全 文 ：!#$
超临界 !# 萃取禹州漏芦
抗肿瘤有效成分的工艺研究
段洪良，杨文玲，刘红梅，程建锋
（河北科技大学化学与制药工程学院，河北石家庄 $%$$&’）
摘( 要：禹州漏芦中含有丰富的 !)三联噻吩化合物。其有广泛的光毒活性，对肿瘤细胞及病毒、真菌等各种病原微生
物显示出明显的抑制作用；抗病毒及细胞毒作用；具有抗 *+,、杀虫作用、抗真菌作用。为了从禹州漏芦中提取 !)三
联噻吩化合物，文章通过单因素实验确定了采用超临界萃取技术从禹州漏芦中提取 !)三联噻吩的工艺条件。结果显
示，在萃取釜压力为 #%-./，萃取釜温度为 0%1，萃取时间为 2$345，夹带剂用量为 6$37的条件下，从禹州漏芦中提取
!)三联噻吩的提取率最大。
关键词：禹州漏芦，!)三联噻吩，超临界萃取（89:），高效液相色谱法（*.7!）
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中图分类号：K8#$&N&( ( ( ( 文献标识码：O( ( ( ( 文 章 编 号：&$$#)$P$Q（#$$2）$’)$#%2)$P
收稿日期：#$$’)&&)&&
作者简介：段洪良（&2’P)），男，硕士研究生，主要从事高等植物有效
成分的提取分离研究。
( ( 禹州漏芦为菊科植物蓝刺头（:A@45;RI 7/E4?;<4DI
K/DIA@）或华东蓝刺头（:A@45;RI>C4L4I44 */5A=）的干
燥根，一般用于治疗疮痈脓肿、皮肤热毒和乳汁不通
等症［&］。近代药理研究证明，禹州漏芦中含有大量的
噻吩类化合物，这种化合物具有显著的抗肿瘤、抗病
毒等多种药理活性［#］。!)三联噻吩是这类化合物中
重要的一种，因此，对萃取禹州漏芦中的抗肿瘤成分
!)三联噻吩的工艺研究是十分必要的。!)三联噻
吩具有以下药理活性［P］：/N有广泛的光毒活性，对肿
瘤细胞及病毒、真菌等各种病原微生物显示出明显
的抑制作用；FN抗病毒及细胞毒作用；AN抗 *+, 作用；
BN杀虫作用；=N抗真菌作用。目前 !)三联噻吩的定
性分析方法主要为薄层色谱法，而定量分析方法主
要为高效液相色谱法［0］，该法不需要预先对样品进行
衍生化，重现性好，准确性高，操作简便，灵敏度亦很
高，样品用量少，适于微量分析。超临界 !# 萃取技
图 &( !)三联噻吩化合物的结构图
术（89:）就是以超临界状态的 !# 流体为溶剂，利用
超临界 !# 在临界点附近所具有的高渗透性、高扩
散性和高溶解能力，对萃取物中的目标组分进行提
取分离，从而达到分离精制的目的［%］。本研究主要是
针对采用超临界 !# 萃取技术从禹州漏芦中提取其
抗肿瘤活性成分噻吩类化合物 !)三联噻吩，并对其
进行定性定量分析。关于利用超临界 !# 萃取技术
从禹州漏芦中提取 !)三联噻吩这类化合物尚未见
报道。
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2009.08.008
!#$
! 材料与方法
!#! 材料与设备
禹州漏芦! 购自安徽礁港药业有限公司；超纯
水! 实验室自制；甲醇 ! 色谱纯；无水乙醇、丙
酮! 分析纯；!三联噻吩! 纯度 ##$%&，北京拜尔迪
生物技术有限公司，用丙酮溶解，配成一定浓度的标
准品溶液。
超临界 ’() 萃取装置，*+,-. 型植物粉碎机，
//%..型精密电子天平，0123456,,.. 高效液相色谱仪
（色谱柱78649: ;<=492:>9? ;% (@;)，A$BCC D)%.CC，
%C）。
!#$ 实验方法
,$)$,! !三联噻吩的测定方法! 采用高效液相色谱
法检测，根据峰面积外标法定量，其色谱条件为：流
动相由甲醇与超纯水组成，体积比为 #. E,.；测定流
速为 .$FCG H C25；检测波长为 -%,5C；灵敏度为 .$.%
0I*;；进样体积 ,.G；两次进样间隔 ,%C25。
,$)$)! 标准曲线的制备 ! 准确称取 !三联噻吩标
准品 %.C1 于 %.CG 容量瓶中，用丙酮溶解并定容至
刻度，即 !三联噻吩的浓度为 ,C1 H CG。将该溶液
稀释成一定梯度，分别为 .$.,、.$.)、.$.-、.$.A、
.$.%C1 H CG。按 ,$)$, 的色谱条件，经 JKG’ 分析，以
!三联噻吩的浓度为横坐标，以峰面积 0为纵坐标，
绘制标准曲线。
图 ,! !三联噻吩含量的标准曲线
,$)$-! 样品含量的测定 ! 吸取提取液 ,CG，加水稀
释至 %.CG后进样分析，确定提取液中 !三联噻吩
的含量。
,$)$A! 提取工艺流程! 将禹州漏芦用植物粉碎机粉
碎，准确称量 ,..1禹州漏芦粉，放入超临界萃取装置
的萃取釜中，开启萃取装置，按各种条件（萃取压力、
萃取温度、萃取时间、夹带剂用量）进行提取，其中，
选用无水乙醇（分析纯）作为夹带剂，将提取液从分
离釜中放出后，进行测定 !三联噻吩的含量。提取
率的计算公式如下：
提取率（&）L CM D,..&
式中：C 为不同条件下 ,..1 禹州漏芦中提取出
的 !三联噻吩的质量（1），M为 ,..1 禹州漏芦中含
!三联噻吩的总质量（1）。
$ 结果与讨论
$#! 禹州漏芦中 !%三联噻吩的含量的测定
取干燥后的禹州漏芦粉末 ,..1，用丙酮回流提
取若干次（至少 - 次），直至认为 !三联噻吩全部提
取出为止（测定每次提取物中 !三联噻吩的含量，
最后提取物中几乎检测不到 !三联噻吩时，可认为
!三联噻吩全部提取出）。合并提取液，测定总含
量，作三次重复实验，最后测得 ,..1 禹州漏芦中含
!三联噻吩平均值为 %N$-BC1。
$#$ 单因素实验
)$)$,! 萃取压力对 !三联噻吩提取率的影响 ! 从
图 ) 中看出，随着萃取压力的增大，!三联噻吩的提
取率在逐渐增高，当萃取压力达到 )%MK8 时，!三
联噻吩的提取率达到最大，随后，随着萃取压力的增
大，!三联噻吩的提取率逐渐减少。因此，选定
)%MK8为提取的萃取压力。
图 )! 萃取压力对 !三联噻吩提取率的影响
)$)$)! 萃取釜温度对 !三联噻吩提取率的影响 !
从图 - 中看出，随着温度的升高，!三联噻吩的提取
率逐渐增加，当温度达到 A%O时，提取率达到最大，
随后，随着温度的升高，提取率稍微有所降低，因此，
选定 A%O为 !三联噻吩的萃取温度。
图 -! 萃取釜温度对 !三联噻吩提取率的影响
)$)$-! 萃取时间对 !三联噻吩提取率的影响 ! 从
图 A 中可以看出，随着提取时间的延长，!三联噻吩
的提取率逐渐增加，当提取时间为 #.C25 时，达到最
大，而后随着时间的延长，!三联噻吩的提取率基本
不变，因此，选定 !三联噻吩的提取时间为 #.C25。
图 A! 萃取时间对 !三联噻吩提取率的影响
)$)$A! 夹带剂用量对 !三联噻吩提取率的影响 !
从图 % 可知，随着夹带剂用量的增加，!三联噻吩的
提取率先增大后降低，当夹带剂加入量达到 N.CG
时，!三联噻吩的提取率达到最大，因此选用夹带剂
的加入量为 N.CG。
（下转第 )B- 页）
!#$
略有上升，但时间却大大延长，从经济上考虑不合
适。综合硫酸酯化结果的极差分析和方差分析，优
选出实验方案为 !#$，通过进一步的验证实验，在
此酯化条件下，得到的酵母 !%&，’%(%葡聚糖硫酸酯
取代度为 )*++，所以硫酸酯化的最佳条件为：氯磺酸
浓度为 &,-，温度 .)/，时间 ’0。
表 1 23（’
4）正交实验结果
实验号 ! # $ (（空白） (5
& & & & & )*,.
& )*,
’ & ’ ’ ’ )*4.
4 & ’ )*+3
, ’ & )*+3
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7’ )*6,) )*.&6 )*.66 )*6)
8 )*3) )*&’ )*),. )*&6
表 ’1 正交实验的方差分析表
因素 偏差平方和 自由度 9值 显著性
! )*4’& 6*’36 !
# )*), &*3’
$ )*)), )*,3
误差 )*). .
注：“!”表示显著影响，9)* ),（，.）: ,*&4。
!#$ 酵母 !%&，#%’%葡聚糖硫酸酯的理化性质
*’*&1 感官性质1 冷冻干燥后的酵母 !%&，’%(%葡
聚糖硫酸酯（(5 : )*++）外观呈白色透明的片状，无
味无臭。
*’*1 酵母 !%&，’%(%葡聚糖硫酸酯的红外光谱分
析1 为了验证酵母 !%&，’%(%葡聚糖硫酸酯的硫酸
酯化程度，本实验用取代度为 )*++ 的酵母 !%&，’%(
%葡聚糖硫酸酯为样品，测定其在 4)));,))<= %&范围
的红外光谱吸收情况，结果见图 4。
1 1 图 4 显示，与酵母 !%&，’%(%葡聚糖的红外图谱
对照，酵母 !%&，’%(%葡聚糖硫酸酯的红外图谱在
+3,<= %&处的特征峰证明了其糖苷键为 ! 构型，在
& ’6’、&&.’、&)66<= %&的特征峰说明成品是具有!%&，
图 41 !%&，’%(%葡聚糖硫酸酯样品的红外光谱图
’ 键的葡聚糖，说明硫酸化没有破坏酵母 !%&，’%(%
葡聚糖主链的结构。红外图谱显示在 &,+、+&3<= %&
有特征吸收峰，它们分别对应 5 : > 拉伸和 $%>%5
振动，是已糖硫酸酯的特征吸收峰。
#$ 结论
本实验以酵母 !%&，’%(%葡聚糖为原料，通过单
因素实验和正交实验，确定了制备高取代度的酵母
!%&，’%(%葡聚糖硫酸酯的最佳工艺条件为：)*’? 酵
母 !%&，’%(%葡聚糖分散于 &)=2二甲基甲酰胺中，
磁力搅拌使其充分悬浮，加入氯磺酸浓度为 &,-的酯
化剂 &,=2，在 .)/水浴下反应 ’0，反应完毕后进一步
纯化，即可制备出取代度为 )*++ 的酵母 !%&，’%(%葡
聚糖硫酸酯。(5 为 )*++ 的酵母 !%&，’%(%葡聚糖
硫酸酯的红外光谱表明，酵母 !%&，’%(%葡聚糖分子
中已经成功引入了硫酸基基团，实验制备的样品为
酵母 !%&，’%(%葡聚糖硫酸酯。
参考文献
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$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$
4’;4’4*
（上接第 .) 页）
图 ,1 夹带剂用量对 %三联噻吩提取率的影响
#$ 结论
经过 ’ 次重复实验得出，在萃取釜压力为
,QRG，萃取温度为 4,/，萃取时间为 3)=AH，夹带剂
用量为6)=2的条件下，禹州漏芦中%三联噻吩的
提取率为 3*6’-。
参考文献
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