全 文 ：中南药学 20 0 4年 1 2月第 2卷第 6 期 C e n tr a S lo ut hP ha r m a e y一D e e e m b e r 20 0 4, V o l . 2 N o
我们在以往研究中发现天花粉腹腔注射后 , 荷瘤小鼠瘤
体缩小 , 而且红细胞天然免疫功能也明显改善川 , 本实验在
试管内直接在卵巢癌等肿瘤患者的红细胞悬液中加天花粉溶
液 , 作用一定时间后 , 也可使红细胞天然免疫勃附酵母菌和
肿瘤细胞能力上升 , 为天花粉用于卵巢癌增强抗肿瘤的天然
免疫反应川提供了实验依据 。 本实验证明 , 红细胞可天然免
疫载附致病原的原理是酵母菌和癌细胞等靶细胞都可旁路激
活补体 , 结合有 C 3 b等补体成分 , 而红细胞 C R , ( CD 3。 ) 可
天然免疫勃附 叽 l。等补体分子 , 从而豁附在酵母菌和癌细胞
上 , 形成花环状 , 红细胞天然免疫勃附能力是很重要的指
标因 。 本实验证 明天 花粉 可对红 细胞 补体 受体 ( CR , 、
口 〕: : ) 豁附补体致敏酵母菌的能力有促进作用 , 而且这种促
进作用与天花粉呈剂量依赖性 , 说 明天花粉对红细胞 C RI
活性提高有作用 。 天花粉是否对红细胞其他天然免疫分子如
C DI
、 、 、 C从 5 、 C玖。 、 C玖 。等有促进作用还有待深入研究 。
中药天花粉具有引产 、 抗肿瘤 、 治疗艾滋病等多种疗
效困 , 天花粉引产机制本身有增强免疫排斥胎儿的原理存
在 , 因此 , 天花粉的免疫增强作用可贯穿在引产 、 抗肿瘤 、
抗感染的可能机制中 , 已引起国内外学者的关注川 。 从免疫
学多方面研究其治病机制是一重要领域周 。 我们在本文体外
实验证明天花粉可直接作用红细胞 CR : 活性 , 可使其天然
免疫赫附酵母菌和肿瘤细胞能力都增高 , 这种作用与剂量有
关 , 我们的两种试验又可说明天花粉对卵巢癌患者抗感染 、
抗肿瘤天然免疫都有增强作用 。 天花粉多糖可与红细胞膜糖
蛋白结合 , 激发红细胞膜 C R , 活性 。 天花粉蛋 白可嵌人细
胞膜改变膜有关天然免疫分子排列 , 使天然免疫分子活性改
变 , 红细胞 _ _巨不仅有 C R : 分子 , 而且还有其他多种天然免
疫分子 , 如红细胞的趋化因子受体 ( C从 3 ; ) , 也可与肿瘤细
胞分泌的 I L一 8等趋化因子免疫豁附而包绕肿瘤细胞联结叫 。
今后可利用荧光免疫流式细胞仪技术 , 深人探讨天花粉对红
细胞 C玖 。 、 (刀 2 3 4等天然免疫分子数量与活性的影响 。 我们
创建的以酵母菌和癌细胞为靶细胞的红细胞 (为效应细胞 )
天然免疫私附试验 , 新近已发展为血液抗感染 ) 〕 、 血液抗
肿瘤阳 〕的血液免疫反应路线图实验体系 , 可用于验证药物
的免疫机制研究 , 在这两种实验系统中 , 不仅可用天然免疫
豁附率做指标少 〕 , 而且可用效呵细胞激活天然免疫分子表达数量的流式细胞仪定量测定 , 债读者关注有关方法学研究的今后进展 。 一一
新疆雪莲花 6 个不同地理群体遗传关系的 R八P D 分析
吴霞 , , 刘庆华 l , 马永红 “ , 党荣理 2 ( ; . 新疆药物研究所 , 乌鲁木齐 8 3 。。。岛 .2 新疆军
齐 8 30 0 1 ] )
摘要 : 目的 建立新疆 6 个不 同地理群体的新疆雪莲花 ` S “ 哪似撇 艺~ lu( 、 }’a at aK ~ ` iK n…) 指纹图谱 , 进行遗传多样性分析 · 方法 通过 2 0 个 1。 碱基随机弓晰对新疆 6 个不 同地理群体的新疆雪莲花进行平合酶链反应 (麟 , 扩增 , 通过计算遗传相似性 系数 , 建立平均连接聚类法 (UP MGA , 聚类图
· 结果 共扩增出 1一03 个多态位今 建立了它们的基因组 ND A 指纹图谱 。 结论 不 同地理群体中存在丰富的遗传多样性 ; 相距越远 , 群体间相似性程度越低 。
基金项 目 : 国家重点科技攻关项 目
开发 T e l : ( 0 9 9 1 ) 2 8 32 4 2 3
( 20 0 0
一
K 0 1
一
0 5
一 0 2 ) 作者简介 ; 吴霞 ( 1 9 6 7一 ) , 女 , 博士 . 副研究员 , 从事天然药物的研究与
E
一
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Ce nt r a l S o u t h p h a r m a e y
.
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e e r nb e r 20 0 4
,
V o l
.
2 N o
.
6 中南药学 2 0 0 4 年 12 月第 2 卷第 6 期
关键词 : 新疆雪莲花 ; 遗传多样性 ; 随机引物扩增多态性 D N A ( R A P )D
中图分类号 : R 9 68 文献标识码 : A 文章编号 : 1 6 7 2一 2 9 81 ( 2 0 0 4 ) 0 6一 0 3 3 1一 0 3
R A P D a n a l y s i s o f g e n e t i e r e l a t i o n s h iP a m o n g S a u s s u r e a i n v o l u e r a t a
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A B S I卫 A〔!T : O B IE C IT 、 1￡ T o d e t e r m in e th e g e n e t i e r e la t io n s h ip o f S a u 、 s u r e a i , ,切 l u e ,叹 za K a r . o t K i n . f r o m s i x a r e a s
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D N A s o f S a u s : u er a 乞n切 l u c ar t a K a ,, . e t K i n . f r o m s ix a r e a s in X inj ia n g . R E S t几昭 A l xl p lif i e d r e s u lt s s h o w e d a t o t a l
r e e o r d o f 10 3 b a n d s
, a m o n g w h ie h 一0 3 ( 5 6 . 2 8% ) w e r e p o l界 1 10 r p h i e . B y c a l e u la t i n g t h e g e n e t i C S im i la r it y c o e f fi e i e n t ,
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, t h e l o w e r t h e d e g r e e o f e o m p a r a b i lit y a m o n g t h e P o p u la t io n
.
K E Y W (〕R DS : 撇 u 、 s u er a 艺n切 l u c ar t a ; g e n e t ie d iv e r s it y ; R少、 I〕D
雪莲花收载于 《本草纲目拾遗 》 , 即绵头雪莲花 、 大苞
雪莲花 、 水母雪莲花等的带花全株 。 其中大苞雪莲花又名新
疆雪莲花 ( S a u o u er a 动二 lu ( ar at K ar . e t iK n . ) , 主要分布
于天山南北坡川 , 是新疆特有的药用植物 , 具有散寒除湿 、
活血通络 、 抗炎镇痛等功效 , 民间用于治疗风湿性关节炎 、
妇科病等 。 药理实验证明 , 新疆雪莲花具有抗癌 、 扩张 血
管 、 降血压 、 抗疲劳等作用叫 。 近年来 , 国内对雪莲花有较
为深入的研究 , 主要是研究其化学成分 、 药理学 、 生态学 、
生物学 、 临床应用等 , 目前新疆雪莲花人工培育已初见成
效 。 为了进一步分析新疆雪莲花不同地理群体之间的遗传关
系 , 我们利用 R A P D 技术对新疆雪莲花 6 个地区的样品进
行了基因组 D N A 多态性分析 , 并建立了不同地理群体的
D N A 指纹图谱 。
1 仪器和材料
1
.
1 仪器与试剂
美国 P E 公司 5 7。。 型定量 P CR 仪 ; 美国 iB , R ad 公司
P
o
w er P A C 20 0 2
.
o A 型电泳仪 ; D N T P 和随机引物为上海
生物工程公司产品 ; 10 x P C R 缓冲液 、 M ar ke r 和 T aq 酶
(批号为 L o 、 C E A 30 A I弓) 为大连 T a K a R a 公司产品 ; A场ha
Im a g e: 2 2 0 0型凝胶成像系统 。
1
.
2 药材
研究药材采 自新疆各地 , 均为新疆雪莲花的新鲜幼枝
叶 。 新疆雪莲花的样品由新疆药物研究所刘庆华研究员鉴
定 , 具体见表 1 。
表 1 新疆雪莲花基本情况表
2 方法与结果
2
.
1 基因组 D N A 提取
取同一物种的 8一 20 株的幼嫩枝叶 , 粉碎混合均匀后称
取 3 9 , 经液 氮处理 , 采用高盐低 p H 值法川 提取基因组
D N A
。
2
.
2 引物选择
选取 40 个 10 碱基长度的寡核普酸随机引物 , 分别扩增
7个 D N A 样品 , 从中筛选出扩增性强 、 重复性好 、 多态性
高的 20 个引物 (见表 2 ) , 全部用于新疆雪莲花样品基因组
D N A 的扩增 。
表 2 R A P D 分析所用 的引物序列
引物号 序列 引物号 序列
5 1 G T T T C G C T C C 5 2 9 G G G T A A C G C C
5 8 G T C C A C A C G G 5 3 1 C A A T C G C C G T
5 10 C T G C T C C C A C 5 3 2 T C G G 《二C A T A G
5 12 C C T T G A C G C A 5 3 3 C A G C A C C C A C
5 1 5 C C A C C C T C T T 5 3 5 T T C C G A A C C C
5 1 7 A G G G A A C G 八G 5 3 6 A G C C A G C G A A
5 2 0 G G A C C C T T A C 5 3 7 G A C C G C T T C T
5 2 3 A G T C A G C C A C 5 38 A G G T G A C C G T
5 2 6 G G T C C C T C A ( 5 3 9 C A A A C G T C G G
5 2 7 G A A A C G G G T G 5 4 0 G T T G CG A丁 C C
序号
月甲了乃zǎ火曰只八厂O门O目年
采集地
巴里坤
焉者
天池
一号冰川
库车
水西沟
水西沟
栽种方式 样品植株数 采集时间
野生
野生
野生
野生
野生
野生
栽培
1O
1 1
16
1O
8
1 O
2 0
2 0 0 1
2 0 0 1
2 0 0 1
2 0 0 1
2 00 1
2 0 0 1
2 0 0 1
注 : G . 鸟凛吟 ; T . 胸腺嘻陡 ; C . 胞嘻陡 ; A 腺漂吟
2
.
3 P C R 反应
反应总体积为 25 夙 。 扩增体系为 : 10 又 P C R 缓冲液
2
.
5 拜L ( 2 5
~
0 1
·
I 一 1 ) , M g C I: 2 拌I J ( 1 0 nr
o l
·
L
一 ’ ) ,
d N T P I 拼L ( 2 5 n g · 拼L 一 ` ) , 模板 D N A I 拼I J ( 1 0 拼m o l ·
L
一 ` ) , 引物 1 拜L ( S U · 拌I子一 ` ) , T a q D N A 聚合酶 0 . 3 拼L ,
重蒸水 H Z 0 17 . 3 拌L 。 扩增程序为 : 95 ℃预变性 2 m in , 然
后进行以下 40 个循环 : 94 ℃变性 40 5 , 3 6 ℃退火 6 0 5 , 72
℃延伸 120 5 , 最后 72 ℃延伸 7 m in 。 取 10 胖L 扩增产物在
1
.
5%琼脂糖凝 胶 中电泳 , EB 染色后 , 在 iA p h a Im ag er
2 2。。 型凝胶成像系统上观察并保存结果 。
IC曰dO月任ù以é八口z
撇靴
中南药学 2 0 0 4 年 2 2 月第 2 卷第 6期 Ce n t r a lS o u t h Ph a rm a e y{ e De em b e r 2 0 0 4 , V o l . 2 N o ·
2
.
4 数据处理
电泳图谱中的每一条带均代表了与模板 D N A 互补的一
对结合位点 , 可记为 1 个位点 , 根据分子质量标准对照反应
产物在凝胶上的对应位置 , 估计扩增产物的分子质量大小 ,
根据计算机分析的要求 , 将 R A I〕 1) 分析结果转换为数字形
式 , 每条 D N A 谱带作为 1 个单位 , 有带的赋值为 1 , 无带
的赋值为 。 , 以 。 l/ 矩阵输人计算机 , 计算遗传系数 F ( F
一 ZN ab / N a + N b) 和遗传距离 D ( D一 1一 F ) , 利用 U P G -
M A 法进行聚类分析 。
2
.
5 R A P D 产物的多态性
在对新疆雪莲花 6 个不同地区的 D N A 样品进行 R A F D
分析中 , 采用的 4。条引物中有 20 条得到良好的结果 。 图 1
列举了引物 5 12 扩增产物的电泳图谱 。 通过分析发现 20 条
引物共检测到 18 3 个位点 , 位点范围在 20 一 2 50 0 bp 。 一
号冰川新疆雪莲花位点最多 , 共计 149 个 , 天池新疆雪莲花
最少 , 仅 1 16 个 。 在所有位点中多态位点 103 个 , 占总位点
的 56 . 28 % , 平均每条引物扩增出 5 . 15 条多态位点 。 这说
明新疆雪莲花具有一定的遗传多样性 。
表 3 不同地理群体雪莲花遗传距离矩阵
巴里坤 焉看 天池 一号冰川 库车 水西沟
巴里坤 1
焉省
天池
一号冰川
库车
水西沟
水西沟 (栽培 )
o
· ` 1 9 7 。 · ` 6 3 9 0「4 6 9 4 。 · 。 4 9 8 。 · 2 6 0 1
1 。 · ` 7 8 9 0
1
·
3 7 5 9 。 · 。 7 5 7 。 · ` 2 , O
` 。
l
·
3 4 3 4 。 · 。 , ` o 。 · ` 4 6 `
一` 。 · 3 5 3 6 。 · 艺4 3兰一 ` 。 `竺
水西沟
(栽培 )
0
.
1 5 1 2
0
.
1 7 2 0
0
.
1 9 4 8
0
.
2 3 8 9
0
.
2 7 1 2
0 2 0 0 0
通过聚类分析可以看出 , 这
如图 2 所示的树状关系图 。
巴里坤
-
- 一 - - - ,
焉奢
库车
天池
水西沟
水西沟 (栽培 )
一号冰川
0 04 0 08 0 12 01 6 0 2 0 0 24 0 28 03 2 0 36 0 4 0 0 4 0 48
图 2 聚类分 }
3 讨论
通过以上研究结果可以看出
基因图谱有一定的差异 , 产地距
培种与同一产地的野生种 , 基因
产新疆雪莲花与其他地区产新疆
由于该地区新疆雪莲花长期适应
形成了独特的遗传性状的关系 。
树状图
, 不同地区产的新疆雪莲花
离越远 , 差异越大 。 人工栽
图谱有一定差异 。 一号冰川
雪莲花差异较大 , 这可能是
寒冷气候及长年冰雪环境 ,
图 1 引物 5 12 对雪莲花不同产地样品的扩增图谱
M
.
1D 2 0 0。 + D L 1 5 0 0 O M ar ke r ; 1
. 巴里坤雪莲花 ; 2 . 焉看雪
莲花 ; 3 . 天池雪莲花 ; 4 . 一号冰川雪莲花 ; 5 . 库车雪莲花 ; 6 . 水
西沟雪莲花 ; 7 . 水西沟人工栽培雪莲花
2
.
6 不 同地理群体遗传关系分析
据 F 一 ZN ab / N a + N b ( N ab 为两者共同的带数 , N a 、
N b 分别为两者特有的带数 ) 计算相似系数 , 遗传距离 D 为
1一 F , 列出遗传距离矩阵 (见表 3) 。
全考名燮 一川 李君山 , 朱兆仪 , 蔡少青 雪年花类商品药材调查 匕J引· 中国中药杂志 , 2 00 0 , 2 5 ( 8 , : 4 6 T一周 赵德修 · 赵丽丽 雪莲花 的研邢进展 LJ」· 中草药 ’ `黝 ’ 艺丫
( 6 ,
, 3丫艺 一川 王培划“ , 黄丰 , 周联 , 等 植冲中药材总 ND A 提取方法 的比较 [ J〕. 中药新药与临床药理 , 一1 9 9 9 , 10 ( l ) : 1吕
撷沙坦分散片与胶囊在健康人体的相对生物和用度研究
张志华 ` , 丁 劲松 2 ” , 欧阳利龙` , 郭欲 2 , 何周康` (1 . 湖南省儿童医 院 , 长沙 4 10 0
沙 4 10 0 13 )
摘要 : 目的 研究濒沙坦分散片和胶囊在人体 内的相对生物利用度 。 方法
机交叉方式分别口服撷 沙坦分散片或胶囊 1 6O m g 后不 同时间点取血 , 血李
法测定 , 比较两者主要药物动力学参数的差异和相对生物利 用度 。 结果 兰
为 ( 1 7 26 8 . 2士 5 61 1 . 6 ) 、 ( 1 7 7 23 . 1士 5 8 44 . 2 ) 拼g · h · L一 1 , cma x均值李
73 0
.
7 ) 拜g · L 一 ` , 实测 t m a x 均值分别 为 ( 1 . 2士 0 . 5 ) 、 ( 2 . 2士 0 . 4 ) h , 方
作者简介 : 张志华 ( 19 7 2一 ) , 女 , 主管药师 , 主要从事临床药学工作
新制剂及其生物有效性评价工作 T e l : ( 0 7 3 1) 2 6 5 0 3 6 7 , 1 3 9 74 8 3 8 7 7 1 E一m a l l : D l n 团 50 2 2 1@ 1 6 3 .介粼