全 文 ：兔儿伞中总黄酮及微量元素含量测定
吴素珍 1 , 　李加林 2 , 　陈水亲1 , 　范启兰 2
(1.赣南医学院生化与分子生物学教研室 ,江西 赣州 341000;2.赣南医学院药学院 ,江西 赣州 341000)
收稿日期:2008-07-01
基金项目:赣南医学院人才引进科研项目(2006064;2006069)
作者简介:吴素珍(1979-),女 ,助教 ,硕士 ,研究方向:植物活性成分。 Tel:18970786171E-mail:wusuzhen2005@126.com
关键词:兔儿伞;总黄酮;微量元素;含量测定
中图分类号:R284.1　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2009)09-1468-03
　　兔儿伞(Syneilesisaconitifolia(Bunge)Maxim.)为菊科
兔儿伞属多年生草本植物 , 生于山野阴坡 、林缘 、路旁 ,叶裂
片狭 , 通常宽 4 ～ 8 mm[ 1] , 可作为观赏植物 ,其幼苗和嫩叶均
可食用 , 根和全草均可入药 ,既有药用价值又具有经济价值。
有关兔儿伞一词最早出现于 《救荒本草》, 《中药大辞典》认
为其基源植物为菊科兔儿伞 (SyneilesisaconitifoliaMax-
im)[ 2] 。据《陕西中草药》 、《贵州民间药物 》记载 , 兔儿伞治
疗风湿麻木 , 关节疼痛 , 痈疽疮肿 , 跌打损伤 , 月经失调等症
效果显著 , 是我国民间习用药材之一 [ 3 , 4] 。近年来的研究表
明 , 中草药中的金属元素与其功效存在着一定的联系 ,如锰
对心脑血管疾病的防治具有重要意义 ,镁缺乏是动脉粥样硬
化形成的因素之一等等 [ 5] 。无机离子的存在对其药效也有
很大的影响 , 有些无机离子通过与有机化合物形成配合物从
而增强其药效 , 因此对中药中无机元素的测定具有很重要的
意义。黄酮类化合物具有降低心肌耗氧量 ,使冠状动脉和脑
血管血流量增加 , 抗心律失常 、软化血管 、降血糖血脂等作
用 , 同时它还是一种天然的抗氧化剂 , 具有清除人体中超氧
离子自由基 , 抗衰老 , 增加机体免疫力的生理活性。笔者首
次采用原子吸收分光光度法测定了兔儿伞中 Fe、Cu、Mg、Ca、
Mn、Zn六种微量元素的含量;并采用微波提取工艺提取兔儿
伞中总黄酮 , 在 510nm波长处用紫外分光光度法测定其总
黄酮含量 , 以期为兔儿伞属植物的开发利用提供一定的实验
数据 , 也为今后进一步研究兔儿伞药理学活性与其中的微量
元素的关系打下了一定的基础。
1　材料 、仪器与试剂
1.1　材料　兔儿伞由安徽师范大学张中信老师于 2007年 6
月采自安徽黄山 , 经安徽师范大学植物分类学专家张小平教
授鉴定为兔儿伞(Syneilesisaconitifolia(Bunge)Maxim.)。
1.2　仪器　TAS— 990型原子吸收分光光度计(北京普析公
司);Fe、Cu、Ca、Mn、Zn、Mg空心阴极灯(威格拉斯仪器有限
公司);NewHumanUP900超纯水器(韩国 Human公司);
WF-4000微波快速反应系统(上海屹尧分析仪器有限公
司);UV1900PPC紫外可见分光光度计(上海亚研电子科技
有限公司);TDL-50B离心机(上海安享科学仪器厂)。
1.3　试剂　芦丁标准品(成都曼思特生物科技有限公司);
浓硝酸(优级纯 , 前进化学试剂厂);Fe、Cu、Ca、Mn、Zn、Mg标
准溶液 , 含量均为 1 000 μg/mL(国家标准物质研究中心);
18.3MΨ.cm超纯水 , 用单蒸水经上述超纯水器制得;
NaNO2、A1(NO3)3、NaOH、无水乙醇均为分析纯。
2　方法
2.1　微量元素含量测定
2.1.1　稀释剂及标准液的制备　稀释剂:用优级纯的硝酸
配制成质量分数为 1%的稀硝酸 , 作为铁 、铜 、锌 、锰标准溶
液的稀释剂。称取 1g氯化锶 、1 g氯化钾和 1%硝酸配成混
合溶液 ,作为钙镁标准溶液的稀释剂。
取上述 6种元素标准溶液用相应的稀释剂配制成相应
浓度的溶液。配制的标准溶液的浓度见表 1。
表 1　 标准溶液的浓度 /(μg/mL)
元素 浓度 /(μg/mL)
Fe 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00
Cu 0.00 0.05 0.20 0.40 0.60
Zn 0.00 0.20 0.40 0.80 1.00
Mn 0.00 0.40 0.80 1.20 1.60
Ca 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00
Mg 0.00 0.10 0.20 0.30 0.40
2.1.2　样品的处理　称取 0.5 g左右粉碎的干燥兔儿伞粉
末 ,加入 5 mL浓硝酸 ,放入微波消解仪内 , 密闭微波消解 ,同
时制作空白对照实验 ,消解完后所得的溶液中含有剩余的硝
酸 ,把消化后的溶液转移至小烧杯中 ,用水浴加热挥发硝酸。
待近干后再转移至 100mL量瓶中用 0.5%的硝酸溶液稀释
至刻度待用。在测试过程中 , 如果某种元素的吸光度比较
高 ,高于线性范围时采取加稀释液稀释的办法。
2.1.3　标准方程建立　仪器的工作条件及线性回归方程见
表 2。
2.2　总黄酮含量测定
2.2.1　标准方程的建立　精密称取干燥恒重的芦丁标准品
10 mg, 加 95%乙醇溶解 , 定容至 50 mL量瓶中 , 摇匀 , 得
0.2 g/L的标准液 ,分别取 0、 0.2、0.5、 1、 2、 3、4 mL于 10 mL
量瓶中 , 加 5%NaNO2溶液 0.4 mL, 放置 6 min后 , 加 5%
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表 2　 仪器的工作条件及线性回归方程
元素 参数波长 /nm 灯电流 /mA 燃气流量 /(mL/min) 线性回归方程 相关系数(r)
Fe 248.3 4.0 1 700 C=11.914 7A-0.237 4 0.999 8
Cu 324.7 3.0 2 000 C=5.460 9A+0.003 7 0.999 9
Zn 213.9 3.0 1 500 C=2.432 3A-0.071 9 0.999 6
Mn 279.5 3.0 2 000 C=4.435 9A-0.008 1 0.999 4
Mg 283.3 2.0 1 500 C=1.263 3A-0.021 9 0.999 6
Ca 422.7 3.0 1 700 C=27.749 2A+0.065 8 0.999 5
Al(NO3)3 0.4mL,放置 6min, 加 4%NaOH溶液 4mL,用蒸馏
水定容至刻度 , 摇匀 ,进行全波长扫描 , 在 510 nm处有最大
光吸收。以吸光度为 y轴 , 芦丁浓度为 x轴 , 作标准曲线得
方程:y=5.371 06x+0.007 88, R=0.999 16。
2.2.2　总黄酮的提取　准确称取 5份质量相等的兔儿伞干
粉 5 g,分别置于索氏提取器中 , 100 mL石油醚回流 4 h至无
色后 , 70%乙醇微波提取总黄酮 ,提取液 4 000 r/min离心 ,将
离心后的上清液浓缩 , 浓缩液定容至 100 mL待测 , 用于兔儿
伞总黄酮平均含量测定。
3　结果
3.1　微量元素测定相关结果
3.1.1　微量元素含量测定结果及精密度实验　运用上述方
法对兔儿伞中的微量元素检测的结果及精密度见表 3。从表
中数据可以看出 , 本法测定兔儿伞中的微量元素 , 具有很好
的精密度。
表 3　 兔儿伞中微量元素的含量(n=5)
元素 含量 /(μg/g) RSD/%
Mg 4 430.66 0.79
Cu 9.45 1.38
Ca 11 060.52 1.54
Fe 369.18 2.30
Mn 104.32 1.32
Zn 54.22 0.46
3.1.2　回收率实验　在已知含量的样品中加入一定量的
铁 、铜 、钙 、镁 、锌 、锰的标准溶液测定其回收率。结果见表 4。
表 4　 回收率实验结果
元素 样品含量/(μg/mL)
加标量
/(μg/mL)
测得量
/(μg/mL)
回收率
/%
Mg 0.230 0.200 0.438 104.00
Cu 0.049 0.100 0.146 97.00
Ca 5.736 2.000 7.696 98.00
Fe 1.915 1.000 2.92 100.50
Mn 0.541 0.200 0.748 103.50
Zn 0.281 0.500 0.791 102.00
3.2　总黄酮含量测定相关结果
3.2.1　总黄酮含量　从 100 mL待测液中取 1 mL至 50 mL
的量瓶中 ,加 5%NaNO
2
溶液 0.4mL,放置 6min后 , 加 5%Al
(NO3)3 0.4mL,放置 6 min,加 4%NaOH溶液 4 mL, 用蒸馏
水定容至刻度摇匀静置 15 min, 于 510 nm波长处测定各样
品的吸光度 , 按标准方程求得总黄酮的含量 , 结果见表 5。由
表 5可知兔儿伞中总黄酮含量达 6.01%。
表 5　 样品总黄酮含量测定结果(n=5)
样品号 总黄酮的含量 /% 平均含量 /% RSD/%
1 5.98
2 6.03
3 5.99 6.01 0.35
4 6.01
5 6.02
3.2.2　回收率试验　精密称取兔儿伞适量 , 加入芦丁对照
品适量 , 按样品液制备和样品测定方法操作 , 测定总黄酮含
量 , 计算回收率 , 测得平均回收率为 98.91%, RSD=1.32%
(n=5),表明方法准确 ,结果见表 6。
表 6　 回收率测定结果(n=5)
样品号 样品量/mg
加标量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
1 3.05 2.66 5.66 98.21
2 3.05 2.83 5.84 101.05
3 3.05 3.04 6.04 99.07 98.91 1.32
4 3.05 3.26 6.35 98.59
5 3.05 3.77 6.75 97.65
3.2.3　稳定性试验　吸取卢丁对照品溶液 , 加显色剂显色
30 min后 ,于 0、0.5、 1.0、1.5、 2.0、2.5、 3.0、 3.5、4.0 h测定
样品的吸光度值。结果表明 , 样品在 4 h内稳定性良好 , 结
果见表 7。
3.2.4　精密度试验　取芦丁对照品溶液 2 mL, 置于 10 mL
量瓶中 , 按 2.2.1项 方法测定 5次 , 测得 精密度 RSD=
表 7　 稳定性实验结果
时间 /h 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0h
A值 0.326 9 0.326 9 0.326 8 0.326 8 0.326 6 0.326 6 0.326 6 0.326 6 0.326 6
0.15%, 表明仪器的精密度良好 , 结果分别为 0.222 6、
0.222 8、0.222 7、0.223 4、0.223 2, RSD=0.15。
4　讨论
随着中药研究的深入 ,人们注意到微量元素在中药药效
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中与有机成分一样都起着重要的作用。国内一些中医药专
家还提出了中药配位化学学说 ,认为中药中有效化学成分是
有机成分和微量元素组成的配位化合物 [ 6] 。该学说认为 ,中
药配位化合物是中药的活性作用中心 , 并从整体上反映了中
药的真正物质基础 , 而微量元素不仅以配位物的形态存在于
中药中 , 更是以配位物的形式在人体内起作用 [ 7] 。因此 , 对
中药进行药效物质基础研究时 , 除了要研究有机成分外 , 还
要研究其中的微量元素。本文首次测定了兔儿伞中的总黄
酮含量和微量元素含量。从实验结果我们可以看出 , 兔儿伞
中含有人体必需的微量元素 Ca、Mg、 Fe、Zn、Cu、Mn、,特别是
Ca、Mg含量较高。 Ca在体内有降低血压和减少中风发病的
作用 , 脑血管病患者体内钙明显降低。 Mg能激活体内的多
种酶 , 维持核酸结构的稳定性 , 抑制神经的兴奋 ,参与核酸蛋
白的合成 、肌肉收缩和体温的调节作用 [ 8 , 9] 。由此我们认为
这些微量元素与兔儿伞中的有机成分一样对其发挥药效有
着很重要的作用 , 值得深入探讨。
采用分光光度法测定兔儿伞中总黄酮含量 , 其稳定性 、
精密度 、回收率均较好 ,表明方法可靠 、灵敏。通过该方法我
们确定兔儿伞中总黄酮含量较高(平均含量达 6.01%), 这
可能与其具有抗炎作用有关 [ 10] 。该实验结果对于我们今后
的科研工作具有很大的指导意义 , 目前 , 本课题组正在对兔
儿伞中的总黄酮进行进一步的分离纯化和结构鉴定研究。
参考文献:
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卷 ,第一分册.北京:科学出版社 , 1999:90-91.
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版社 , 1971:524-526.
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研究概况 [ J].药学进展 , 2006, 30(2):49-56.
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中的微量元素 [ J].食品研究与开发 , 2008, 29(1):126-128.
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国药 , 2007, 18(11):2654-2655.
[ 10] 　潘国良,张志梅.兔儿伞镇痛抗炎作用的研究 [ J] .现代中西
医结合杂志 , 2002, 11(20):1985.
薄层色谱对复方丹参片中三七皂苷 R1 和人参皂苷 Re的鉴别
李　霄 1 , 　万丹丹 2 , 　郭洛宏3
(1.北京工业大学生命科学与生物工程学院 ,北京 100124;2.河南大学药学院 2003级实习生 ,河南 开封
475001;3.洛阳市食品药品检验所 ,河南 洛阳 471003)
收稿日期:2008-11-24
作者简介:李　霄(1968-),男 ,副研究员 ,医学博士 ,硕士生导师 ,主要从事中药有效成分和质量研究。 Tel:(010)67396212E-mail:lixiao
@bjut.edu.cn
关键词:薄层色谱;复方丹参片;人参皂苷 Re;三七皂苷 R1
中图分类号:R284.1　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2009)09-1470-03
　　复方丹参片为中国药典 2005年版收载品种 , 由丹参 、三
七 、冰片三味药材组成 , 具有活血祛瘀 、理气止痛的功效 , 广
泛用于治疗心脑血管疾病 , 全国有数百家制药厂生产 ,是市
场流通中销售量较大的中成药之一。中国药典对复方丹参
片中三七药材采用薄层色谱鉴别方法 , 以人参皂苷 Rb
1
、人
参皂苷 Rg1和三七皂苷 R1为对照品进行鉴别 ,但在实际工
作中 , 由于三七皂苷 R
1
和人参皂苷 Re的 Rf值极为接近 ,难
以分离 , 以致于可能出现以人参替代三七投料的假阳性结
果 , 影响该项鉴别的专属性。本实验采用高效薄层色谱法 ,
同时对供试品溶液的制备 、展开条件作了改进 , 使三七皂苷
R1和人参皂苷 Re的色谱斑点基本分离 , 并在不同厂家与批
次的复方丹参片中得到了验证 , 取得了较好的分离效果 , 使
得该品种的质量标准更加完善。
1　仪器与材料
1.1　仪器　CAMAG薄层成像系统(瑞士 CAMAG公司);
CAMAGNanomat4薄层点样器(瑞士 CAMAG公司);TLC
PlateHeaterⅢ(瑞士 CAMAG公司);BELDE-939薄层制板
器(重庆南岸贝尔德仪器技术厂)。
1.2　材料　高效薄层层析硅胶 G(安徽良臣硅源材料有限
公司);高效硅胶 G薄层层析板(自制);复方丹参片为国内
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