250 125 62.5 31.3 15.7 7.9 3.95
大肠杆菌 + + - - - - - - + +
Escherichiacoli
金黄色葡萄球菌 + + - - - - + + + +
Staphylococcusaureus
　注:“ +”表示试管液浑浊 ,有菌生长;“ -”表示试管液透明 ,无菌生长。
　Note:“ +”showsthatthetubeliquidisturbidwithbacteria;“ -”meansthatthetubeliquidisclearwithoutbacteria.
3　结论与讨论
试验结果表明 ,石油醚提取物对大肠杆菌的抑菌效果最
为明显 ,是最佳提取物 ,但各提取液对金黄色葡萄球菌的抑
制效果均不明显;不同试验菌对该提取物的敏感性不同 ,其
中大肠杆菌最敏感 ,金黄色葡萄球菌不敏感;最佳提取物对
大肠杆菌的最小抑菌浓度为 7.9 g/L,对金黄色葡萄球菌的
抑制作用较弱 ,其 MIC值为 31.3 g/L。黄花瓦松抑菌活性物
最佳提取工艺和系统分离有待进一步研究。
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