全 文 ：不同栽培居群菘蓝叶中 5种有机酸成分的含量差异*
王　寅　尹　茶△　乔传卓　刘　盛
摘要　目的:考察不同栽培居群菘蓝叶 5种有机酸成分的含量差异。 方法: 采用高效毛细管电泳法同时测定 12个不同栽培
居群菘蓝叶中抗内毒素活性成分邻氨基苯甲酸、水杨酸、丁香酸、苯甲酸、 3-( 2-羧苯基 ) -4( 3H) -喹唑酮的含量。 结果:不同栽
培居群菘蓝叶的 5种有机酸含量差别十分显著 ,不同居群菘蓝叶的邻氨基苯甲酸含量为 20. 35～ 379. 94μg /ml;水杨酸为
14. 98～ 40. 37μg /ml;丁香酸为 2. 29～ 12. 23μg /ml;苯甲酸为 7. 85～ 69. 50μg /m l; 3-( 2-羧苯基 ) -4( 3H) -喹唑酮为 10. 05～
37. 74μg /ml。 结论:菘蓝在居群间存在明显的化学成分含量差异 ,这可能是导致药材品质不同的原因之一。
关键词　菘蓝 ;活性成分 ;毛细管电泳法 ,高效
中国图书资料分类法分类号　 R 282. 710. 5
Content difference of f ive organic acids inFolium Isat id is of different
cultivation populations
Wang Yin, Yin Cha, Qiao Chuanzhuo, Liu Sheng ( Department of Pharmacognosy , Colleg e of
Pharmacy , Second Military Medical U niversity , Shanghai, 200433)
ABSTRACT　 Objective: To study content di fference o f 5 o rganic acids in Folium Isat idis f rom dif ferent
cultiva tion popula tions. Methods: Anth rani lic acid, salicylic acid, syringic acid, benzoic acid and 3-( 2-ca r-
boxyphenyl )-4( 3H) -quinazolinone, showing anti-endotoxic activi ties in vit ro , w ere determined simultane-
ously wi th high perfo rmance capilla ry elect ropho resis. Results: The content of 5 org anic acids in Folium
Isat idis o f di fferent cultiva tion populations dif fered g reat ly. Anthranilic acid w as 20. 35～ 379. 94μg /ml.
Salicy lic acid w as 14. 98～ 40. 37μg /m l. Syring ic acid was 2. 29～ 12. 23μg /ml. Benzoic acid was 7. 85～
69. 50μg /m l. 3-( 2-carboxyphenyl ) -4( 3H) -quinazolinone w as 10. 05～ 37. 74μg /m l. Conclusion: There is
evident va ria tions of the content of chemical component betw een dif ferent populations, w hich might be a
facto r resulting in the qua li ty v ariation of crude drug s.
KEY WORDS　 Isatis indigotica Fo rt. ; activ e component; high perfo rmance capi llary elect ropho resis
[ Acad J Sec Mil Med U niv , 1999, 20( 6): 374～ 376 ]
⒇
　 十字花科植物菘蓝 ( Isatis indigotica Fo rt. )的
叶是常用中药材大青叶的主要来源 ,具有清热解毒、
凉血消炎等功效 ,可用于治疗流感、流行性乙型脑炎
和病毒性肝炎等疾病 [1 ]。研究发现不同栽培居群菘
蓝叶体外抗内毒素作用差异很大 ,其制剂的临床疗
效亦有明显差别 ;而药材中的水杨酸、苯甲酸、丁香
酸、邻氨基苯甲酸和 3-( 2-羧苯基 ) -4( 3H) -喹唑酮是
抗内毒素的活性成分。 本研究采用高效毛细管电泳
法测定 12个不同栽培居群菘蓝叶中抗内毒素活性
成分的含量 ,考察居群间的化学成分差异 ,旨在为大
青叶类药材的质量评价及优良品种选育提供依据。
1　材料和方法
1. 1　仪器与药品　Waters Capi llary Ion Analy zer,
熔融石英毛细管柱 60 cm× 75μm(河北永年光导纤
维厂 ) ,水杨酸、苯甲酸 (上海化学试剂公司 ) ,丁香
酸、邻氨基苯甲酸 (日本东京化成工业株式会社 ) ,肉
桂酸 (中国药品生物制品检定所 )、 3-( 2-羧苯基 ) -4
( 3H) -喹唑酮 ( I)从菘蓝中提取 ,与文献 [2 ]报道光谱
值一致 ,经 HPLC面积归一法测定含量达 99. 5%以
上 ,其他试剂均为分析纯。
1. 2　药材样品　菘蓝叶于 1996年 10～ 11月间采
自全国 12个不同栽培居群 (表 1) ,经作者鉴定其原
植物均为 Isat is indigotica For t.。
·374· 第 二 军 医 大 学 学 报Acad J Sec Mil Med Univ　 1999 Jun; 20( 6)
⒇ * 国家自然科学基金资助项目 ,批准号 39670878;上海市科委
星火计划项目 ,项目编号 98X H02028
作者单位　第二军医大学药学院生药学教研室 ,上海 , 200433;
△第二军医大学药学院药物分析教研室
王　寅 ,男 , 1974年 10月生 ,硕士生
1. 3　色谱分离条件　缓冲液为 25 mmol /L
Na2 B4O7-NaOH( pH 9. 3) ,检测波长 214 nm ,电压
22 kV,温度 25℃ ,进样方式为压差法 , 10 cm , 5 s。
1. 4　对照品溶液制备　精称水杨酸 19. 17 mg ,苯
甲酸 22. 68 mg ,丁香酸 20. 09 mg ,邻氨基苯甲酸
121. 59 mg, ( I) 18. 09 mg以无水甲醇溶解并定容至
100 ml;精称肉桂酸 28. 75 mg ,以甲醇配制成 1. 15
mg /m l的内标溶液 ,避光冷藏。
1. 5　样品溶液制备　将菘蓝叶烘干 ,粉碎 ,过 60目
筛 ,称取 100 g ,加 500 m l水煎煮 30 min,过滤 ,重复
3次 ,合并滤液 ,水浴浓缩至约 100 m l,加乙醇至
80% ,冷藏 24 h后过滤 ,回收乙醇至无醇味 ,以蒸馏
水定容至 100 ml ,备用。取 10 ml提取液用 1 mol /L
的 HCL调 pH值至 1,石油醚萃取多次 ,弃去石油
醚 ,再以乙醚萃取多次 ,合并乙醚液 ,以无水 Na2 SO4
脱水 ,过滤 ,回收乙醚 ,残留物以甲醇溶解并定容至
10 m l。加 0. 1 ml内标液后进样。
1. 6　标准曲线　各精密量取一定量的对照品溶液
置于 10 ml容量瓶中 ,加入 0. 1 m l内标溶液 ,以甲
醇定容 ,重复进样 3次 ,对照品电泳图谱见图 1A。以
对照品校正峰面积 (峰面积与迁移时间比值 )与内标
校正峰面积之比为纵坐标 (Y ) ,以对照品溶液的浓
度为横坐标 (X ) ,计算线性方程及相关系数。
1. 7　加样回收率和稳定性实验　精密量取以上对
照品溶液 ,加入已知含量的菘蓝叶药材中 ,按上法测
定加样回收率。将菘蓝叶提取液在室温 ( 20～ 25℃ )
避光保存 ,分别在不同时间测定。
2　结　果
5种有机酸的线性关系考察结果如下:
邻氨基苯甲酸: Y= - 8. 58× 10- 1+ 1. 17× 10- 1 X
r= 0. 999 4　 ( 86. 36～ 485. 80μg /m l)
丁香酸: Y = - 6. 48× 10- 2 + 1. 68× 10- 1 X
r= 0. 999 3　 ( 2. 009～ 12. 054μg /m l)
苯甲酸: Y = - 2. 35× 10- 1 + 7. 65× 10- 2 X
r= 0. 999 5　 ( 2. 268～ 113. 40μg /m l)
水 杨 酸: Y = 1. 60× 10- 1 + 3. 62× 10- 2 X
r= 0. 999 4　 ( 1. 917～ 38. 34μg /m l)
( I ): Y = - 1. 60× 10- 1 + 1. 54× 10- 1 X
r= 0. 999 2　 ( 1. 809～ 36. 18μg /m l)
( I)的平均加样回收率为 96. 05% , RSD为
2. 33% ;邻氨基苯甲酸回收率为 99. 77% , RSD为
1. 09% ;苯甲酸回收率为 95. 54, RSD为 1. 09% ;水
杨酸回收率为 99. 91% , RSD为 1. 05% ;丁香酸回
收率为 100. 4% , RSD为 0. 70%。
稳定性实验结果表明 5种有机酸稳定性良好 , 3
d内无明显变化: ( I)的 RSD= 1. 55% ,邻氨基苯甲
酸 RSD= 1. 98% ,苯甲酸 RSD= 2. 07% ,水杨酸
RSD= 1. 67% ,丁香酸 RSD= 1. 74% 。
依据上法测定 12个不同栽培居群菘蓝叶中有
机酸的含量 ,每份样品测 3次 ,样品电泳图谱见图
1B,测定结果见表 1。
图 1　对照品 (A)和菘蓝叶样品 ( B)电泳图谱
Fig 1　 Capillary electropherogram of standard compounds (A) and I. indigot ica sample (B)
1: 3-( 2-carbox yph en yl ) -4( 3H) -quinazolinone; 2: Cinnamic acid( in ternal s tandard) ;
3: Anth rani lic acid; 4: Benzoic acid; 5: Salicylic acid; 6: Sy ringic acid
　　结果表明不同栽培居群菘蓝叶中的 5种有机酸
含量有明显差别。其中以邻氨基苯甲酸含量相差最为
悬殊 ,安徽亳州的菘蓝叶中邻氨基苯甲酸含量最高 ,
江苏泰兴的含量最低 ,相差近 20倍 ;安徽临泉的菘蓝
·375·第 6期 . 王　寅 ,等 . 不同栽培居群菘蓝叶中 5种有机酸成分的含量差异
叶中水杨酸含量是江苏射阳的 3倍左右 ;安徽亳州的
菘蓝叶丁香酸含量是江苏泰兴的 6倍左右 ;安徽临泉
的菘蓝叶中苯甲酸含量是安徽亳州的 9倍左右 ;安徽
临泉的菘蓝叶中 ( I)的含量是辽宁沈阳的 4倍左右。
表 1　不同栽培居群菘蓝叶中 5种有机酸的含量
Tab 1　 Contents of f ive organic acids in Folium Isatidis f rom dif ferent cultivation populat ions
(n= 3, x-± s, dB /μg· ml- 1)
Sample ( I) An th ranili c acid Benzoic acid Salicylic acid Syringic acid
Chifeng, Neimongg u 20. 03± 0. 31 111. 12± 1. 51 45. 54± 0. 76 34. 52± 0. 14 5. 71± 0. 02
Sh engyang, Liaoning 10. 05± 0. 04 70. 62± 0. 32 23. 22± 0. 14 19. 73± 0. 18 4. 40± 0. 02
Xingtai, Heb ei 17. 24± 0. 16 73. 15± 0. 21 26. 37± 0. 22 25. 74± 0. 08 5 17± 0. 05
Xianyang, Shanxi 19. 62± 0. 36 203. 51± 0. 40 43. 98± 0. 45 24. 58± 0. 44 5. 13± 0. 06
Taigu , Sh anxi 15. 97± 0. 06 145. 63± 0. 42 31. 18± 0. 11 24. 91± 0. 44 4. 95± 0. 08
Yuzhou , Henan 18. 31± 0. 11 338. 01± 1. 43 21. 95± 0. 07 23. 63± 0. 04 9. 49± 0. 01
Lingquan, Anhui 37. 74± 0. 17 341. 44± 0. 43 69. 50± 0. 40 40. 37± 0. 41 11. 55± 0. 11
Fuyang, Anhui 17. 33± 0. 05 233. 02± 0. 24 31. 39± 0. 14 24. 13± 0. 44 7. 18± 0. 04
Bozhou, Anhui 21. 75± 0. 23 379. 94± 1. 42 7. 85± 0. 07 18. 70± 0. 05 12. 23± 0. 03
Anguo, Anhui 20. 94± 0. 11 213. 13± 2. 64 17. 54± 0. 08 19. 01± 0. 09 9. 03± 0. 01
Sh eyang, Jiangsu 13. 84± 0. 07 117. 64± 1. 62 26. 41± 0. 03 14. 98± 0. 24 5. 58± 0. 01
Taixing, Jiangsu 11. 20± 0. 04 20. 35± 0. 08 17. 94± 0. 02 25. 36± 0. 21 2. 29± 0. 01
3　讨　论
菘蓝在全国各地广为栽培 ,中国药典 1995版
(一部 )及各地方标准均有收载。 经对产地原植物调
查和药材鉴定 ,证明其是板蓝根、大青叶药材的主流
品种。 因栽培历史悠久 ,地域间隔大 ,彼此间交配机
会少 ,形成了一些地方繁育居群 ( local breeding
popula tion)
[3 ] ,在进化过程中遗传发生漂变 ,不同栽
培居群菘蓝的遗传组成产生变异。种内变异和生态
环境的差异导致了不同栽培居群菘蓝的次生代谢产
物积累有明显不同。药理实验也表明不同居群菘蓝
叶的提取液体外抗内毒素活性有明显差异。文献报
道从菘蓝中分离的几种有机酸具有体外抗内毒素活
性 [2 ] ,能较好地反映药材清热解毒的功效。通过高效
毛细管电泳法对不同栽培居群菘蓝叶中的 5种有机
酸进行测定 ,结果显示不同栽培居群菘蓝叶中的有
机酸含量差别显著 ,表明不同栽培居群菘蓝在化学
成分上存在差异 ,这可能是导致不同来源的菘蓝药
材药效有差别的主要原因。 关于菘蓝叶中有机酸含
量与其抗内毒素作用强度之间关系将另文报道。
此外 ,中国药典规定以靛玉红作为此类药材的
鉴定标准 ,因其脂溶性大 ,经药典方法处理后几乎测
不到含量 [4 ] ,以之作为质量标准并不可行。有文献报
道以喹唑二酮类成分作为马蓝、蓼蓝药材及制剂的
质量标准 [5 ] ,但菘蓝叶中不含此成分 ,不能采用。而
有机酸类成分在药材提取后能有效测定 ,稳定性好 ,
能作为药材的质量控制指标。本实验结果可为大青
叶类药材的质量控制及优良种质资源的筛选提供一
定依据。
在应用高效毛细管电泳法时 ,对影响测定结果
的几种因素进行了考察 [6 ]: p H值小时 ,各组分峰重
叠 ,无法定量 ; pH值过大 ,迁移时间延长 ,峰展宽 ;
电压增加使迁移时间减少 ,柱效提高 ,利于组分分
离 ,电压过高则产生热量过多 ,使柱效下降 ,峰展宽 ;
适当提高缓冲液的离子强度 ,利于组分的分离 ,在缓
冲液中添加甲醇 ,使丁香酸迁移时间改变 ,与其他组
分峰重叠。综合上述 ,确定了电泳工作条件 ,并通过
线性关系和加样回收率的考察 ,对菘蓝叶中 5种有
机酸进行有效的分离定量。
参 考 文 献
1　中华人民共和国卫生部药典委员会编 .中华人民共和国药典 .一
部 . 1995年版 . 广州:广东科学技术出版社 ,北京:化学工业出版
社 , 1995. 15～ 16
2　 Wu XY, Liu Y H, Sh eng WY, et al . Chemical cons tituents of
Isat is in digot ica. Plan ta M ed, 1997, 63: 55
3　陈家宽 .居群生物学与进化生物学。 见:陈家宽 ,杨　继 主编 .植
物进化生物学 . 武汉:武汉大学出版社 , 1994. 10～ 12
4　李　影 ,滕兆森 ,金汉台 . 板蓝根冲剂生产过程中靛玉红的含量
变化及工艺改进设想 .中成药 , 1990, 12( 9): 8
5　李　玲 ,乔传卓 ,李修禄 ,等 .大青叶和板蓝根药材及其制剂质量
控制的研究 .药学学报 , 1993, 28( 3): 229
6　 Liu YM, Sh eu S J. Separation of aromatic acids by reversed elec-
t roosmo tic flow capil lary elect roph oresi s . J Chromatogr A,
1994, 663 : 239
( 1999-01-13收稿 , 1999-05-10修回 )
(本文编辑　姚春芳 )
·376· 第二军医大学学报　 1999年 6月 ,第 20卷