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研
究
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HPLC法测定不同产地山里红中表儿茶素含量*
★ 邵峰＊＊ 谷丽菲 刘荣华＊＊＊ 黄慧莲 陈慧娟 江东龙 (江西中医药大学现代中药制剂教育部重点
实验室 江西 南昌 330004)
摘要:目的:比较不同产地山里红中表儿茶素的含量。方法:采用 HPLC法，测定不同产地山里红中表儿茶素的含量。色谱柱
YMC － Triart C18(250mm ×4． 6mm，5μm);流动相:乙腈 ～ 0． 4%磷酸溶液，梯度洗脱，流速 1mL /min，检测波长:280nm，柱温
25℃。结果:山里红中表儿茶素含量在 0． 04% ～ 0． 21%范围内，其中，山东省青州市出产的山里红含量最高，山西省运城市绛
县出产的山里红含量最低。结论:本研究为建立山里红质量控制方法提供参考。
关键词:山里红;HPLC;表儿茶素;含量测定
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标识码:A
山楂为蔷微科山楂属植物山里红(Crataegus
pinnatifida Bge． var． major． N． E． Br．)或山楂(Cra-
taegus pinnatifida Bge．)的干燥成熟果实，具有消食
健胃、行气散瘀，等功效，临床常用于治疗肉食积滞、
胃脘胀满、泻痢腹痛、瘀血经闭，等病症［1］。作为黄
烷醇类化合物，表儿茶素具有保护心肌［2］、降血
脂［3，4］以及对抗胆酸引起的肝细胞凋亡［5］，等药效
作用。鉴于此，本研究采用 HPLC法，对不同产地山
里红中的表儿茶素进行含量测定，为建立山里红质
量控制方法提供参考。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 Agilent 1260 型高效液相色谱仪(美国，
VWD检测器，1260 化学工作站)，BT25S 型十万分
之一电子天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公
司)，BT5S型万分之一电子天平(赛多利斯科学仪
器(北京)有限公司)，N － 1001 型旋转蒸发器(东京
理化器械(株)独资工厂)，KQ － 300VDB 型双频数
控超声清洗器(江苏省昆山市超声仪器有限公司)。
1． 2 试药 表儿茶素对照品(批号:110878 －
200102)均购自中国药品生物制品检定所。乙腈
(色谱纯)购自美国 Dikma公司，磷酸(分析纯)购自
西陇化工股份有限公司，双蒸水(实验室自制)。
山里红采集时间为 2012 年 11 月，所有药材经
江西中医药大学刘荣华教授鉴定，保存于江西中医
药大学标本馆，见表 1。
表 1 样品来源
编号 产地 编号 产地
1 山东省潍坊市临朐县 8 山东省泰安市岱岳区
2 山东省青州市 9 辽宁省海城市大桥县
3 山东省昌邑市 10 河北省迁安市
4 山东省淄博市沂源县 11 河北省承德市兴隆县
5 山东省临沂市平邑县 12 河北省邢台市清河县
6 山东省临沂市沂水县 13 河南省新乡市新乡县
7 山东省临沂市蒙阴县 14 山西省运城市绛县
2 方法与结果
2． 1 对照品溶液制备 精密称取表儿茶素 6． 5mg，
置于 10mL 容量瓶中，加入 8%甲醇溶液定容至刻
度，得到浓度为 0． 65mg /mL 的对照品母液，经
0. 22μm微孔滤膜过滤，备用。
2． 2 供试品溶液制备 称取干燥的山里红样品
100g，经粉碎，加入 70%的乙醇 500mL，在 70℃条件
下回流提取 3 次，每次 1h，经过滤，合并滤液，减压
回收溶剂，得到山里红总提取物。取一定量的的山
里红总提取物置于 10mL容量瓶中，加甲醇，超声提
取 30min，放置室温，用甲醇定容至刻度，摇匀，经
0. 22μm微孔滤膜，得到供试品溶液。
2． 3 色谱条件 色谱柱 YMC － Triart C18(250mm ×
4． 6mm，5μm);流动相:乙腈(A)～ 0． 4%磷酸溶液
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江西中医药 2014 年 6 月第 6 期总 45 卷第 378 期
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基金项目:国家自然科学基金项目(81260638);江西省自然科学基金项目(20132BAB205083)。
作者简介:邵峰(1980 －)，男，硕士，讲师。研究方向:中药质量评价。Tel:(0791)871198658，E － mail:shaofeng0729@ 163． com。
通信作者:刘荣华(1964 －)，男，博士，教授，硕士生导师。Tel:(0791)87119011，E － mail:rhliu@ 163． com。
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(B)，梯度洗脱，0 ～ 10min，8% ～ 15% A;10 ～ 30min，
15% ～15%A。流速 1mL /min，检测波长 280nm，柱
温 25℃，进样量 20μL。理论塔板数大于 3000，见图
1。
A．供试品;B．对照品;1．表儿茶素
图 1 山里红 HPLC色谱图
2． 4 方法学考察
2． 4． 1 线性关系考察 精密吸取溶液浓度分别为
0． 00166，0． 0166，0． 083，0． 166，0． 83，1． 00mg /mL表
儿茶素对照品溶液，按“2． 3”项下色谱条件测定峰
面积。以进样浓度(mg /mL)为横坐标(X)，色谱峰
面积为纵坐标(Y)，得标准曲线，建立表儿茶素回归
方程，即 Y = 11741X － 12． 712，r = 0． 9993，在
0. 00166 ～ 1． 00mg /mL范围内呈良好线性关系。
2． 4． 2 精密度试验 精密吸取表儿茶素对照品溶
液 20μL，按“2． 3”项下色谱条件，连续进样 6 次，计
算峰面积的 ＲSD为 0． 043%，表明仪器精密度良好。
2． 4． 3 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，按
“2． 2”项方法制备供试品溶液及“2． 3”项下色谱条
件，分别在第 0，2，4，6，8，10h 间隔进样 20μL，测得
表儿茶素峰面积积分值，计算供试品 ＲSD 为
1. 92%，表明样品在 10h内稳定性良好。
2． 4． 4 重复性试验 取同一产地山里红样品，按
“2． 2”项方法制备供试品溶液 6 份及“2． 3”项下色
谱条件，进样 20μL，测得表儿茶素的峰面积积分值，
计算供试品 ＲSD为 2． 51%，表明样品制备方法重复
性良好。
2． 4． 5 加样回收试验 取已知表儿茶素含量的山
东省临沂市沂水县产山里红药材 6 份，每份 1． 0g，
精密称定，按“2． 2”项方法制备供试品溶液，加入适
量的表儿茶素对照品，按“2． 3”项下色谱条件进样
20μL，测定表儿茶素含量并计算回收率，见表 2。
2． 4． 6 样品含量测定 精密吸取已制备的不同产
地山里红待测溶液各 20μL，注入液相色谱仪，测定
表儿茶素峰面积积分值，利用外标法分别计算表儿
茶素的含量，结果表明:山里红中表儿茶素含量在
0． 04% ～0． 21%范围内，其中，山东省青州市出产的
山里红含量最高，山西省运城市绛县出产的山里红
含量最低。见表 3。
表 2 表儿茶素加样回收率测定
样品中
含量 /mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
ＲSD
(%)
0． 0512 0． 0440 0． 0962 102． 0
0． 0477 0． 0415 0． 0900 101． 0
0． 0549 0． 0440 0． 0994 100． 0
0． 0432 0． 0560 0． 1013 103． 8
0． 0567 0． 0450 0． 1034 103． 8
0． 0550 0． 0500 0． 1046 99． 17
101． 6 1． 90
表 3 不同产地山里红中表儿茶素含量测定(n = 3)
样品
编号 平均含量
ＲSD /% 样品
编号 平均含量
ＲSD /%
1 0． 12 1． 79 8 0． 17 1． 01
2 0． 21 2． 29 9 0． 05 2． 35
3 0． 06 1． 84 10 0． 14 1． 53
4 0． 06 1． 64 11 0． 05 2． 12
5 0． 09 1． 19 12 0． 05 2． 90
6 0． 07 1． 73 13 0． 12 1． 57
7 0． 13 1． 56 14 0． 04 2． 02
3 讨论
生物体内的氧自由基在心血管疾病的发生与发
展方面起着重要的作用。本课题组曾研究发现，山
楂叶中的表儿茶素对于羟自由基和过氧化氢具有较
强的清除活性［6］。鉴于此，本研究在以往相关文献
报道的基础上［7 － 9］，采用 HPLC 定量分析技术，建立
山里红中表儿茶素含量测定的方法。该方法操作简
单，准确，重复性好，易于推广。
参考文献
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(收稿日期:2014-03-26)编辑:曾文雪
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JIANGXI JOUＲNAL OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE