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兔儿伞总黄酮的微波提取工艺



全 文 :第 6 期
收稿日期:2009-02-10
基金项目:赣南医学院人才引进科研项目(2006064)
作者简介:吴素珍(1979-),女,安徽宿松人,讲师,硕士,(电话)18970786171(电子信箱)wusuzhen2005@126.com;通讯作者,陈水亲,副教授。
第 48 卷第 6期
2009 年 6月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol. 48 No.6
Jun.,2009
兔儿伞(Syneilesis aconitifolia(Bunge) Maxim.)
为菊科兔儿伞属多年生草本植物, 生于山野阴坡、
林缘、路旁,叶裂片狭,通常宽 4~8 mm [1],可作为观
赏植物,其幼苗和嫩叶均可食用,根和全草均可入
药,既有药用价值又具有经济价值[2]。传统医学有不
少文献都记载了兔儿伞的药用价值 [3,4]。 2002 年潘
国良、张志梅对兔儿伞全草的抗炎镇痛作用进行了
研究,结果表明,兔儿伞具有显著的抗炎、镇痛消肿
作用 [5],但对其发挥药效的物质基础目前国内外研
究较少。
本课题组通过预试验发现兔儿伞中黄酮类化
合物含量较高,这可能与其抗炎作用有关。 本文在
此基础上利用正交试验对兔儿伞中总黄酮微波提
取工艺条件进行优化,以期为兔儿伞中黄酮类化合
物的分离纯化提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料
兔儿伞: 由安徽师范大学张中信老师于 2007
年 6 月采自安徽黄山,经安徽师范大学张小平教授
鉴定为兔儿伞(Syneilesis aconitifolia(Bunge)Maxim.)。
仪器与试剂:WF-4000 微波快速反应系统 (上
海屹尧分析仪器有限公司);UV1900PPC 紫外可见
分光光度计(上海亚研电子科技有限公司);电子天
平(北京赛多利斯天平仪器厂)。 无水乙醇均为分析
纯。
1.2 方法
1.2.1 标准方程的建立 精密称取干燥恒重的芦
丁标准品 10 mg,加 95%乙醇溶解,定容至 50 mL 容
量瓶中,摇匀,得 0.2 g·L-1的标准液,分别取 0、0.2、
兔儿伞总黄酮的微波提取工艺
吴素珍 a,李加林 b,范启兰 b,陈水亲a
(赣南医学院 a.基础医学院;b.药学院,江西 赣州 341000)
摘要:通过正交试验探讨了提取温度、提取时间、料液比及乙醇体积分数对兔儿伞总黄酮提取率的影响。
结果表明,提取时间为 10min,温度为 60℃,料液比为 1∶60,乙醇体积分数为 50%时提取率最高。 4 种因
素对总黄酮提取率的影响顺序为乙醇体积分数﹥料液比﹥提取时间﹥提取温度。
关键词:兔儿伞;总黄酮;正交试验;提取工艺
中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2009)06-1471-02
Extraction Technology of the Total Flavonoids from Syneilesis aconitifolia (Bunge)
Maxim by Microwave
WU Su-zhena,LI Jia-linb,FAN Qi-lanb,CHEN Shui-qina
(a.College of Biochemistry and Molecular Biology; b.College of Pharmacy, Gannan Medical University, Ganzhou 341000, Jiangxi,China)
Abstract: The optimal combinations of the extraction time,extraction temperature, ethanol concentration and the ratio of sol-
vent to raw materials were studied through orthogonal test. The results showed that the optimum process parameters of ex-
tracting flavonoids were as follows:the extraction time, the extraction temperature,the ratio of solvent to raw materials and
ethanol concentration was 10 minutes,60℃,60∶1,50% respectively.The order of these four factors to affect the flavonoids ex-
traction was: ethanol concentration > the ratio of solvent to raw materials > extraction time > extraction temperature.
Key words: Syneilesis aconitifolia (Bunge) Maxim.; total flavonoids; orthogonal test;extraction processing
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2009.06.007
湖 北 农 业 科 学 2009 年
(责任编辑 郑 威)
0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL 标准液于 10 mL 容量瓶中,
加 5%NaNO2溶液 0.4 mL, 放置 6 min 后, 加 5%Al
(NO3)3 0.4 mL,放置 6 min,加 4%NaOH 溶液 4 mL,
用蒸馏水定容至刻度, 摇匀, 进行全波长扫描,在
510 nm 处有最大光吸收。 以吸光度为 y 轴,芦丁浓
度为 x 轴, 作标准曲线得方程y赞 =5.371 06x+0.007
88,r=0.999 2。
1.2.2 总黄酮的提取 准确称取兔儿伞干燥粉末 2
g 置于微波反应釜中, 按正交表的设计条件进行微
波提取后,提取液 4 000 r·min-1离心,将离心后的上
清液浓缩, 浓缩液定容至 50 mL, 从 50 mL 中取 1
mL 至 50 mL 的容量瓶中 , 加 5%NaNO2 溶液 0.4
mL,放置 6 min 后,加 5%Al(NO3)3 0.4 mL,放置 6
min,加 4%NaOH 溶液 4 mL,用蒸馏水定容至刻度,
摇匀静置 15 min,于 510 nm 波长处测定吸光度,按
标准方程求得总黄酮的提取率。 总黄酮提取率=(黄
酮类化合物质量 /干物料质量)×100%
1.2.3 微波提取工艺的正交设计 对影响兔儿伞
总黄酮微波提取率的主要因素微波提取温度、时
间、乙醇体积分数以及料液比以 L9(34)正交表进行
试验设计,正交试验中因素与水平设计见表 1。以兔
儿伞中总黄酮的提取率作为评价的标准。
2 结果与分析
2.1 正交试验结果与分析
极差越大,因素影响越大。 由表 2可知,影响提
取效果的各因素主次顺序为 D>C>B>A, 即乙醇体
积分数>料液比>提取时间>提取温度。 各因素不同
水平间的方差分析结果见表 3。由表 3可知,乙醇体
积分数、料液比对总黄酮提取率的影响显著。 故选
择提取的最佳工艺条件为 A2B2C3D2, 即提取温度为
60℃,提取时间为 10 min,料液比为 1∶60,乙醇体积
分数为 50%。
2.2 正交试验结果验证
准确称取兔儿伞干粉 2 g, 按正交试验的最优
组合即 A2B2C3D2对其进行微波提取, 然后按上述方
法在 510 nm 处测得吸光度值, 得到总黄酮提取率
为 11%,大于正交试验中任何一组试验所得的总黄
酮提取率,说明该正交试验结果可靠。
3 小结与讨论
微波辅助提取技术是近年来发展起来的一种
新方法,具有选择性好、快速、高效、安全、节能等优
点[6],但有关参数选取要得当。 本文通过正交试验,
优选了兔儿伞总黄酮的提取工艺,正交试验结果的
直观分析表明,兔儿伞总黄酮最佳微波提取工艺条
件为温度 60℃,提取时间 10 min,料液比 1∶60,乙醇
体积分数 50%。 4种因素对总黄酮提取率的影响顺
序为乙醇体积分数﹥料液比﹥提取时间﹥提取温
度,在该最佳微波提取工艺条件下,兔儿伞总黄酮
提取率达到 11%。 方差分析结果,表明乙醇体积分
数和料液比对兔儿伞总黄酮提取率的影响显著。
参考文献:
[1] 中科院中国植物志编辑委员会.中国植物志(第七十七卷第一
分册)[M]. 北京:科学出版社,1999.90-91.
[2] 徐 践.野菜漫谈(六)[J].农业工程技术,2004(3):43-46.
[3] 陕西省革命委员会卫生局.陕西中草药[M].北京:科学出版社,
1971.524-526.
[4] 贵州中医研究所 .贵州民间药物[M].贵州:贵州人民出版社,
1965.225-226.
[5] 潘国良,张志梅.兔儿伞镇痛抗炎作用的研究[J].现代中西医结
合杂志,2002,11(20):1985.
[6] 刘 俊,黄少伟,张越非,等,微波辅助提取土茯苓总黄酮[J].
中药材,2007,30(12):1595-1595.
平方和
0.180
0.282
3.989
13.799
0.180
表 3 方差分析结果
变异来源
A
B
C
D
误差
自由度
2
2
2
2
2
均方
0.090
0.141
1.995
6.900
F
1.000
1.567
22.161
76.661
F0.05
19.000
19.000
19.000
19.000
显著性
*
*
温度(A)/℃
40
60
80
表 1 微波提取因素水平表
水平
1
2
3
时间(B)/min
5
10
15
料液比(C)/g∶mL
1∶20
1∶40
1∶60
乙醇体积分数(D)/%
30
50
70
因素
试验号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
x1
x2
x3
R
A
1
1
1
2
2
2
3
3
3
8.263
8.447
8.100
0.347
表 2 正交试验结果
B
1
2
3
1
2
3
1
2
3
8.020
8.407
8.383
0.387
C
1
2
3
2
3
1
3
1
2
7.470
8.240
9.100
1.630
D
1
2
3
3
1
2
2
3
1
8.157
9.840
6.813
3.027
因素 提取率
%
7.10
9.94
7.75
6.71
9.30
9.33
10.25
5.98
8.07
1472