全 文 ：菥 药材中异牡荆苷的分离鉴定及指纹图谱研究
庞 赛1， 王立升2， 史 新2， 段 曼2
（1.广西中医学院药学院， 广西 南宁 530001； 2.广西大学化学化工学院， 广西 南宁 530004）
摘 要：采用高效半制备液相色谱法分离，并以 13C 谱法(13C-NMR)、1H谱法(1H-NMR )、质谱法(Ms)、紫外光谱法(UV)确定结构；
采用 HPLC 梯度洗脱进行色谱分离，对不同产地的 11 批菥蓂药材指纹图谱的相似度进行比较分析。 结果表明，分离得到异牡荆苷
纯度>98%（面积归一化法）；各批药材共建立了 17 个共有峰，不同产地的菥蓂药材指纹图谱相似度良好。 说明高效半制备液相色
谱法制备异牡荆素方法简单、高效，指纹图谱分析方法稳定性、精密度、重现性较好，用于菥蓂的质量评价切实可行。
关键词：菥蓂； 指纹图谱； 异牡荆苷； HPLC
中图分类号：R282.5 文献标识码：A 文章编号：1004-874X（2012）01-0105-02
Isolation and purification of isovitexin and HPLC
fingerprint of Thlaspi arvense Linn
PANG Sai1， WANG Li-sheng2， SHI Xin2， DUAN Man2
（1.Faculty of Pharmacy, Guangxi Traditional Chinese Medical University, Nanning 530001, China;
2.School of Chemistry&Chemical Engineering, Guangxi University, Nanning 530004, China）
Abstract: Semi-preparative HPLC was used to isolate and purify the isovitexin from Thlaspi arvense. Its chemical structures was
elucidated by 13C-NMR、1H-NMR、Ms、UV; 11 batches of Thlaspi arvense samples from different sources were analysed by HPLC gradient
elution method. The results showed that the purity of isovitexin reached 98% (by Area normalization method), 17 common peaks were
selected in chromatograms, and all the common peaks were separated effectively, 11 batches of Thlaspi arvense fingerprint had good
similarity. The results indicated that semi-preparative HPLC was a simple quick and efficient method to prepare isovitexin. Fingerprint
analytical method, being with good precision and repeatability, can be useful in the quality control of Thlaspi arvense.
Key words: Thlaspi arvense; fingerprint; isovitexin; HPLC
菥蓂为双子叶植物十字花科菥蓂（Thlaspi arvense Linn）
的全草，又叫遏蓝菜、苦芥子、败酱草、瓜子草、野榆树、菥
目，分布在我国大部分地区 [1]，主产于江苏、甘肃、安徽等
地，具有清肝明目，和中益气，主治目赤、肿痛、泪出，也常
用于治疗肾炎、子宫内膜炎[2-3]。 另有国外文献报道菥蓂具
有抗毒素、抗菌的作用 [4]，但对菥蓂药材的质量研究未见
报道。 异牡荆苷为菥蓂药材中的主要黄酮类化合物，本文
采用高效半制备液相色谱法从菥蓂药材中分离制备异牡
荆苷，并对 11 个不同产地的菥蓂药材指纹图谱进行了研
究，以期为进一步综合开发利用菥蓂药材，为其鉴别、质
量评价及质量标准的制定提供依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试 11 批菥蓂药材来自甘肃、河南、安徽、山东、江
苏，部分由广西花红药业提供，经广西中医学院辛宁教授
鉴定为十字花科菥蓂 Thlaspi arvense L.的全草。
试验试剂包括乙腈（美国 Fisher 公司，色谱纯）、液相
用水为娃哈哈纯净水（杭州娃哈哈公司）、甲醇（天津四友
生物医学技术有限公司，色谱纯）、冰乙酸（成都科龙化工
制剂厂，分析纯）。
试验仪器包括 UC-3282 型半制备高效液相色谱仪(北
京优联电工)、威玛龙色谱工作站、UV-2550 型紫外分光光
度计（日本岛津公司）、X-4 显微熔点仪（上海精密科学仪
器有限公司）、Bruke600MHz 超导核磁共振仪、Varia-230
质谱仪、KQ-50B 型超声波清洗器 （昆山市超声仪器有限
公司）、EL电子天平（常州市天之平仪器设备有限公司）。
1.2 试验方法
1.2.1 预试验 分别考察回流、超声、冷浸 3 种提取方法，
以及对不同提取溶剂 （甲醇、20%甲醇、50%甲醇、80%甲
醇、50%乙醇）的提取进行考察，最终确定在 50%甲醇超声
法所得到图谱信息比较丰富。 同时考察了甲醇-水、甲醇-
0.4%冰乙酸、 乙腈-水、 乙腈-0.4%冰乙酸 4 个流动相系
统，确定在乙腈-0.4%冰乙酸流动相系统下色谱峰峰形及
分离度较好。
1.2.2 内含物提取分离 取菥蓂粉末 30 g， 加入 600 mL
50%甲醇，超声提取 60 min，同法提取数次，过滤，合并滤
液，滤液分别用石油醚、乙酸乙酯萃取。取乙酸乙酯萃取层
浸膏，用适量甲醇溶解，0.45 μm 微孔滤膜过滤（滤液为供
试液）。 半制备色谱条件： 苏州环球-C18 半制备色谱柱
（250 mm×10 mm，10 μm）， 流动相为甲醇-0.4%冰乙酸
（25∶75）， 流速 3.0 mL/min， 检测波长 273 nm， 进样量 2
mL。 收集馏分，减压浓缩。
收稿日期：2011-10-14
基金项目：广西自然科学基金重点项目（2010GXNSFD013040）；
广西科技攻关项目（桂科攻 11107010-3-5）
作者简介：庞赛（1987-），女，在读硕士生，E-mail: pang0807@126.
com
通讯作者：王立升（1965-），男，教授， E-mail:w_lsheng@163.com
蓂
广东农业科学 2012 年第 1 期 105
DOI:10.16768/j.issn.1004-874x.2012.01.056
0 8.41 16.81 25.22 33.62 42.03 50.43 58.84
时间（min）
图 3 11 批菥蓂药材指纹图谱
表 1 梯度洗脱条件
时间（min）
0
10
30
60
乙腈（A，%）
5
15
25
50
0.4%冰乙酸（B，%）
95
85
75
50
1.2.3 指纹图谱分析色谱条件 苏州环球 C18 分析色谱
柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈（A）-0.4%冰乙
酸（B）梯度洗脱（梯度条件见表 1）。 流速 0.8 mL/min，检测
波长 273 nm， 进样量 20 μL。 在上述色谱条件下进样分
析，记录 60 min色谱图。
1.2.4 对照溶液制备 精密称取 4.0 mg 异牡荆苷对照
品，加 50 %甲醇定容于 10 mL 容量瓶中摇匀，0.45 μm 微
孔滤膜过滤。
1.2.5 精密度、重复性和稳定性试验 （1）精密度。取同一
份供试溶液，在同样的色谱条件下连续重复进样 5 次，考
察色谱峰相对保留时间的一致性。 （2）重复性。 精密称取
5份同一供试溶液，检测该方法的重复性。 （3）稳定性。 将
供试溶液室温放置，按 1.2.2 色谱条件，分别在 0、2、4、6、
8、12、24 h进样分析，检测该方法的稳定性。
2 结果与分析
2.1 异牡荆素结构鉴定
对获得的黄色粉末进行结构鉴定。mp226~228℃。UV
λmax：273，340 nm；ESI -MS m/z：431 [M-H] - ；1H -NMR
（600 MHz，DMSO）：δ 13.55 （1H，s，5-OH， 加 D2H消失），
7.92 （2H，d，J=9.0 Hz，2-H，6-H），6.92 （2H，d，J=9.0 Hz，
3 -H，5 -H），6.77 （1H，s，8 -H），6.50 （1H，s，3 -H），4.86
（1H，d，J=9.6 Hz ，glucosyl 1-H），3.79~3.35 （m，glucosyl-
H）；1C-NMR（150 MHz，DMSO）δ 163.65（C-2），102.88（C-
3），182.05 （C-4），161.31 （C-5），109.00 （C-6），161.31 （C-
7），93.80 （C-8），156.40 （C-9），103.43 （C-10），121.23 （C-
1），128.59 （C-2，6），116.15 （C-3，5），160.78 （C-4），
79.06（C-1），73.18 （C-2），70.32 （C-3），70.71 （C-4），
81.60（C-5），61.59（C-6）。 以上数据与文献[8]中的异牡
荆苷数据基本一致，鉴定化合物为异牡荆苷（经面积归一
法测得纯度>98%）。
2.2 不同产地菥蓂药材指纹图谱的建立
2.2.1 样品测定 精密量取对照溶液和供试溶液各 20
μL，按 1.2.3的色谱条件记录色谱图（图 1）。从图 1可以看
出，提取所得的内含物中物质为异牡荆苷。
2.2.2 11 批菥蓂药材指纹图谱测定 对 11 批不同产地
菥蓂药材进行色谱分析，并用“中药色谱指纹图谱相似度
评价系统 2004A版” 建立了菥蓂药材的共有模式色谱图
（图 2）， 共标定了 17个共有峰 （17个峰的相对保留时间
RSD<2.02%），其中 8号峰为异牡荆素（S）。 从图 2 可以看
出 ， 各峰的相对保留时间分别为 0.125、0.138、0.180、
0.634、0.808、0.905、0.939、1.000、1.039、1.052、1.101、1.145、
1.375、1.425、1.489、1.582、1.819 min，11 批不同产地菥蓂
药材指纹图谱叠加见图 3。
2.2.3 不同产地菥蓂药材相似度分析 将各产地药材的
图谱与共有模式进行相似度分析发现，不同产地菥蓂药材
相似度均在 0.90以上，说明相似度良好。
2.3 方法学检验
研究结果表明， 共有峰的相对保留时间 RSD<3%，说
明仪器精密性良好 。 HLPC 检测色谱峰相对保留时间
RSD<3%，说明分析方法重复性符合要求。 各共有峰相对
保留时间 RSD<1.72 %，相对峰面积的 RSD<2.56 %，表明
样品在 24 h内稳定。
3 结论与讨论
采用半制备高效液相色谱法从菥蓂药材中分离得到
A
1
0 10 20 30 40 50 60
B
1
时间（min）
A：对照品； B：供试品
图 1 菥蓂药材 HPLC 图谱
0 10 20 30 40 50 60
异牡荆素
2
3
4
（S）
5 6 7
91011 12
13
14
15
16 17
0 8.41 16.81 25.22 33.62 42.03 50.43 58.84
时间（min）
图 2 菥蓂药材的对照指纹图谱
1
（下转第 129页）
106
高纯度的异牡荆苷，研究了分离异牡荆苷的一种新工艺。
半高效制备液相色谱法从天然产物中分离制备化合物，
方法简单易行，且操作简单，效率较高，能够得到高纯度
的单体化合物， 是中药材中活性成分分离和研究的理想
方法。
预试验结果表明，50 %甲醇超声 1 h的条件下所得到
的图谱信息比较丰富，并且乙腈-0.4%冰乙酸流动相系统
下色谱峰峰形及分离度较好。 供试品在紫外分光光度计
下进行全波长扫描，经比较在 273 nm 的波长下色谱峰出
峰情况较好。
对不同产地的 11 批药材进行指纹图谱分析发现，标
定的 17 个共有峰中，8 号峰为异牡荆苷， 为图谱中最大
峰， 不同产地指纹图谱之间相似度良好， 相对保留时间
RSD<2.02%，所含成分基本相同，但各成分的含量存在差
异，相对峰面积比值差别较大，考虑药材受环境因素的影
响较大，有必要对菥蓂药材的生长环境进行考察。
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