全 文 ：２０１３，Ｎｏ．６ 　 饲料添加剂 ５１　
收稿日期：２０１２－１２－２０；修回日期：２０１３－０５－２８
基金项目：西藏自治区科技厅２０１０年重点科研计划项目（Ｎ２０１０Ｄ１６）
作者简介：马红梅（１９７８－），女，讲师，硕士，主要从事中药多糖应用的研究。
通信作者：陆　群（１９７０－），男，副教授，研究方向为有机合成与生物催化。
藏蒲公英多糖纳米乳剂对小鼠外周血
Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ４＋、ＣＤ８＋的影响
马红梅１，２，别玉宙２，魏　军２，李树鹏３，陆　群１
（１．西南交通大学生命科学与工程学院，四川 成都　６１００３１；２．西藏大学理学院，西藏 拉萨　８５００００；３．河北农业大学动医
学院，河北 保定　０７１０００）
摘　要：研究藏蒲公英多糖对小鼠免疫功能的调节作用。采用流式细胞术检测健康小鼠在灌胃０．１ｍｌ质量分数
０．８５％生理盐水、０．１ｍｌ质量分数１％藏蒲公英多糖水溶液和０．１ｍｌ质量分数１％藏蒲公英多糖纳米乳剂情况
下，外周血Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ４＋、ＣＤ８＋数量的动态变化。结果发现，藏蒲公英多糖和藏蒲公英多糖纳米乳剂均
能够显著提高小鼠外周血Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ４＋、ＣＤ８＋水平，降低Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ４＋、ＣＤ８＋比值，尤以藏蒲
公英多糖纳米乳剂效果最为显著。
关键词：藏蒲公英多糖；纳米乳剂；小鼠；Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ４＋；Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ８＋
中图分类号：Ｓ８１６．４＋３　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００３－６２０２（２０１３）０６－００５４－０３
Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｔｉｂｅｔ　Ｔａｒａｘａｃｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｎａｎｏ－ｅｍｕｌｓｉｏｎ　ｏｎ　ＣＤ４＋ａｎｄ　ＣＤ８＋Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｓｕｂｓｅｔｓ　ｏｆ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ
ｉｎ　ｍｉｃｅ
Ｍａ　Ｈｏｎｇｍｅｉ　１，２，Ｂｉｅ　Ｙｕｚｈｏｕ２，Ｗｅｉ　Ｊｕｎ２，Ｌｉ　Ｓｈｕｐｅｎｇ３，Ｌｕ　Ｑｕｎ１
（１．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ　Ｊｉａｏｔｏｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ　６１００３１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｔｉｂｅｔ　Ｕ－
ｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌｈａｓａ　８５００００，Ｃｈｉｎａ；３．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈｅｂｅｉ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂａｏｄｉｎｇ　０７１０００，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：Ｔｈｅ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　Ｔｉｂｅｔ　Ｔａｒａｘａｃｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｎａｎｏ－ｅｍｕｓｉｏｎ　ｏｎ　ｉｍｍｕｎｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｍｉｃｅ　ｗａｓ
ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ＣＤ４＋ａｎｄ　ＣＤ８＋ Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｓｕｂｓｅｔｓ　ｉｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｏｆ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｍｉｃｅ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＦＣＭ　ｔｅｃｈ－
ｎｉｑｕｅ，ｗｈｉｃｈ　ｗｅｒｅ　ｇｉｖｅｎ　ｏｒａｌｙ　ｗｉｔｈ　０．１ｍｌ　０．８５％ｓａｌｉｎｅ，０．１ｍｌ　１％Ｔｉｂｅｔ　Ｔａｒａｘａｃｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ａｎｄ　０．１ｍｌ　１％Ｔｉｂｅｔ
Ｔａｒａｘａｃｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｎａｎｏ－ｅｍｕｓｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　Ｔｉｂｅｔ　Ｔａｒａｘａｃｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ａｎｄ　Ｔｉｂｅｔ　Ｔａｒａｘａ－
ｃｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｎａｎｏ－ｅｍｕｓｉｏｎ　ｃｏｕｌｄ　ａｌｓｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ　ｍｉｃｅ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ＣＤ４＋ａｎｄ　ＣＤ８＋ Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｌｅｖ－
ｅｌ，ａｎｄ　ｄｅｃｒｅａｓｅ　ｔｈｅ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ＣＤ４＋ａｎｄ　ＣＤ８＋，ｔｈｅ　Ｔｉｂｅｔ　Ｔａｒａｘａｃｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｎａｎｏ－ｅｍｕｓｉｏｎ　ｗａｓ　ｂｅｔｔｅｒ．
ＫＥＹＷＯＲＤＳ：Ｔｉｂｅｔ　Ｔａｒａｘａｃｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｎａｎｏ－ｅｍｕｌｓｉｏｎ；ｍｉｃｅ；ＣＤ４＋ Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ；ＣＤ８＋ Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ
　　藏蒲公英（Ｔａｒａｘａｃｕｍ　ｔｉｂｅｔａｎｕｍ　Ｈａｎｄ）因生
长在青藏高原而得名，仍属于菊科蒲公英属，矮小草
本。其在西藏分布较广，尤以东部和北部为多。多
生长在山坡草地、台地、河边草地以及碎石堆上，海
拔４　０００～５　２００ｍ。
现代药理研究显示，蒲公英具有广泛的药理活
性，如抑菌作用、抗内毒素作用、抗肿瘤作用、免疫调
节作用、抗氧化自由基作用、健胃作用等［１］，尤其以
抗菌作用最为显著。据报道，由蒲公英组成的中药
复方添加于患隐性乳房炎的奶牛饲料中，奶牛细胞
免疫功能明显提高，隐性乳房炎显著好转，有效率达
８３％［２］；以蒲公英为主研制开发的复方蒲公英注射
液对奶牛临床型和隐性乳房炎均具有较好的疗
效［３］；将蒲公英水浸液进行体外抑菌试验，对奶牛乳
房炎主要病原菌均具有较强的抗菌活性；将蒲公英
提取物给小鼠口服，能提高小鼠的免疫功能［４］。国
家卫生部新近将其列入药食两用品种，利用蒲公英
注射剂治疗各种感染疾病已达４０种左右，被中药
界誉为清热解毒、抗感染作用中草药的“八大金刚”
之一［５］。
近年来，免疫增强剂在饲料添加剂中的应用越
来越广泛，尤其是许多天然来源多糖免疫增强剂因
５２　 　 马红梅等：藏蒲公英多糖纳米乳剂对小鼠外周血Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ４＋、ＣＤ８＋的影响／２０１３年第６期
其本身的天然性、低毒副作用等优点，大量用于畜牧
生产中［６－９］。本试验选择小鼠作为研究对象，通过检
测其外周血Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ４＋、ＣＤ８＋数量的动
态变化，了解藏蒲公英多糖纳米乳剂对小鼠机体免
疫的增强作用，从而为进一步应用于饲料添加剂中
提供参考。
１　材料与方法
１．１　试验材料
试验选用体重（２０±２）ｇ昆明种小鼠６０只（雌、
雄各半）；质量分数１％藏蒲公英多糖水溶液（ＴＰ）；
质量分数１％藏蒲公英多糖纳米乳剂（ＴＰ－ＮＥ，由
Ｔｗｅｅｎ　８０、Ｓｐａｎ　８０、液体石蜡、乙醇和藏蒲公英多
糖水溶液组成，各组分体积比为３∶１∶２∶１∶３）；质
量分数０．８５％的生理盐水。
注射器、灌胃器、离心机和流式细胞仪等。
１．２　方法
１．２．１　分组与处理
将体重（２０±２）ｇ昆明种小鼠６０只（雌、雄各
半）随机平均分成３组，饲养３ｄ后开始对其灌胃。
各组灌胃药物分别为０．１ｍｌ质量分数０．８５％生理
盐水（空白对照）、０．１ｍｌ质量分数１％藏蒲公英多
糖水溶液（ＴＰ）和０．１ｍｌ质量分数１％藏蒲公英多
糖纳米乳（ＴＰ－ＮＥ），连续灌胃１０ｄ。
１．２．２　样品采集
在试验第３、１０、１５和２０ｄ每组随机分别抽取
３只小鼠，进行心脏采血，肝素抗凝，在温度３７℃条
件下斜面放置３０ｍｉｎ，４℃冰箱放置２ｈ，在转速
２　０００ｒ／ｍｉｎ条件下离心１０ｍｉｎ，取上清液冷冻保存
备用。
１．２．３　外周血Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ４＋、ＣＤ８＋检测
采用 流 式 细 胞 术 Ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ （ＦＣＭ）
法［１０］。
１．２．４　数据处理
各组小鼠外周血Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ４＋、ＣＤ８＋
数量测定结果和Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ４＋、ＣＤ８＋比值
以“平均值”表示，应用ＳＰＳＳ　１３．０软件进行单因素
方差分析，用ＬＳＤ法进行多重比较。“Ｐ＜０．０５”表
示差异显著。
２　结果与分析
２．１　藏蒲公英多糖纳米乳剂对小鼠外周血Ｔ淋巴
细胞亚群ＣＤ４＋的影响
由表１可看出，第３ｄ时，各试验组小鼠外周血
Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ４＋含量与对照组相差异不显著
（Ｐ＞０．０５）。第１０、１５、２０ｄ时，ＴＰ组、ＴＰ－ＮＥ组
小鼠外周血中Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ４＋含量均显著高
于对照组（Ｐ＜０．０５）。
表１　小鼠外周血Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ４＋计数
组　别 ３ｄ １０ｄ １５ｄ ２０ｄ
对照组／％ ２８．３ａ ３０．１ａ ３２．４ａ ３１．８ａ
ＴＰ组／％ ２８．５ａ ３２．３ｂ　 ３５．８ｂ　 ３６．５ｂ
ＴＰ－ＮＥ组／％ ２８．４ａ ３３．６ｃ　 ３８．１ｃ　 ４１．５ｃ
　　注：同列数据右肩注字母不同，表示差异显著（Ｐ＜０．０５）；同列
数据右肩注字母相同，表示差异不显著（Ｐ＞０．０５）。下同。
２．２　藏蒲公英多糖纳米乳剂对小鼠外周血Ｔ淋巴
细胞亚群ＣＤ８＋的影响
　　由表２可知，第３、１０ｄ时，各试验组小鼠外周
血Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ８＋数量与对照组相比差异均
不显著（Ｐ＞０．０５）。第１５、２０ｄ时，各试验组小鼠外
周血中Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ８＋数量均显著高于对照
组（Ｐ＜０．０５）。另外，在１０ｄ时３个组小鼠外周血
Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ８＋数量与３ｄ时相比均呈现一
定程度的下降（Ｐ＞０．０５）。而ＴＰ－ＮＥ组和ＴＰ组
小鼠外周血 Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ８＋数量在第１５ｄ
时开始回升（Ｐ＜０．０５），对照组继续下降（Ｐ＞
０．０５）；第２０ｄ时ＴＰ－ＮＥ组和ＴＰ组小鼠外周血
Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ８＋数量均达到最大值，且ＴＰ－
ＮＥ组较ＴＰ组差异显著（Ｐ＜０．０５）。
表２　小鼠外周血Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ８＋计数
组　别 ３ｄ １０ｄ １５ｄ ２０ｄ
对照组／％ ２０．４ａ １６．７ａ １４．４ａ １８．５ａ
ＴＰ组／％ ２０．６ａ １８．４ａ １８．６ｂ　 ２１．７ｂ
ＴＰ－ＮＥ组／％ ２０．３ａ １７．１ａ １９．８ｂｃ　 ２３．５ｃ
２．３　藏蒲公英多糖纳米乳剂对小鼠外周血Ｔ淋巴
细胞亚群ＣＤ４＋、ＣＤ８＋比值的影响
　　由表３可知，各组小鼠外周血ＣＤ４＋、ＣＤ８＋比
值在第１０、１５ｄ与３ｄ时相比呈现上升趋势，第２０ｄ
较１０、１５ｄ有下降趋势，ＴＰ－ＮＥ组在１０ｄ时达最
大值，且显著高于对照组和 ＴＰ组（Ｐ＜０．０５），第
１５ｄ时则显著低于对照组（Ｐ＜０．０５）；对照组和ＴＰ
组在１５ｄ时达到最大值，其中对照组ＣＤ４＋、ＣＤ８＋
比值波动最明显，最大比值达２．２５。在第１０、１５和
２０ｄ时，ＴＰ组ＣＤ４＋、ＣＤ８＋比值均小于对照组，且
在第１０、１５ｄ达显著水平（Ｐ＜０．０５）。在第１０ｄ
时，ＴＰ－ＮＥ组ＣＤ４＋、ＣＤ８＋比值达最大值，且显著
高于对照组和ＴＰ组（Ｐ＜０．０５）；在第１５ｄ时，ＴＰ
－ＮＥ组ＣＤ４＋、ＣＤ８＋比值则显著低于对照组（Ｐ＜
０．０５）。在第２０ｄ时，各组间ＣＤ４＋、ＣＤ８＋比值差异
均不显著（Ｐ＞０．０５）。
马红梅等：藏蒲公英多糖纳米乳剂对小鼠外周血Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ４＋、ＣＤ８＋的影响／２０１３年第６期 　 ５３　
表３　小鼠外周血Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ４＋、ＣＤ８＋比值
组　别 ３ｄ １０ｄ １５ｄ ２０ｄ
对照组 １．３８ａ １．８０ａ ２．２５ａ １．７１ａ
ＴＰ组 １．３８ａ １．７５ｂ　 １．９１ｂ　 １．６８ａ
ＴＰ－ＮＥ组 １．３９ａ １．９６ｃ　 １．９２ｂｃ　 １．７６ａ
３　讨论
３．１　对小鼠外周血Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ４＋、ＣＤ８＋
的影响
本试验表明，在对小鼠进行ＴＰ－ＮＥ和ＴＰ灌
喂饲养１０ｄ后，外周血中Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ４＋显
著高于对照组，说明ＴＰ和ＴＰ－ＮＥ均能够提高小
鼠外周血Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ４＋的数量。Ｔ淋巴细
胞亚群ＣＤ４＋ 具有诱导和增强机体免疫应答的作
用，且能分泌多种具有免疫活性的细胞因子，以及刺
激Ｂ淋巴细胞的活化、增殖和产生特异性中和抗
体。Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ４＋增多，使Ｂ细胞分化增
殖和成熟的诱导作用增强，进而增强小鼠对各种疫
苗的特异性免疫应答以及抗体产生。同时，ＴＰ组
和ＴＰ－ＮＥ组小鼠外周血Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ８＋
数量，在１０、１５和２０ｄ时均高于对照组，且在第１５、
２０ｄ时达显著水平。Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ８＋主要介
导细胞毒杀伤作用，其数量多少表示机体通过细胞
毒杀伤作用抵御和清除体内病原的能力。本研究结
果说明ＴＰ和ＴＰ－ＮＥ对Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ８＋的
产生具有促进作用，进而对机体抵御和清除病原有
积极的影响。比较来说，ＴＰ－ＮＥ对Ｔ淋巴细胞亚
群ＣＤ８＋的作用显著强于ＴＰ，说明藏蒲公英多糖纳
米乳剂具有更好的免疫调节作用。
本研究发现在对小鼠进行ＴＰ和ＴＰ－ＮＥ灌喂
后，往往需要一段时间才能显现出效果，表现为
ＣＤ４＋和ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞数量的上升。而且随着
时间的持续，其免疫增强效果越来越明显，这与中药
的作用缓慢、持续时间长的特点相吻合。本试验表
明，ＴＰ－ＮＥ对小鼠外周血Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ４＋、
ＣＤ８＋具有显著的促进增殖作用，且作用效果明显强
于单独使用ＴＰ。这表明ＴＰ－ＮＥ可通过提高小鼠
血液中Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ４＋、ＣＤ８＋水平，增强机
体对抗原的免疫应答，从而增强机体的免疫抵抗力。
３．２　对小鼠外周血Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ４＋、ＣＤ８＋
比值的影响
医学临床上，健康人群的ＣＤ４＋、ＣＤ８＋比值在
一定范围内波动，偏离此范围被认为是免疫机能失
调的 反 映［１２］。 本 研 究 中， 对 照 组 小 鼠 的
ＣＤ４＋、ＣＤ８＋比值，在第１　０ｄ后急剧提高，尤其是
第１５ｄ，其比值大于２，即所谓的ＣＤ４＋、ＣＤ８＋比值
倒置，这 是 机 体 免 疫 机 能 紊 乱 的 重 要 特 征
（ＣＤ４＋、ＣＤ８＋比值的正常值约１．４～２．０，若其比值
大于２．０或小于１．４，表明细胞免疫功能紊乱）。而
ＴＰ组和ＴＰ－ＮＥ组的ＣＤ４＋、ＣＤ８＋比值则相对稳
定，尤其是 ＴＰ－ＮＥ组 ＣＤ４＋、ＣＤ８＋ 比值在灌喂
１０ｄ后一直在稳定下降，说明ＴＰ－ＮＥ对维持小鼠
免疫系统稳定具有更好的效果。
４　小结
本研究通过对小鼠外周血 Ｔ 淋巴细胞亚群
ＣＤ４＋和ＣＤ８＋数量、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋比值的动态变化
进行观察和分析，发现藏蒲公英多糖和藏蒲公英多
糖纳米乳剂均能够显著提高小鼠外周血 Ｔ淋巴细
胞亚群 ＣＤ４＋、ＣＤ８＋ 水平，降低 Ｔ 淋巴细胞亚群
ＣＤ４＋、ＣＤ８＋比值，尤其以藏蒲公英多糖纳米乳剂
效果最为显著。
［参考文献］
［１］　薛彦朝 ，常美玲 ，粘立军 ，等．蒲公英的研究进展［Ｊ］．中国中
医药，２０１１（１１）：６０－６１．
［２］　王秋芳，张淼涛，效　梅，等．中药对隐性乳房炎奶牛细胞免疫
功能的影响［Ｊ］．畜牧兽医学报，２００２，３３（４）：４０８－４１１．
［３］　金忠辉，肖希龙，薛占永．复方蒲公英注射液的研制［Ｊ］．畜牧兽
医学报，２００５，３６（４）：４０２－４０６．
［４］　吴小丽，蔡云清，赵　岩，等．蒲公英提取物对小鼠免疫功能的
调节作用［Ｊ］．南京医科大学学报（自然科学版），２００５，２５（３）：
１６３－１６５．
［５］　宋德花，梁运霞，李继昌．蒲公英的药理作用研究进展［Ｊ］．黑龙
江畜牧兽医职业学院学报，２００８（１２）：５１－５２．
［６］　孔凡伟，顾　林．饲料添加剂植物多糖的应用研究［Ｊ］．粮食与
饲料工业，２０１０（１０）：５０－５２．
［７］　殷海成．酵母免疫多糖对黄河鲤鱼生长和非特异性免疫力的影
响［Ｊ］．粮食与饲料工业，２００９（６）：３８－３９．
［８］　薛　明，孟宪松．生物活性多糖的免疫研究进展．［Ｊ］．中兽医
医药杂志，１９９４（３）：１５－１９．
［９］　李淑芳，杨汉春，张继东，等．米糠多糖对环磷酰胺诱导免疫抑
制鸡外周血Ｔ淋巴细胞增殖活性及疫苗免疫效果的影响［Ｊ］．
中国兽医科学，２００７，３７（７）：５８８－５９２．
［１０］杨汉春．动物免疫学（第二版）［Ｍ］．北京：中国农业大学出版
社，２００３．
［１１］张　妍，迟晓燕，催保霞．ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋调节性 Ｔ淋巴细胞与
肿瘤免疫研究进展［Ｊ］．生命科学，２０１０，２２（４）：３６２－３６６．
［１２］沈关心，周汝麟．现代免疫学实验技术（第二版）［Ｍ］．武汉：湖
北科技出版社，２００２．
（责任编辑：苏　幔）