全 文 ：收稿日期:2010-02-15
doi:10.3969/j.issn.1006-9690.2010.05.012
药用菊三七的 HPLC指纹图谱
金 鑫
(太仓市安监局 ,江苏 太仓 215400)
摘 要 目的:建立药用菊三七的 HPLC指纹图谱 , 为中药材质量控制提供有效的方法。方法:CBLC18色谱柱
(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相为乙腈 -水溶液梯度洗脱;检测波长 212nm;柱温 25℃;流速 1.0mL· min-1;分
析时间 90min。结论:成功建立起其指纹图谱 , 并认为该方法稳定可靠 ,可以对该植物将来作为药物制剂的原材料
进行质量控制提供参考 。
关键词 菊三七属;指纹图谱;HPLC
中图分类号:S567 文献标识码:A 文章编号:1006-9690(2010)05-0044-02
HPLCFingerprintofGynuramedica
JinXin
(TaicangSafetySupervisionBureau, Taicang215400, China)
Abstract GynuramedicaY.K.YangetJ.K.Wuisanewanti-diabetesresourcefolkmedicineplant.
Objective:ToestablishHPLCfingerprintofGynuramedicaforqualitycontroloftheherbalmedicine.
Method:ACBLC18analyticalcolumn(250mm×4.6mm, 5μm)wasused.Themobilephasewasace-
tonitrileandwater.Theelutionwasingradientmodeanddetectionwavelengthwassetat212 nm.The
columntemperaturewas25℃andtheflowratewas1.0mL· min-1.Theanalysistimewas90min.Re-
sult:Finalythefingerprintwassuccessfulyestablished.Thismethodisavailableforcontrolthequalityof
thenativematerialofpharmaceuticalpreparations.
Keywords GynuraCass.;Fingerprint;HPLC
药用菊三七(GynuramedicaY.K.YangetJ.K.
Wu)是近年发现的菊三七属有良好抗高血糖作用新
资源植物。该植物属多年生草本 ,具须根系 ,不肥大
块状茎 。植株高 1 ～ 2.5 m,枝均赤紫色或绿色带紫
色斑块与细点。叶片质厚 ,带肉质。叶面绿色 ,多少
光亮 ,叶背苍白色 ,具银质光泽 。两面均被淡白色短
柔毛。本种与白子菜 G.divaricata(L.)DC和尼泊尔
菊三七 G.nepalensisDC.相近似 ,但在茎叶 、花絮 、果
实等方面又有所不同 。菊三七属植物有 30余种 ,主
要分布于亚洲热带地区和非洲 ,我国产 10余种 。该
属的一些植物被作为蔬菜和民间用药 ,在很多地区
都有栽培。文献相继报道从该属植物中分离出具有
生理活性的物质。综合说来 ,其含有的化学成分主
要有生物碱 、香豆素及黄酮类化合物 、苯并呋喃及苯
并吡喃衍生物 、甾体及其皂苷等 。具有镇痛 、止血 、
抗凝血 、抗虐 、抗炎 、降糖 、抗肿瘤 、局部麻醉等广泛
的药理作用。同时也存在着肝损坏的毒性。本实验
采用 HPLC方法建立该新种植物的指纹图谱 ,为三
七属药用植物的质量控制提供依据。
1 仪器 、试剂与药材
LC-20AD高效液相色谱仪 (日本岛津);岛津
Solution色谱工作站;紫外检测器;KH5200型超声波
清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司);电子分析天
平(上海奥豪斯贸易有限公司);旋转蒸发仪;过滤
器。甲醇(分析纯 ,上海久亿化学试剂有限公司);
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第 29卷第 5期
2010年 10月 中 国 野 生 植 物 资 源ChineseWildPlantResources Vol.29 No.5Oct.2010
甲醇(色谱纯 ,上海陆都化学试剂厂);乙腈(色谱
纯 , ProductofTedia, UnitedStatesofAmerica);水为
娃哈哈纯净水。菊三七属新种植物于 2003年 2至
5月采自南京 ,由中国药科大学杨永康 、吴家坤老师
提供并鉴定 。
2 方法与结果
2.1 样品的制备
2.1.1 有效成分的提取
取该植物的干叶 ,粉碎 ,过 40目筛备用 。取样
品粉末约 5.0 g,精密称定 ,置 250 mL锥形瓶中 ,加
入 75%甲醇 100 mL,超声提取 2 h,放冷 ,过滤 。提
取物制得的滤液 ,置于旋转蒸发仪中 65 ℃蒸发干
燥 。约 30min后 ,得浸膏 0.8 g。浸膏经油泵干燥
器干燥成干粉 ,保存备用。
2.1.2 供试品溶液的制备
精确称量 0.05 g干粉 ,以 75%甲醇溶液定容于
10 mL容量瓶中 ,摇匀 ,微孔滤膜(0.45 μm)滤过 ,
取续滤液 ,得供试品溶液。
2.2 色谱条件
CBLC18色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm);
柱温 25℃;流动相为水(A)和乙腈(B)梯度洗脱
(表 1);检测波长:使用紫外扫描检测器记录不同
波长的色谱图 ,结果表明在 212 nm检测波长下 ,
色谱峰较多 ,信息丰富 ,故选择 212 nm为检测波
长;流速 1.0 mL· min-1;进样量 20 μL;峰形基本
对称(图 1)。
表 1 流动相梯度洗脱程序
t/min A/% B/% t/min A/% B/%
0 80 20 45 60 40
10 80 20 55 30 70
30 60 40 90 0 100
图 1 菊三七属新种植物指纹图谱
2.3 方法学考察
从指纹图谱(图 1)上可以看出 ,保留时间约为
40min的峰位于色谱图的中心位置 ,分离度理想 ,吸
收度较高 ,故定为参照峰。以样品的主要色谱峰的
相对保留时间及相对保留峰面积来考察分析方法的
稳定性 ,仪器精密度及实验方法的重现性。
2.3.1 精密度试验
取样品的同一份供试品溶液连续进样 6次 ,记
录指纹图谱 ,结果表明各主要色谱峰相对保留时间
和相对峰面积比值无明显变化 , RSD分别为 0.05%
～ 1.5%和 0.5% ～ 2.5%,表明精密度良好 ,符合指
纹图谱要求。
2.3.2 稳定性试验
在 0, 4, 8, 12, 36, 48 h进样 20 μL,记录指纹
图谱 ,结果表明各主要色谱峰相对保留时间和相对
峰面积比值无明显变化 , RSD分别为 0.84% ～
1.57%和 1.2% ～ 2.2%,显示供试品溶液至少在 48
h稳定 ,符合指纹图谱要求 。
2.3.3 重复性试验
取同一批样品按 2.1项下方法制备 6份供试
液 ,按上述色谱条件测定指纹图谱 ,结果表明各主要
色谱峰相对保留时间和相对峰面积比值无明显变
化 , RSD分别为 0.69% ～ 1.03%和 0.55% ～ 2.1%,
表明重复性良好 ,符合指纹图谱要求。
3 讨 论
(1)在样品的制备上 , 分别用超声法 、热回流
法 、水提醇沉法进行提取 ,所用溶剂均为 75%甲醇
溶液 。结果超声提取所得浸膏量最大 ,效率高 ,色谱
峰数量多且强度较大 ,另外超声提取方法较简便 ,所
以采用超声提取。同时 ,比较了提取溶液制成浸膏
和未制成浸膏直接定容后所得到的指纹图谱 ,发现
直接定容所得的图谱杂峰多 。
(2)先后分别多次使用甲醇 -水 、乙腈 -水做
洗脱溶剂 ,以比较流动相对指纹图谱的影响。发现
甲醇 -水做流动相时 ,随着洗脱时间的延长 ,基线不
断上漂 ,严重影响了图谱的建立 。乙腈 -水系统的
基线稳定 ,出峰时间合适 ,且各峰分离度较好 。
(3)在洗脱梯度的确立上 ,对不同梯度下所得
图谱进行考察比较 。结果表明 , (下转第 49页)
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第 5期 金 鑫:药用菊三七的 HPLC指纹图谱
为过叶主脉横切的鉴别点 。
叶下表皮气孔分布多 ,气孔为不定式 ,主脉处非
腺毛着生较多;叶上表皮有气孔分布 ,较少 ,细胞壁
处可见纹孔及胞间连丝 ,为叶表皮的鉴别点。
叶柄有表皮 、皮层和维管组织三部分组成 ,横切
面呈半圆形 ,其顶端两侧呈突起 ,为叶柄横切的鉴别
点 。
气孔不定式 ,多见平头腺毛 ,非腺毛少 ,可见草
酸钙方晶 ,葡萄状钟乳体 ,螺纹导管较多 ,可见纤维
及表皮细胞壁处的纹孔及胞间连丝 ,为叶粉末的鉴
别点。
(2)理化鉴定:用紫外 -可见分光光度法对华
北紫丁香叶粉末的 4种不同极性溶剂提取液的研究
发现 ,水提取液 223.0 nm处有最大吸收;乙醇提取
液 241.5 nm处有最大吸收;氯仿提取液 243.0 nm
处有最大吸收;石油醚提取液 216.0nm处有最大吸
收 。 4种提取液在相同波长范围内有相似的吸收
峰 ,表明一些特征化合物的存在。
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(上接第 45页)
按表 1的梯度洗脱 ,指纹图谱中色谱峰高且多 ,效果
比较好 。
(4)取不同浓度的供试液分别进样 ,谱图显示 ,
500μg/mL供试液的峰强度太低 ,甚或检测不出;而
5 mg/mL以上的供试液则因浓度过大使不少峰强度
超过检测阈值 ,从而造成图谱中出现大量平头峰 。
经比较 , 5 mg/mL的供试液浓度最合适。
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第 5期 聂江力 , 等:华北紫丁香叶的生药学研究