全 文 ：马红梅，朱芸菲，魏 军，等． 藏蒲公英多糖纳米乳对小鼠免疫机能的影响［J］． 江苏农业科学，2013，41(1) :214 － 216．
藏蒲公英多糖纳米乳对小鼠免疫机能的影响
马红梅1，朱芸菲1，魏 军1，李树鹏2，陆 群3
(1．西藏大学理学院，西藏拉萨 850000;2．河北农业大学中兽医学院，河北定州 073000;
3．西南交通大学生命科学与工程学院，四川成都 610031)
摘要:本试验旨在通过研究藏蒲公英多糖纳米乳对小鼠免疫功能的调节作用机制，最终将藏蒲公英多糖纳米乳
应用于西藏养牛业生产中。健康小鼠服用藏蒲公英多糖、藏蒲公英多糖纳米乳和生理盐水的试验结果表明，藏蒲公英
多糖纳米乳能显著提高健康小鼠胸腺、脾脏等免疫器官指数，ANAE(酸性 α －醋酸萘酯酶)阳性淋巴细胞百分率，腹
腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数(P ＜ 0． 05)。证明藏蒲公英多糖纳米乳能促进小鼠器官的生长发育，刺激机体体液
免疫、细胞免疫和非特异性免疫，增强小鼠免疫力和对疾病的抵抗力。
关键词:小鼠;藏蒲公英多糖;纳米乳;免疫器官;ANAE阳性细胞率
中图分类号:R285． 5 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2013)01 － 0214 － 03
收稿日期:2012 － 09 － 20
基金项目:西藏自治区重点科研计划(编号:N2010D16)。
作者简介:马红梅(1978—) ，女，硕士，讲师，主要从事中药多糖应用
的研究。Tel:(0312)2381241;E － mail:lspeng2005@ 163． com。
通信作者:陆 群，副教授，研究方向为有机合成与生物催化。
E － mail:luqun1125@ 126． com。
西藏是我国五大牧区之一，畜牧业不仅是西藏国民经济
的基础，也是西藏人民世代经营并赖以生存和发展的传统产
业。养牛业作为现代农业的重要组成部分，在推进农业产业
结构调整、提高牧民生活质量、促进牧民增收、牧业增效方面
具有十分重要的作用。目前，西藏地区养牛生产中养殖规模
小，养殖手段简单，养牛户过于分散，饲养管理粗放，疾病频
发，已成为发展现代养牛产业亟待解决的问题之一。根据该
区养牛业的实际发展情况看，短期内无法解决养殖规模小的
问题，因此，想办法提高牛对各种常见疾病的抵抗力就成为当
前首要解决的问题。
藏蒲公英(Taraxacum tibetanum)因生长在青藏高原而得
名，菊科蒲公英属矮小草本植物，在西藏分布较广，多生在山
坡草地、台地、河边草地以及碎石堆上，尤以东部和北部最多。
现代药理研究显示，蒲公英具有广泛的药理活性，如抗病原微
生物感染、提高机体免疫、保肝利胆、抗溃疡等，尤以抗菌、增
强免疫效果最为显著［1 － 4］。本试验通过研究藏蒲公英多糖纳
米乳对小鼠免疫功能的影响，最终为藏蒲公英多糖纳米乳在
西藏养牛业生产中的实际利用提供理论和试验依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 试验动物 小白鼠 60 只，购自河北医科大学，体重
(20 ± 2)g，常规饲养 3 d，用以进行试验。
1． 1． 2 受试药物的制备 以藏蒲公英为原料，用热水浸提
法制备藏蒲公英多糖(TP) ，多糖含量为 16． 8%。多糖用蒸馏
水稀释成 1%溶液，冷藏保存备用。按照 3 ∶ 1 ∶ 2 ∶ 1 ∶ 3 的体
积比量取 Tween 80、Span 80、液体石蜡、乙醇和蒲公英多糖水
溶液以制备藏蒲公英多糖纳米乳(纳米乳中蒲公英多糖终含
量为 1%)。
1． 1． 3 试剂和仪器 主要试剂肝素、瑞氏染料、甲基绿、副品
红等均为常用试剂;鸡红细胞溶液配制:健康鸡外周血用生理
盐水洗 3 遍，每次 1 500 r /min 离心 10 min，用前配成所需浓
度。主要仪器与设备:离心机，CR14RD(上海天美生化仪器
设备工程有限公司) ;生化培养箱，HPS － 250(哈尔滨市东联
电子技术开发有限公司) ;生物显微镜(COIC 公司) ;电子天
平，FA1104 型(上海天平仪器厂)。
1． 2 试验方法
1． 2． 1 分组与处理 健康小鼠随机平均分为 3 组，每组 20
只，分笼饲养，即:生理盐水组(NS)、藏蒲公英多糖组(TP)、
藏蒲公英多糖纳米乳组(TP － NE)。试验开始后，3 组小鼠分
别灌胃生理盐水、藏蒲公英多糖水溶液和藏蒲公英多糖纳米
乳各 0． 5 mL /只，连续 3 d。试验为期 3 周，其间小鼠自由采
食和饮水。
1． 2． 2 样品采集 分别在试验开始后 0、7、12、17 d，每组随
机抽取 5 只小鼠，称重，并断尾采血，制作血涂片，进行腹腔巨
噬细胞吞噬功能测定。采血后脱颈椎处死，迅速摘取胸腺、脾
脏，称重，计算胸腺指数和脾脏指数，以器官重量(mg)/体重
(g)表示。
1． 2． 3 腹腔巨噬细胞吞噬功能测定 于小鼠采样前 15 min，
消毒腹部，注入生理盐水 3 mL，轻揉腹部 5 min，注射 1 mL
5%的鸡红细胞，轻揉腹部 10 min，剖开腹腔，吸取腹腔液滴在
消毒过的载玻片上，置湿盒内，于 37 ℃温箱中孵育 30 min，生
理盐水冲去浮着的细胞，瑞氏染液染色，显微镜下观察，每张
涂片计数 100 个巨噬细胞，按以下公式计算吞噬率和吞噬
指数:
吞噬率 = 吞噬红细胞的巨噬细胞数 /总巨噬细胞数 ×
100%;
吞噬指数 =吞噬的红细胞数 /总巨噬细胞数。
1． 2． 4 酸性 α －醋酸萘酯酶(ANAE)测定 孵育液配制:将
3 mL 4% NaNO2 水溶液逐滴加入 3 mL 4%副品红盐酸溶液
中，边滴边摇，使生成偶氮副品红;将 6 mL偶氮副品红逐滴加
—412— 江苏农业科学 2013 年第 41 卷第 1 期
DOI:10.15889/j.issn.1002-1302.2013.01.154
入 89 mL pH 值 7． 6 的磷酸盐缓冲液中，边滴边摇，再将
2． 5 mL 2%醋酸萘酯乙二醇甲醚溶液逐滴加入以上混合液
中，调 pH值为 6． 4 即可。测定方法:取肝素抗凝血，制作血
涂片，自然风干后，浸入孵育液中 37 ℃孵育 3 h，自来水冲洗
片刻，滤纸吸干，2%甲基绿溶液染色 10 s，自来水冲洗，滤纸
吸干，镜检。凡胞浆内出现大小和数量不等的深红色颗粒者
为 ANAE阳性细胞(T淋巴细胞) ，计数 200 个淋巴细胞，计算
ANAE阳性细胞率:
ANAE阳性率 = ANAE 阳性细胞数 /200 个淋巴细胞 ×
100%。
1． 2． 5 数据整理 结果以x表示，应用 SPSS 13． 0 进行单因
素方差分析，用 LSD法进行组间多重比较。
2 结果与分析
2． 1 肉眼观察
肉眼观察各试验组小鼠脾脏、胸腺的颜色与形态正常，无
可见病理变化。且试验组小鼠脾脏、胸腺与对照组比较，富有
光泽，体积明显较大。
2． 2 对小鼠脾脏指数的影响
表 1 显示，TP和 TP － NE组小鼠灌胃药物后脾脏指数均
高于 NS组，在 12、17 d时表现差异显著(P ＜ 0． 05) ;TP － NE
组小鼠灌胃药物后脾脏指数均高于 TP 组，但只有在 17 d 时
差异显著(P ＜ 0． 05)。
表 1 小鼠脾脏指数
分组
脾脏指数(mg /g)
0 d 7 d 12 d 17 d
NS 3． 46 3． 54 3． 62 3． 65
TP 3． 51 3． 62 3． 88 4． 11
TP － NE 3． 49 3． 71 3． 94 4． 35
显著性水平
TP vs． NS 0． 513 0． 248 0． 044* 0． 028*
TP － NE vs． NS 0． 738 0． 115 0． 037* 0． 007*
TP － NE vs． TP 0． 819 0． 169 0． 467 0． 042*
注:NS表示生理盐水组;TP表示藏蒲公英多糖组;TP － NE 表示
藏蒲公英多糖纳米乳组;* 表示 P ＜ 0． 05;下同。
2． 3 对小鼠胸腺指数的影响
表 2 显示，TP和 TP － NE组小鼠灌胃药物后胸腺指数均
显著高于 NS组(P ＜ 0． 05) ;TP － NE 组小鼠灌胃药物后胸腺
指数均高于 TP组，但只有 17 d时差异显著(P ＜ 0． 05)。
表 2 小鼠胸腺指数
分组
胸腺指数(mg /g)
0 d 7 d 12 d 17 d
NS 4． 38 4． 52 4． 73 4． 89
TP 4． 36 4． 74 4． 98 5． 20
TP － NE 4． 39 4． 81 5． 12 5． 46
显著性水平
TP vs． NS 0． 568 0． 042* 0． 031* 0． 024*
TP － NE vs． NS 0． 437 0． 035* 0． 024* 0． 008*
TP － NE vs． TP 0． 872 0． 097 0． 065 0． 039*
2． 4 对小鼠外周血 ANAE阳性细胞率的影响
由表 3 可以发现，TP 和 TP － NE 组小鼠灌胃药物后
ANAE阳性细胞率均显著高于 NS 组(P ＜ 0． 05) ;TP － NE 组
小鼠灌胃药物后 ANAE阳性细胞率均高于 TP组，但只有 12、
17 d时差异显著(P ＜ 0． 05)。
表 3 小鼠外周血 ANAE阳性细胞率
分组
ANAE阳性细胞率(%)
0 d 7 d 12 d 17 d
NS 68． 3 71． 5 73． 9 75． 1
TP 68． 1 74． 6 78． 1 79． 7
TP － NE 68． 2 76． 2 80． 3 84． 3
显著性水平
TP vs． NS 0． 725 0． 038* 0． 015* 0． 019*
TP － NE vs． NS 0． 813 0． 014* 0． 006* 0． 004*
TP － NE vs． TP 0． 882 0． 089 0． 048* 0． 027*
2． 5 对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
由表 4 可以看出，TP 和 TP － NE 组小鼠灌喂药物后，巨
噬细胞吞噬率和吞噬指数均显著高于 NS 组(P ＜ 0． 05) ;
TP － NE 组小鼠灌胃药物后，巨噬细胞吞噬率和吞噬指数均
高于 TP组，但只有 12、17 d时差异显著(P ＜ 0． 05)。
表 4 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用
分组
巨噬细胞吞噬率(%)
0 d 7 d 12 d 17 d
NS 35． 6 38． 5 39． 8 40． 7
TP 36． 2 40． 7 43． 6 45． 1
TP － NE 35． 4 41． 2 45． 8 47． 5
显著性水平
TP vs． NS 0． 268 0． 046* 0． 026* 0． 014*
TP － NE vs． NS 0． 674 0． 037* 0． 007* 0． 006*
TP － NE vs． TP 0． 134 0． 124 0． 048* 0． 047*
分组
吞噬指数
0 d 7 d 12 d 17 d
NS 0． 49 0． 52 0． 57 0． 64
TP 0． 52 0． 76 0． 84 1． 02
TP － NE 0． 55 0． 87 1． 06 1． 25
显著性水平
TP vs． NS 0． 438 0． 034* 0． 024* 0． 014*
TP － NE vs． NS 0． 153 0． 011* 0． 007* 0． 006*
TP － NE vs． TP 0． 358 0． 079 0． 039* 0． 042*
3 讨论
胸腺是机体重要的中枢免疫器官，是机体淋巴细胞分化
和成熟的主要器官，而脾脏是机体最重要的外周淋巴器官。
当淋巴细胞在胸腺中发育成熟后，经循环系统转移到脾脏以
及各级淋巴组织和淋巴器官中储存，并最终发挥免疫作用。
脾脏和胸腺指数是机体脾脏和胸腺发育程度的一个重要反
映，给小鼠灌胃 TP和 TP － NE 后，能显著提高小鼠脾脏和胸
腺指数，表明 TP和 TP － NE促进了小鼠脾脏和胸腺的生长发
育，进而增强机体免疫。比较发现，TP － NE 对胸腺和脾脏的
作用显著强于 TP，说明 TP － NE具有更好的免疫调节作用。
ANAE阳性淋巴细胞百分率代表了机体的细胞免疫水
平，其中弥散型细胞是一种活化的 T细胞亚群［5］，ANAE 阳性
呈弥散型的淋巴细胞增加显著，表明活化的 T细胞显著增多，
机体的细胞免疫水平提高。本研究发现 TP 组小鼠 ANAE 阳
性率显著高于 NS组，TP － NE组小鼠 ANAE 阳性率显著高于
—512—马红梅等:藏蒲公英多糖纳米乳对小鼠免疫机能的影响
TP组。表明 TP － NE能极大提高机体的细胞免疫水平，特别
是 T细胞免疫活性显著增强。
小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数是机体非特异性
免疫指标［6］。有试验证明多糖可显著提高小鼠腹腔巨噬细
胞的吞噬百分率和吞噬指数，促进淋巴细胞的转化［7 － 9］。本
研究发现 TP和 TP － NE 在试验期内均显著提高了小鼠巨噬
细胞的吞噬率和吞噬指数，比较发现 TP － NE 的作用效果强
于 TP，表明 TP有增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能，进而提高
机体非特异性免疫的作用，而 TP － NE的作用效果更加显著。
4 小结
多糖是生物体内普遍存在的一大类生物大分子，具有许
多重要的生物活性，如参与细胞骨架的构成，也是多种内源性
生物活性分子的组成成分［10］。近年来，从各种生物体内提取
并研究了大量生物活性多糖，发现其具有提高机体免疫力、抗
菌、抗病毒、抗寄生虫、抗肿瘤、延缓衰老等一系列作用［11 － 20］，
广泛应用于医药、食品和保健品等领域。本研究发现藏蒲公
英多糖纳米乳能显著提高小鼠免疫器官指数，促进免疫器官
发育，有利于增强机体免疫。本研究结果是对中药蒲公英药
理作用的重要补充，同时也为藏蒲公英在西藏养牛生产中的
应用提供了理论依据。
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